分子生物學(xué)實驗常用試劑、緩沖液的配制方法

1、1MTris-HCl

□組份濃度1MTris-HCl（pH7.4，7.6，8.0）

□配制量1L

□配制方法1.稱量121.1gTris置于1L燒杯中。

2.加入約800mL的去離子水，充分攪拌溶解。

3.按下表量加入濃鹽酸調(diào)節(jié)所需要的pH值。

pH值

濃HCl

7.4

約70mL

7.6

約60mL

8.0

約42mL

4.將溶解定容至1L。

5.高溫高壓滅菌后，室溫保存。注意：應(yīng)使溶液冷卻至室溫后再調(diào)定pH值，因為Tris溶液的pH值隨溫度的變化差很大，溫度每升高1℃2、1.5MTris-HCl

□組份濃度1.5MTris-HCl（pH8.8）

□配制量1L

□配制方法1.稱取181.7gTris置于1L燒杯中。

2.加入約800mL的去離子水，充分攪拌溶解。

3.用濃鹽酸調(diào)pH值至8.8。

4.將溶液定容至1L。

5.高溫高壓滅菌后，室溫保存。

注意：應(yīng)使溶液冷卻至室溫后再調(diào)定pH值，因為Tris溶液的pH值隨溫度的變化差異很大，溫度每升高1℃3、10×TEBuffer

□組份濃度100mMTris-HCl，10mMEDTA（pH7.4，7.6，8.0）

□配制量1L

□配制方法1.量取下列溶液，置于1L燒杯中。

1MTris-HClBuffer（pH7.4，7.6，8.0）100mL

500mMEDTA（pH8.0）20mL

2.向燒杯中加入約800mL的去離子水，均勻混合。

3.將溶液定至1L后，高溫高壓滅菌。

4.室溫保存。4、3M醋酸鈉

□組份濃度3M醋酸鈉（pH5.2）

□配制量100mL

□配制方法1.稱取40.8gNaOAc?3H2O置于100～200mL燒杯中，加入約40mL的去離子水?dāng)嚢枞芙狻?/p>

2.加入冰乙酸調(diào)節(jié)pH值至5.2。

3.加入去離子水將溶液定容至100mL。

4.高溫高壓滅菌后，室溫保存。5、PBSBuffer

□組份濃度137mMNaCl，2.7mMKCl，10mMNa2HPO4，2mMKH2PO4

□配制量1L

□配制方法1.稱量下列試劑，置于1L燒杯中。

NaCl

8g

KCl

0.2g

Na2HPO4

1.42g

KH2PO4

0.27g

2.向燒杯中加入約800mL的去離子水，充分攪拌溶解。

3.滴加HCl將pH值調(diào)節(jié)至7.4，然后加入去離子水將溶液定容至1L。

4.高溫高壓滅菌后，室溫保存。

注意：上述PBSBuffer中無二價陽離子，如需要，可在配方中補充1mMCaCl2和0.5mMMgCl2。6、10M醋酸銨

□組份濃度10M醋酸銨

□配制量100mL

□配制方法1.稱量77.1g醋酸銨置于100～200mL燒杯中，加入約30mL的去離子水?dāng)嚢枞芙狻?/p>

2.加去離子水將溶液定容至100mL。

3.使用0.22μm濾膜過濾除菌。

4.密封瓶口于室溫保存。

注意：醋酸銨受熱易分解，所以不能高溫高壓滅菌。7、Tris-HCl平衡苯酚

□配制方法

1.使用原料：大多數(shù)市售液化苯酚是清亮無色的，無需重蒸餾便可用于分子生物學(xué)實驗。但有些液化苯酚呈粉紅色或黃色，應(yīng)避免使用。同時也應(yīng)避免使用結(jié)晶苯酚，結(jié)晶苯酚必須在160℃

2.操作注意：苯酚腐蝕性極強，并可引起嚴重灼傷，操作時應(yīng)戴手套及防護鏡等。所有操作均應(yīng)在通風(fēng)櫥中進行，與苯酚接觸過的皮膚部位應(yīng)用大量水清洗，并用肥皂和水洗滌，忌用乙醇。

3.苯酚平衡：因為在酸性pH條件下DNA分配于有機相，因此使用苯酚前必須對苯酚進行平衡使其pH值達到7.8以上，苯酚平衡操作方法如下：

①液化苯酚應(yīng)貯存于-20℃，此時的苯酚呈現(xiàn)結(jié)晶狀態(tài)。從冰柜中取出的苯酚首先在室溫下放置使其達到室溫，然后在68

②加入羥基喹啉（8-Quinolinol）至終濃度0.1％。該化合物是一種還原劑、RNA酶的不完全抑制劑及金屬離子的弱螯合劑，同時因其呈黃色。有助于方便識別有機相。

