自身免疫病及免疫檢驗(yàn)

人民衛(wèi)生出版社免疫學(xué)檢驗(yàn)當(dāng)前第1頁\共有49頁\編于星期四\11點(diǎn)第二十五章自身免疫病及免疫檢驗(yàn)人民衛(wèi)生出版社當(dāng)前第2頁\共有49頁\編于星期四\11點(diǎn)目

錄概述1自身免疫病的發(fā)病機(jī)制2自身免疫病檢驗(yàn)3自身抗體檢測實(shí)驗(yàn)選擇的原則4人民衛(wèi)生出版社當(dāng)前第3頁\共有49頁\編于星期四\11點(diǎn)第一節(jié)

概述一、基本知識自身耐受(self-tolerance)正常情況下，免疫系統(tǒng)對宿主自身的組織和細(xì)胞不產(chǎn)生免疫應(yīng)答。自身免疫(autoi

munity)當(dāng)某種原因使自身耐受性破壞時(shí)，免疫系統(tǒng)就會對自身組織成分、細(xì)胞成分及其產(chǎn)物發(fā)生免疫應(yīng)答。人民衛(wèi)生出版社當(dāng)前第4頁\共有49頁\編于星期四\11點(diǎn)3.自身免疫病(autoi

mune

disease，AID)自身免疫應(yīng)答過強(qiáng)或持續(xù)時(shí)間過久，表現(xiàn)為質(zhì)和量的異常，所產(chǎn)生的自身抗體和（或）自身致敏淋巴細(xì)胞對表達(dá)自身靶抗原的細(xì)胞和組織發(fā)動攻擊，導(dǎo)致?lián)p傷或功能障礙，并出現(xiàn)相應(yīng)臨床癥狀。人民衛(wèi)生出版社當(dāng)前第5頁\共有49頁\編于星期四\11點(diǎn)二、自身免疫病的分類人民衛(wèi)生出版社當(dāng)前第6頁\共有49頁\編于星期四\11點(diǎn)按病程分為急性和慢性兩種按病因清楚與否分為原發(fā)性與繼發(fā)性兩種按受累的解剖系統(tǒng)分為結(jié)締組織病、神經(jīng)肌肉疾病、消化系統(tǒng)病和內(nèi)分泌疾病等按自身抗原的分布范圍分為器官特異性和非器官特異性兩類分類疾病結(jié)締組織系統(tǒng)性紅斑狼瘡、干燥綜合征、類風(fēng)濕性關(guān)節(jié)炎、混合性結(jié)締組織病內(nèi)分泌系統(tǒng)橋本甲狀腺炎、Graves病、Addison病、胰島素依賴性糖尿病消化系統(tǒng)萎縮性胃炎、潰瘍性胃炎、原發(fā)性膽汁性肝硬化血液系統(tǒng)惡性貧血、自身免疫性溶血性貧血、特發(fā)性血小板減少性紫癜心血管系統(tǒng)風(fēng)濕性心肌炎泌尿系統(tǒng)腎小球腎炎呼吸系統(tǒng)特發(fā)性肺纖維化神經(jīng)系統(tǒng)重癥肌無力、多發(fā)性神經(jīng)炎皮膚蕁麻疹按發(fā)病部位的解剖系統(tǒng)分類人民衛(wèi)生出版社當(dāng)前第7頁\共有49頁\編于星期四\11點(diǎn)器官特異性自身免疫病器官非特異性自身免疫病患者的病變常局限于某一特定的器官，由對器官的特異性抗原的免疫應(yīng)答引起全身性或系統(tǒng)性自身免疫性疾?。换颊叩牟∽兛梢娪诙喾N器官及結(jié)締組織（結(jié)締組織病或膠原?。┌醋陨砜乖姆植挤秶诸惾嗣裥l(wèi)生出版社當(dāng)前第8頁\共有49頁\編于星期四\11點(diǎn)病

