衛(wèi)健委臨檢中心 全自動生化分析儀年度校準(zhǔn) 柯培鋒 廣東省中醫(yī)院

全自動生化分析儀年度校準(zhǔn)柯培鋒廣東省中醫(yī)院廣東省中醫(yī)藥科學(xué)院廣州中醫(yī)藥大學(xué)第二臨床醫(yī)學(xué)院主要內(nèi)容1、儀器年度校準(zhǔn)的執(zhí)行標(biāo)準(zhǔn)2、實(shí)驗(yàn)室在儀器年度校準(zhǔn)中的工作流程3、主要儀器廠商儀器年度保養(yǎng)介紹4、儀器年度校準(zhǔn)中的關(guān)鍵技術(shù)要求及范例5、儀器年度校準(zhǔn)后應(yīng)如何驗(yàn)證檢測系統(tǒng)6、小結(jié)1、儀器年度校準(zhǔn)的執(zhí)行標(biāo)準(zhǔn)三甲醫(yī)院評審要求：9主管部門定期對開展項(xiàng)目和儀器、試劑管理進(jìn)行監(jiān)督檢查，對存在問題及時改進(jìn)；（西醫(yī)、中醫(yī)）9制定并嚴(yán)格執(zhí)行臨床檢驗(yàn)項(xiàng)目標(biāo)準(zhǔn)操作規(guī)程和檢驗(yàn)儀器的標(biāo)準(zhǔn)操作、維護(hù)規(guī)程；（西醫(yī)）9對需要校準(zhǔn)的檢驗(yàn)儀器、檢驗(yàn)項(xiàng)目和對臨床檢驗(yàn)結(jié)果有影響的輔助設(shè)備定期進(jìn)行校準(zhǔn)；（西醫(yī)）9有定期校準(zhǔn)、維修維護(hù)記錄。（西醫(yī)）1、儀器年度校準(zhǔn)的執(zhí)行標(biāo)準(zhǔn)1、儀器年度校準(zhǔn)的執(zhí)行標(biāo)準(zhǔn)要求：1、正常工作環(huán)境條件；2、雜散光；3、吸光度線性范圍；4、吸光度準(zhǔn)確度；5、吸光度的穩(wěn)定性；6、吸光度的重復(fù)性；7、溫度準(zhǔn)確度與波動度；8、樣品攜帶污染率；9、加樣準(zhǔn)確度與重復(fù)性；10、臨床項(xiàng)目的批內(nèi)精密度；11、外觀要求；12、環(huán)境試驗(yàn)要求；13、安全要求。2、實(shí)驗(yàn)室在年度校準(zhǔn)中的工作流程制定合適的年度校準(zhǔn)計(jì)劃儀器年度校準(zhǔn)又叫儀器性能確認(rèn)周期最大為1年以下幾種情況也需要做年度校準(zhǔn)：

a.新安裝儀器b.儀器位置變動

c.儀器進(jìn)行大保養(yǎng)d.工程師在服務(wù)過程中判斷認(rèn)為需要審核廠家校準(zhǔn)程序的適用性廠家校準(zhǔn)程序：版本是否正確審核廠家校準(zhǔn)人員資質(zhì)培訓(xùn)、授權(quán)內(nèi)容是否與服務(wù)項(xiàng)目一致？校準(zhǔn)報告的簽收審核出具報告人員資質(zhì)報告內(nèi)容是否和校準(zhǔn)內(nèi)容一致報告內(nèi)容是否涵蓋了加樣、溫控、檢測三大系統(tǒng)校準(zhǔn)報告數(shù)據(jù)的可追溯性根據(jù)科室程序文件規(guī)定人員簽字3、主要儀器廠商儀器年度保養(yǎng)介紹以羅氏Cobas

6000及其Cobas

c501為例4、儀器年度校準(zhǔn)中的關(guān)鍵技術(shù)要求及范例1、正常工作環(huán)境條件；2、雜散光；3、吸光度線性范圍；4、吸光度準(zhǔn)確度；5、吸光度的穩(wěn)定性；6、吸光度的重復(fù)性；7、溫度準(zhǔn)確度與波動度；8、樣品攜帶污染率；9、加樣準(zhǔn)確度與重復(fù)性；10、臨床項(xiàng)目的批內(nèi)精密度；11、外觀要求；

