四川省宜賓中學(xué)高二人教版生物選修一課件：5.3血紅蛋白的提取和分離

課題3

血紅蛋白的提取和分離

一、基礎(chǔ)知識：（一）蛋白質(zhì)提取和分離原理

（二）蛋白質(zhì)提取和分離的方法

1）凝膠色譜法：又稱分配色譜法

2）電泳法（三）緩沖液的作用二、實驗操作－－實驗步驟樣品處理和粗分離純化純度鑒定

血液組成成分

1.洗滌紅細(xì)胞

2.釋放血紅蛋白

3.分離血紅蛋白

4.透析血紅蛋白二、實驗操作－－實驗步驟

血液組成成分

1.洗滌紅細(xì)胞

2.釋放血紅蛋白

3.分離血紅蛋白

4.透析血紅蛋白樣品處理和粗分離純化純度鑒定蛋白質(zhì)提取與分離的依據(jù)－－蛋白質(zhì)的物理化學(xué)性質(zhì)差異：

1.分子的形狀、大小

2.電荷性質(zhì)和多少

3.溶解度

4.吸附性質(zhì)

5.對其他分子親和力

1.凝膠色譜法

（1）原理：（2）材料：凝膠大分子通過多孔凝膠顆粒的間隙，路程短，流動快；小分子穿過多孔凝膠顆粒的內(nèi)部，路程長，流動慢。凝膠是微小的多孔性球體，如葡聚糖或瓊脂糖。內(nèi)部有許多貫穿的通道.根據(jù)相對分子質(zhì)量的大小分離蛋白質(zhì)的方法概念：洗脫：從色譜柱上端不斷注入緩沖液，促使蛋白質(zhì)分子的差速流動?；旌衔锷现疵摯蠓肿恿鲃涌煨》肿恿鲃勇占蠓肿邮占》肿?/p>

2．凝膠電泳法：1）原理：不同蛋白質(zhì)的帶電性質(zhì)（正電荷或負(fù)電荷）、電量、形狀和大小不同，在電場中受到的作用力大小、方向、阻力不同，導(dǎo)致不同蛋白質(zhì)在電場中的運動方向和運動速度不同。2）影響蛋白質(zhì)分子運動速度的因素電泳：帶電粒子在電場的作用下發(fā)生遷移的過程思考：蛋白質(zhì)為什么帶有電荷？在一定的PH下，蛋白質(zhì)可解離的基團會帶上電荷2．凝膠電泳法：1）原理：不同蛋白質(zhì)的帶電性質(zhì)（正電荷或負(fù)電荷）、電量、形狀和大小不同，在電場中受到的作用力大小、方向、阻力不同，導(dǎo)致不同蛋白質(zhì)在電場中的運動方向和運動速度不同。2）影響蛋白質(zhì)分子運動速度的因素電泳：帶電粒子在電場的作用下發(fā)生遷移的過程思考：蛋白質(zhì)為什么帶有電荷？3）常用電泳方法

瓊脂糖凝膠電泳聚丙酰胺凝膠電泳

SDS-聚丙烯酰胺凝膠電泳

加入帶負(fù)電荷多的SDS，形成“蛋白質(zhì)－SDS復(fù)合物”，使蛋白質(zhì)遷移速率僅取決于分子大小。

影響蛋白質(zhì)分子運動速度的因素

決定運動方向電場作用力形成阻力決定運動速率電荷性質(zhì)電荷量分子形狀分子大小√√√√√√√由弱酸和相應(yīng)的強堿弱酸鹽溶解于水中。如H2CO3/NaHCO3，NaH2PO4/Na2HPO4等（4）緩沖溶液－－洗脫劑

作用：

配制：調(diào)節(jié)酸和鹽的用量，可配制不同pH的緩沖液。抵制外界酸堿對溶液pH的干擾而保持pH穩(wěn)定。

思考：如何配制不同PH值不同的緩沖液？血液組成成分閱讀思考：血液由______和________兩部分組成。血細(xì)胞中________細(xì)胞數(shù)量最多，細(xì)胞的含量最高的化合物是_____________。該化合物是由_____________和____________構(gòu)成的，其中每個亞基中都含有一個能與O2和CO2結(jié)合的______________________基團。血漿血細(xì)胞紅細(xì)胞血紅蛋白2條α-肽鏈2條β-肽鏈

亞鐵血紅素1.洗滌紅細(xì)胞閱讀思考：洗滌的目的是什么？洗滌的方法是什么？洗滌干凈的標(biāo)志是什么？血液100mL3g檸檬酸鈉低速離心2min紅細(xì)胞血漿吸出血漿紅細(xì)胞5倍體積生理鹽水?dāng)嚢?0min重復(fù)洗滌3次，直至上清液沒有黃色2.釋放血紅蛋白閱讀思考：釋放血紅蛋白過程中，在洗滌好的紅細(xì)胞加入了哪些物質(zhì)？為了加速釋放過程，采取了什么措施？目的分析：蒸餾水的作用是______________________________。加入甲苯的作用是____________________________。充分?jǐn)嚢璧哪康氖莀___________________________。使紅細(xì)胞大量吸水脹裂溶解紅細(xì)胞的細(xì)胞膜加速紅細(xì)胞的破裂濾紙過濾脂類物質(zhì)3.分離血紅蛋白分離過程紅細(xì)胞混合液高速離心10min離心管燒杯有機溶劑血紅蛋白20mmol/L磷酸緩