名自身抗原橋本甲狀腺炎甲狀腺球蛋白和甲狀腺微粒體甲狀腺功能亢進(jìn)(Graves病)TSH受體Addison病腎上腺皮質(zhì)細(xì)胞自身免疫性萎縮性胃炎胃壁細(xì)胞、內(nèi)因子潰瘍性結(jié)腸炎結(jié)腸黏膜細(xì)胞重癥肌無力乙酰膽堿受體交感性眼炎眼晶狀體蛋白胰島素依賴型糖尿病胰島β細(xì)胞胰島素抵抗型糖尿病胰島素受體原發(fā)性膽汁性肝硬化小膽管上皮細(xì)胞人民衛(wèi)生出版社當(dāng)前第9頁\共有49頁\編于星期四\11點(diǎn)器官特異性病

名自身抗原SLE細(xì)胞核成分、細(xì)胞漿成分RA變性IgG、類風(fēng)濕相關(guān)的核抗原SS涎腺上皮細(xì)胞混合性結(jié)締組織病細(xì)胞核(RNP)自身免疫性溶血性貧血紅細(xì)胞特發(fā)性血小板減少性紫癜血小板特發(fā)性白細(xì)胞減少癥白細(xì)胞硬皮病細(xì)胞核蛋白、細(xì)胞核染色體著絲點(diǎn)多發(fā)性肌炎細(xì)胞核蛋白人民衛(wèi)生出版社當(dāng)前第10頁\共有49頁\編于星期四\11點(diǎn)器官非特異性三、自身免疫病的共同特點(diǎn)人民衛(wèi)生出版社當(dāng)前第11頁\共有49頁\編于星期四\11點(diǎn)血清中有自身抗體或自身反應(yīng)性致敏T淋巴細(xì)胞。自身抗體和（或）自身反應(yīng)性T細(xì)胞作用于靶抗原所在的組織細(xì)胞，導(dǎo)致組織損傷和功能障礙?？蓮?fù)制出與AID相似的動物模型，并可通過血清或致敏的淋巴細(xì)胞使疾病被動轉(zhuǎn)移。有一定的遺傳傾向。病情轉(zhuǎn)歸與自身免疫反應(yīng)的強(qiáng)度密切相關(guān)。部分自身免疫病好發(fā)于女性，且發(fā)病率隨年齡增長而上升。免疫抑制劑治療有效但不能根治。一、自身抗原形成第二節(jié)自身免疫病的發(fā)病機(jī)制1.隱蔽抗原的釋放2.自身抗原改變交感性眼炎人民衛(wèi)生出版社當(dāng)前第12頁\共有49頁\編于星期四\11點(diǎn)3.分子模擬4．表位擴(kuò)展人民衛(wèi)生出版社當(dāng)前第13頁\共有49頁\編于星期四\11點(diǎn)T、B細(xì)胞的異?；罨疊細(xì)胞的多克隆激活調(diào)節(jié)性T細(xì)胞的功能異常MHC-II類分子異常表達(dá)二、免疫細(xì)胞和免疫調(diào)節(jié)功能的異常人民衛(wèi)生出版社當(dāng)前第14頁\共有49頁\編于星期四\11點(diǎn)三、遺傳因素自身免疫病 HLA

基因人民衛(wèi)生出版社當(dāng)前第15頁\共有49頁\編于星期四\11點(diǎn)相關(guān)系數(shù)B27強(qiáng)直性脊柱炎全身性紅斑狼瘡1型糖尿病類風(fēng)濕性關(guān)節(jié)炎Graves病橋本氏甲狀腺炎多發(fā)性硬化重癥肌無力87．45．8104．2334．12．5DR2/DR3DR3/DR4DR4

DR3

DR5

DR2

DR3HLA基因與自身免疫病相關(guān)性舉例四、生理因素自身免疫病的發(fā)病率隨年齡增長呈上升趨勢；自身免疫病的發(fā)病也具有明顯的性別差異，女性發(fā)病率較高五、環(huán)境因素自身免疫病的發(fā)生與日曬、潮濕、寒冷等環(huán)境因素可能有關(guān)。人民衛(wèi)生出版社當(dāng)前第16頁\共有49頁\編于星期四\11點(diǎn)1.自身抗體介導(dǎo)細(xì)胞破壞病理機(jī)制：II型超敏反應(yīng)常見疾?。盒律鷥喝茇殹⒅匕Y肌無力、