12、環(huán)境試驗(yàn)要求；13、安全要求。雜散光雜散光：Photometer

Check?法說明：用蒸餾水作參比，在340nm處測定50g/L的亞硝酸鈉標(biāo)準(zhǔn)溶液的吸光度.要求：吸光度不小于2.3。操作：1:選定1個比色杯并打印該比色杯空白值(截屏打印)，記錄340nm的杯空 白值在表中“空白”;2:將沖洗站拆下并并掛在掛鉤上，確保此比色杯內(nèi)干凈并干燥；3:用加樣槍吸取100ul的50g/L的亞硝酸鈉標(biāo)準(zhǔn)溶液,加入該比色杯中;4:進(jìn)入診斷,執(zhí)行photometercheck---Sequence,設(shè)定比色杯號、遍數(shù)為3， 然后執(zhí)行;5:打印結(jié)果，并記錄340nm的Mean在表格中“待測物”;6:裝回沖洗站,確認(rèn)位置正確。檢查結(jié)果是否符合要求.記錄：雜散光(340nm)吸光度cuvette#2空白

0.671待測物3.03原液OD值2.359結(jié)論：符合要求。吸光度線性范圍吸光度線性范圍吸光度線性范圍：Photometer

Check法說明:用520nm測定線性范圍，采用生化線性標(biāo)準(zhǔn)溶液3一套（3- 1/2/3/4/5，5個濃度梯次）作為色素液，每個濃度測定5次，計(jì) 算線性相關(guān)系數(shù)符合要求要求:線性相關(guān)系數(shù)>=0.9995操作:1:選定5個比色杯并打印該比色杯空白值(截屏打印)，記錄

520nm的杯空白值在表中“空白”;2:將沖洗站拆下并并掛在掛鉤上，確保此比色杯內(nèi)干凈并干燥；3:用加樣槍吸取100ul線性標(biāo)準(zhǔn)溶液3-1,加入第1個比色杯中;4:進(jìn)入診斷,執(zhí)行photometer

check---Sequence,設(shè)定比色杯號、 遍數(shù)為5，然后執(zhí)行;5:打印結(jié)果，并記錄520nm的Mean在表格中“待測物”;重復(fù)3-4步驟，依次加入線性標(biāo)準(zhǔn)溶液3-2,3-3,3-4,3-5到其 他4個比色杯中6:裝回沖洗站,確認(rèn)位置正確.檢查線性相關(guān)系數(shù)是否符合 要求。記錄:吸光度線性范圍(520nm)線性C

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空白

待測物原液

濃度O

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值 （

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L)

相關(guān)系數(shù)310.4527

1.2788

0.8261110.45280.61500.16222160.45200.77620.32424210.45220.94070.488561.0000260.45281.11160.6588810結(jié)論：符合要求。11個點(diǎn)吸光度線性以蒸餾水作參比，用重鉻酸鉀、0.05mol/L的溶液配制成色素原 液，并將原液按0/10、1/10、2/10、3/10、4/10、5/10、6/10、 7/10、8/10、9/10、10/10的比例稀釋，共獲得11個濃度梯度， 在340nm處測定上述溶液的吸光度，每個濃度測定5次，計(jì)算平均值。以相對濃度為橫坐標(biāo)，吸光度平均值為縱坐標(biāo)，用最小二乘法對0/10、1/10、2/10和3/10這4個點(diǎn)進(jìn)行線性擬合，并計(jì)算5-11點(diǎn)的相對偏倚Di。1個點(diǎn)吸光度線性吸光度準(zhǔn)確度吸光度準(zhǔn)確性：Photometer

Check法說明:以蒸餾水作參比,在分析儀上用340nm測定生化吸光度標(biāo)準(zhǔn)物質(zhì)1-1和1- 2.重復(fù)測量三次,計(jì)算三次測量值的算術(shù)平均值和標(biāo)準(zhǔn)值之差（即為誤 差）。要求:生化吸光度標(biāo)準(zhǔn)物質(zhì)1-1,吸光度見標(biāo)準(zhǔn)物質(zhì)證書,允許誤差為±0.025; 生化吸光度標(biāo)準(zhǔn)物質(zhì)1-2,吸光度見標(biāo)準(zhǔn)物質(zhì)證書,允許誤差為±0.07;操作:1:選定2個比色杯，打印并記錄相應(yīng)比色杯空白值340nm在表中的“空 白”中；2:將沖洗站拆下并并掛在掛鉤上，確保比色杯干凈并且干燥；3:分別加入100ul標(biāo)準(zhǔn)物質(zhì)1-1，1-2到各自比色杯中;4:進(jìn)入診斷，選擇PhotometerCheck---Sequence，設(shè)定待測比色杯號， 重復(fù)3遍；5:打印結(jié)果，記錄Mean在下表的“待測物”中;6:裝回沖洗站,確認(rèn)位置正確;檢查是否符合要求;記錄:準(zhǔn)確性標(biāo)準(zhǔn)物質(zhì)1‐2(340nm)Cuvette#空白待測物標(biāo)物1‐2標(biāo)準(zhǔn)值#5

0.

8765

1.8876

1.0111

0.

987準(zhǔn)確性標(biāo)準(zhǔn)物質(zhì)1‐1(340nm)cuvette#空白待測物標(biāo)物1‐1標(biāo)準(zhǔn)值誤差±0.025#2

0.

7654

1.2345

0.4691

0.

487‐0.

0179誤差±0.070.

024結(jié)論：符合要求。吸光度的穩(wěn)定性吸光度穩(wěn)定性：UDR法說明：以蒸餾水作參比,主波長340nm，測量生化吸光度標(biāo)準(zhǔn)溶液1-1,測量時

間 為最長反應(yīng)時間8’33”，測定間隔為儀器讀數(shù)間隔18S。計(jì)算28個吸光 度值間的range符合要求。要求：吸光度最大值和最小值之間差值（即為Range）不大于0.01;操作：1:設(shè)置自定義參數(shù)WDX（如下表），并裝載試劑；SaPhPhWav

ele

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ctorpintpintSubRR12ddididsisiplpleueuntntsisiioionnnnggonMain340nmWDX2.0

μL0.0

μL1150

μL0

μL0

μL0

μLNoneEND

1+027MB100002:用標(biāo)準(zhǔn)溶液1-1作為試劑和標(biāo)本,編程并運(yùn)行測試一次;3:運(yùn)行結(jié)束后,在樣品監(jiān)測中查看所有吸光度值并打印，記錄最 大值與最小值在下表中;4:計(jì)算最大值和最小值的差值(即為Range),檢查其差值是否符 合要求;記錄：吸光度穩(wěn)定性標(biāo)物1‐1(340nm)最大值最小值

0.2060

0.2010Range0.0050結(jié)論：符合要求。吸光度的重復(fù)性吸光度重復(fù)性:UDR法說明:以蒸餾水作參比,340nm主波長,測量生化吸光度標(biāo)準(zhǔn)溶液1-2,反應(yīng)時間

為 最長反應(yīng)時間8’33”，反應(yīng)體積為最小反應(yīng)體積90ul，隨機(jī)取20個吸光 度，CV值符合要求。要求:CV不大于1.5%操作:1:設(shè)置自定義參數(shù)CFX（如下表），并裝載試劑；PhotoPhotom

etWav

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gtRMR

1R

2Pre-dilutioR

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2CalibrationWav

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gnnCFX

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0.0

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μL0

μL0

μLNoneEND

1+027MB100002:用標(biāo)準(zhǔn)溶液1-2作為試劑和標(biāo)本,編程并運(yùn)行測試一次;3:運(yùn)行結(jié)束后,在反應(yīng)監(jiān)測中查看所有吸光度值并打印;4:隨機(jī)記錄20個吸光度值在下表中；檢查CV值是否符合 要求;記錄:910吸光度重復(fù)性標(biāo)準(zhǔn)物質(zhì)1‐2(340nm)次數(shù)

1

2

3

4

5

6

7

8吸光度0.4260

0.4220

0.4260

0.4250

0.4230

0.4240

0.4210

0.4240

0.4240

0.4260次數(shù)11

12

13

14

15

16

17

18

19

20吸光度0.4230

0.4240

0.4250

0.4220

0.4240

0.4270

0.4250

0.4240

0.4250

0.4240CV

0.36%結(jié)論：符合要求。溫度準(zhǔn)確度與波動度溫度準(zhǔn)確度與波動度說明:將經(jīng)過校準(zhǔn),測量范圍包含0~50攝氏度,精度為0.1以上的溫度檢