Graves病六、自身免疫病的病理損傷機(jī)制人民衛(wèi)生出版社當(dāng)前第17頁\共有49頁\編于星期四\11點(diǎn)自身免疫性溶血性貧血人民衛(wèi)生出版社當(dāng)前第18頁\共有49頁\編于星期四\11點(diǎn)重癥肌無力人民衛(wèi)生出版社當(dāng)前第19頁\共有49頁\編于星期四\11點(diǎn)Graves病人民衛(wèi)生出版社當(dāng)前第20頁\共有49頁\編于星期四\11點(diǎn)3.自身反應(yīng)性T細(xì)胞引發(fā)炎癥性損傷病理機(jī)制：IV型超敏反應(yīng)人民衛(wèi)生出版社當(dāng)前第21頁\共有49頁\編于星期四\11點(diǎn)2.循環(huán)免疫復(fù)合物介導(dǎo)組織損傷病理機(jī)制：III型超敏反應(yīng)第三節(jié)

自身免疫病檢驗(yàn)一、自身抗體的檢測（一）抗核抗體檢測抗核抗體（antinuclear

antibody，ANA)是以真核細(xì)胞的核成分為靶抗原的自身抗體的總稱；在某些因素作用下改變細(xì)胞核某些成分性質(zhì)，激發(fā)機(jī)體產(chǎn)生許多抗不同核成分的抗體。人民衛(wèi)生出版社當(dāng)前第22頁\共有49頁\編于星期四\11點(diǎn)ANA主要是IgG，也有IgM、IgA、IgD和IgE；ANA無器官特異性和種屬特異性；ANA主要存在于血清中；人民衛(wèi)生出版社當(dāng)前第23頁\共有49頁\編于星期四\11點(diǎn)將檢出ANA作為AID存在的依據(jù)。抗DNA抗體：抗dsDNA/抗nDNA、抗ssDNA/抗dDNA等抗組蛋白抗體(AHA)：抗H1、抗H2A、抗H2B、

抗H3、抗H4抗體等抗非組蛋白抗體：抗nRNP/抗U1RNP、抗Scl-70、抗SSA、抗Sm、抗SSB、抗Jo-1、抗Rib抗體、AnuA、抗DNP、抗DM53抗體抗RANA抗體、抗著絲點(diǎn)、抗Ku抗體等抗核仁抗體：抗PM-Scl抗體、抗Th/To抗體、抗U3-RNP、抗4-6-S-RNA抗體等1.ANA的類型和臨床意義ANA譜人民衛(wèi)生出版社當(dāng)前第24頁\共有49頁\編于星期四\11點(diǎn)①抗天然DNA

(native

DNA,nDNA)抗體，又稱抗雙鏈DNA(double

stranded

DNA,dsDNA)抗體。對SLE有高特異性;SLE診斷標(biāo)準(zhǔn)之一緩解期降低藥物療效抗dsDNA抗體70%～90%SLE活動期增高②抗變性DNA

(denatured

DNA,dDNA)抗體，又稱抗單鏈DNA(single

stranded

DNA,ssDNA)抗體?？笵NA抗體人民衛(wèi)生出版社當(dāng)前第25頁\共有49頁\編于星期四\11點(diǎn)抗組蛋白抗體（anti-histonic

antibody,AHA）：由H1、H2A、H2B、H3和H4五個(gè)亞單位，各自都有特異性抗體；AHA檢出百分率抗dsDNA501009070藥物誘導(dǎo)性狼瘡只能檢出此SLEAHAAHA人民衛(wèi)生出版社當(dāng)前第26頁\共有49頁\編于星期四\11點(diǎn)抗組蛋白抗體可提取性核抗原(extractable

nuclear

antigen，ENA)是鹽水可提取性核抗原的總稱，是非組蛋白的核蛋白，屬酸性核蛋白抗原，由許多小分子量的RNA和多

肽組成。抗ENA抗體人民衛(wèi)生出版社當(dāng)前第27頁\共有49頁\編于星期四\11點(diǎn)對類風(fēng)濕有特異診斷價(jià)值的ENA：人民衛(wèi)生出版社當(dāng)前第28頁\共有49頁\編于星期四\11點(diǎn)√