測探頭放入比色杯中,溫度恒定后,每隔30s測定一次溫度,連續(xù)檢 測10分鐘。要求:溫度值應(yīng)為37.0±0.3℃，波動度不大于±0.2℃操作:1:取下沖洗站頭并掛在掛鉤上,將溫度探頭放入洗站附近的任一 比色杯中；2:溫度恒定后,每隔30s記錄一次,連續(xù)測量10分鐘;3:取出溫度探頭,裝回洗站;4:計(jì)算準(zhǔn)確度和波動度，檢查是否符合要求記錄:溫度準(zhǔn)確度及波動度9101

2

3

4

5

6

7

837.0

37.0

36.9

37.0

37.0

37.0

37.0

37.0

37.0

37.011

12

13

14

15

16

17

18

19

2037.0

37.0

37.0

37.0

37.0

36.9

37.0

37.0

37.0

37.0次數(shù)溫度

()次數(shù)溫度

()準(zhǔn)確度波動度‐0.010.05平均值‐設(shè)定溫度值(37.0)（最大值‐最小值）/2結(jié)論：符合要求。樣品攜帶污染率樣品攜帶污染率：UDR法說明：采用Beckman提供的Orange

PS40染料作為高值，水作為低值 來檢測樣品污染率。同時運(yùn)行高值H1、高值H2、高值H3、低 值L1、低值L2、低值L3來測試樣品攜帶污染率。樣品的攜帶 污染率=(L1-L3)/(H3-L3)x

100%要求：樣品污染率不大于0.5%操作：1:設(shè)置參數(shù)XDWR（參數(shù)如下），以水為試劑，裝載試劑；2:準(zhǔn)備6個標(biāo)本：3個ps40、3個水，依次運(yùn)行XDWR項(xiàng)目；3:記錄并保存打印結(jié)果。記錄：Wav

ele

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getionRR1R2R12ddididsisiplpleueuntntioionnnnggpintpintonSubMain5.0

μL0.0

μL1150

μL0

μL 0

μL0

μLEND

1+027MB10000Rnmnm樣本攜帶污染率測試結(jié)果樣品順序123456結(jié)果1256712345127892625250.01%結(jié)論：符合要求加樣準(zhǔn)確度與重復(fù)性加樣準(zhǔn)確度與重復(fù)性加樣準(zhǔn)確度與重復(fù)性：UDR法說明:使用Beckman提供PS40,R4的兩種染料分別對試劑針和樣品針的重復(fù) 性和準(zhǔn)確度進(jìn)行檢測。通過UDR完成對試劑針(R1,R2)、樣品針吸取 定量染料，測量20遍，其結(jié)果分別滿足下表要求。要求:通過本儀器標(biāo)注染料原始吸光度值（以下稱為原液OD值）雙波長原始OD值=主波長原始OD值-副波長原始OD值單一波長的原液OD值=（100%的OD值-相應(yīng)比色杯空白值）×稀釋 倍數(shù)稀釋率=染料體積/反應(yīng)總體積準(zhǔn)確度靶值（以下稱靶值）=原始OD值×稀釋率×10000準(zhǔn)確度公式=（準(zhǔn)確度測量值-準(zhǔn)確度靶值）/準(zhǔn)確度靶值所有項(xiàng)目的重復(fù)性≤2%，準(zhǔn)確度±5%。操作：1:按照系列表格設(shè)置參數(shù)、并運(yùn)行相應(yīng)標(biāo)本20遍；ItemR1R2(R100)S5ulSample

Volume2.0

μL2.0

μL5.0

μLSample

Dilution0.0

μL0.0

μL0.0

μLPre-Dilution

Rate111R1(R1-1)20

μL100

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Dilution100

μL0

μL0

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μL20

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μL0

μL0

μLWave

Length

Pri.480

nm480

nm480

nmWave

Length

Sec.660

nm660

nm660

nmMethodEND

1END

1END

1Reaction

slope+++MeasPoint-1

FirstNone00Calibration

TypeMBMBMBMB

TypeFactor100001000010000Sample成分DI

WaterDI

WaterPS40R1R4DI

WaterDI

waterR2成分NoneR4None2:打印統(tǒng)計(jì)結(jié)果，記錄CV值在表中“重復(fù)性”，Mean為“準(zhǔn)確性測量值”3:利用photometer

check法標(biāo)定染料：染料R4手工稀釋2倍， 讀取兩個波長480nm，660nm值，打印原始結(jié)果，記