抗nRNP(nuclear

RNP,nRNP)抗體；√

抗Sm抗體；√

抗SSA抗體；√

抗SSB抗體；√

抗Scl-70抗體；√

抗Jo-1抗體；√

抗核糖體抗體。核蛋白(DNP)由DNA和蛋白質(zhì)組成。DNP抗原有不溶性及可溶性兩種，分別產(chǎn)生相應(yīng)的抗體。檢出百分率抗DNP20406080SLE非活動期SLE活動期抗DNP抗DNP抗不溶性DNP抗體100RA滑膜液中抗DNP抗可溶性DNP抗體（1）抗DNP抗體人民衛(wèi)生出版社當(dāng)前第29頁\共有49頁\編于星期四\11點(diǎn)抗核小體抗體（anti-nucleosome

antibody，AnuA)核小體是細(xì)胞核染色質(zhì)的基本組成單位;細(xì)胞凋亡致核小體大量蓄積，并誘導(dǎo)B細(xì)胞產(chǎn)生AnuAAnuA是SLE特異的標(biāo)志性抗體。抗核小體抗體抗dsDNA抗體抗dsDNA和抗Sm陰性的SLE陽性率為60%～80%，特異性＞97%。（2）抗核小體抗體人民衛(wèi)生出版社當(dāng)前第30頁\共有49頁\編于星期四\11點(diǎn)疾病ANA（%）疾病ANA（%）SLE≥95SS70～80MCTD≥95PM/DM30PSS85～95RA20～30人民衛(wèi)生出版社當(dāng)前第31頁\共有49頁\編于星期四\11點(diǎn)常見AID的ANA陽性檢出率2.ANA的檢測方法稀釋患者血清可做定量檢測，1:80稀釋仍呈陽性對診斷SLE有較大參考價(jià)值。（1）間接熒光免疫法人民衛(wèi)生出版社當(dāng)前第32頁\共有49頁\編于星期四\11點(diǎn)核型熒光圖形抗體相關(guān)疾病周邊型核周環(huán)狀熒光抗dsDNASLE、慢活肝炎均質(zhì)型核呈均質(zhì)熒光抗DNA、AHA、AnuASLE、RA、PSS、慢性肝病斑點(diǎn)型核內(nèi)顆粒狀熒光抗ENAMCTD、SLE、PSS、SS、PM核仁型核仁有熒光抗核仁抗體PSS、雷諾現(xiàn)象、SLE著絲點(diǎn)型核漿細(xì)小相同顆粒熒光抗著絲點(diǎn)PSS、CREST綜合征人民衛(wèi)生出版社當(dāng)前第33頁\共有49頁\編于星期四\11點(diǎn)抗核抗體核型與相關(guān)疾病均質(zhì)型抗核抗體核型人民衛(wèi)生出版社當(dāng)前第34頁\共有49頁\編于星期四\11點(diǎn)著絲點(diǎn)型核仁型斑點(diǎn)型用間接ELISA檢測抗dsDNA抗體、抗組蛋白抗體和抗核小體抗體。（2）ELISA法人民衛(wèi)生出版社當(dāng)前第35頁\共有49頁\編于星期四\11點(diǎn)（3）免疫印跡法SDS-PAGE分離形成分子大小不同區(qū)帶電轉(zhuǎn)移PVDF膜或NC膜加待檢血清抗ENA與相應(yīng)抗原特異結(jié)合抗人IgG·HRPENA—抗ENA—抗人IgG·HRP顯色并判讀結(jié)果人民衛(wèi)生出版社當(dāng)前第36頁\共有49頁\編于星期四\11點(diǎn)類風(fēng)濕因子(rheumatoid

factor，RF):抗變性IgG的自身抗體，可為19S的IgM，也可為7S的IgG和IgA?？膳c人變性IgG結(jié)合，但不與正常IgG發(fā)生凝集。RF可在RA患者檢出，約70%～90%的血清、約60%的滑膜液可檢出IgG類的RF；人民衛(wèi)生出版社當(dāng)前第37頁\共有49頁\編于星期四\11點(diǎn)（二）類風(fēng)濕因子測定IgG類抗體與相應(yīng)抗原結(jié)合后發(fā)生變性；炎癥過程亦可發(fā)生IgG變性，構(gòu)成自身抗原，刺激機(jī)體產(chǎn)生各種抗IgG抗體；人民衛(wèi)生出版社當(dāng)前第38頁\共有49頁\編于星期四\11點(diǎn)滑膜液中的IgG類RF與變性IgG結(jié)合可形成中等大小的免疫復(fù)合物，相比血清中的IgM類RF更易致病。RF檢測方法1.間接膠乳凝集試驗(yàn)

最常采用的檢測方法。以吸附在聚苯乙烯膠乳顆粒上的IgG作診斷試劑，與待檢血清中的RF結(jié)合后，出現(xiàn)膠乳凝集顆粒。此法的靈敏度和特異性不高，且只能檢出血清中的IgM類的RF。人民衛(wèi)生出版社當(dāng)前第39頁\共有49頁\編于星期四\11點(diǎn)稀釋待檢血清至一定濃度后，加入定量的變性IgG診斷試劑，即用透射比濁或速率散射比濁儀，檢測血清中的RF。此法快速、敏感性高、精密度高、穩(wěn)定性好、可定量分析，但仍只能檢測IgM類RF。2.免疫比濁法人民衛(wèi)生出版社當(dāng)前第40頁\共有49頁\編于星期四\11點(diǎn)IgM、IgG和IgA類RF可用ELISA檢測，臨床上多采用雙抗原夾心法或間接ELISA進(jìn)行測定。3.ELISA法人民衛(wèi)生出版社當(dāng)前第41頁\共有49頁\編于星期四\11點(diǎn)人民衛(wèi)生出版社（三）其他自身抗體測定其他自身抗體的檢測方法與臨床意義當(dāng)前自身抗體的類型檢測方法臨床意義抗甲狀腺球蛋白抗體(A-TG)熒光免疫法、ELISA、RIA橋本甲狀腺炎抗甲狀腺過氧化物酶抗體ELISAGraves病,橋本甲狀腺炎抗乙酰膽堿受體抗體(AchR-Ab)ELISA、RIA重癥肌無力抗平滑肌抗體(SMA)熒光免疫法、ELISA、RIA自身免疫性肝炎,慢性活動性肝炎,原發(fā)性膽汁性肝硬化抗線粒體抗體(AMA)熒光免疫法、ELISA、RIARA，SS，SLE，原發(fā)性膽汁性肝硬化,慢性活動性肝炎,持續(xù)性肝阻塞抗胃壁細(xì)胞抗體熒光免疫法惡性貧血抗胰島素抗體（IAA）ELISA胰島素依賴性糖尿病抗精子抗體（AsAb）ELISA、熒光免疫法不育癥,不孕癥抗紅細(xì)胞抗體直接凝集試驗(yàn)、Coombs試驗(yàn)新生兒溶血,自身免疫性溶血性貧血抗血小板抗體ELISA法、ABC-ELISA法原發(fā)性血小板減少性紫癜、輸血史抗心磷脂抗體（ACA）RIA、ELISASLE，血栓,自發(fā)性流產(chǎn),血小板減少抗腎小球基底膜抗體(GBM-Ab)第42頁\共有49頁\編于星期四\11點(diǎn)熒光免疫法Goodpasture綜合征,狼瘡腎炎二、細(xì)胞檢查人民衛(wèi)生出版社當(dāng)前第43頁\共有49頁\編于星期四\11點(diǎn)（一）淋巴細(xì)胞檢測1．特異性致敏淋巴細(xì)胞如淋巴細(xì)胞轉(zhuǎn)化試驗(yàn)或吞噬細(xì)胞移動抑制試驗(yàn)2．淋巴細(xì)胞數(shù)量和比例檢測淋巴細(xì)胞的總數(shù)、T、B細(xì)胞分類與計(jì)數(shù)、CD4/CD8亞群比例等進(jìn)行（二）狼瘡（lupus

erythmatosus，LE）細(xì)胞試驗(yàn)人民衛(wèi)生出版社當(dāng)前第44頁\共有49頁\編于星期四\11點(diǎn)LE細(xì)胞為胞漿內(nèi)含有大塊狀聚合DNA的中性粒細(xì)胞。有75％～80％的SLE病人LE呈陽性，RA、結(jié)節(jié)性動脈炎、多發(fā)性硬化癥、硬皮病、部分肝炎、皮肌炎和變態(tài)反應(yīng)病等偶爾亦可呈陽性反應(yīng)。三、免