③加入等體積的1MTris-HCl（pH8.0），使用磁力攪拌器攪拌15分鐘，靜置使其充分分層后，除去上層水相。

④重復(fù)操作步驟③。

⑤加入等體積的0.1MTris-HCl（pH8.0），使用磁力攪拌器攪拌15分鐘，靜置使其充分分層后，除去上層水相。

⑥重復(fù)操作步驟⑤，稍微殘留部分上層水相。

⑦使用pH試紙確認有機相的pH值大于7.8。

⑧將苯酚置于棕色玻璃瓶中4℃8、苯酚/氯仿/異戊醇□配制方法

1.說明：從核酸樣品中除去蛋白質(zhì)時常常使用苯/酚/氯仿/異戊醇（25：24：1）。氯仿可使蛋白（25：24：1）質(zhì)變性并有助于液相與有機相的分離，而異戊醇則有助于消除抽提過程中出現(xiàn)的氣泡。

2.配制方法：將Tris-HCl平衡苯酚與等體積的氯仿/異戊醇（24：1）均勻混合后，移入棕色玻璃瓶中4℃9、10％（W/V）SDS

□組份濃度10％（W/V）SDS

□配制量100mL

□配制方法1.稱量10g高純度的SDS置于100～200mL燒杯中，加入約80mL的去離子水，68℃

2.滴加數(shù)滴濃鹽酸調(diào)節(jié)pH值至7.2。

3.將溶液定容至100mL后，室溫保存。10、2NNaOH

□組份濃度2NNaOH

□配制量100mL

□配制方法1.量取80mL去離子水置于100～200mL塑料燒杯中（NaOH溶解過程中大量放熱，有可能使玻璃燒杯炸裂）。

2.稱取8gNaOH小心地逐漸加入到燒杯中，邊加邊攪拌。

3.待NaOH完全溶解后，用去離子水將溶液體積定容至100mL。

4.將溶液轉(zhuǎn)移至塑料容器中后，室溫保存。11、2.5NHCl

□組份濃度2.5NHCl

□配制量100mL

□配制方法1.在78.4mL的去離子水中加入21.6mL的濃鹽酸（11.6N），均勻混合。

2.室溫保存。12、5MNaCl

□組份濃度5MNaCl

□配制量1L

□配制方法1.稱取292.2gNaCl置于1L燒杯中，加入約800mL的去離子水后攪拌溶解。

2.加去離子水將溶液定容至1L后，適量分成小份。

3.高溫高壓滅菌后，4℃13、20％（W/V）Glucose

□組份濃度20％（W/V）Glucose

□配制量100mL

□配制方法1.稱取20gGlucose置于100～200mL燒杯中，加入約80mL的去離子水后，攪拌溶解。

2.加去離子水將溶液定容至100mL。

3.高溫高壓滅菌后，4℃LB培養(yǎng)基：NaCll%YeastExtract0.5%Tryptonel%瓊脂1.5%（固體培養(yǎng)基）STET緩沖液：蔗糖8%（W/V）Tritonx-1000.5％EDTA50nmol/lTrisCL（pH8.0）50nmol/lTAE(50×)緩沖液：Tris-HAc2mol/LCTAB50mmol/LEDTA(pH8.0)20mmol/LTE緩沖液：Tris-HCI10mmol/LEDTA50mmol/L蔗糖40%氨芐青霉素溶液：將1g粉末狀的氨芐青霉素溶于100mL超純水中，配成10mg/mL，分裝1.5mL的管內(nèi)，-20℃X-gal貯液：將X-gal溶解于二甲基酰氨（DMS）或DMSO中，配成20mg/mL的貯液分裝后避光保存于-20℃，無須過濾或滅菌。IPTG貯液：將IPTG溶解于DDW中，配成20％貯液，用0.22μm的濾膜過濾除菌分裝后保存于-20℃。PhosphateBufferedSaline(PBS)10XPBS(0.1MPBS,pH7.2):

Na2HPO4(anhydrous)--------------------------10.9g

NaH2PO4(anhydrous)--------------------------3.2g

NaCl-------------------------------------------90g

Distilledwater---------------------------------1000ml

MixtodissolveandadjustpHto7.2

Storethissolutionatroomtemperature.Dilute1:10withdistilledwaterbeforeuseandadjustpHifnecessary.20XPBS(0.2MPBS,pH7.2):

Na2HPO4(anhydrous)---------------------------21.8g

NaH2PO4(anhydrous)---------------------------6.4g

NaCl-------------------------------------------180g

Distilledwater----------------------------------1000ml

MixtodissolveandadjustpHto7.2

Storethissolutionatroomtemperature.Dilute1:20withdistilledwaterbeforeuseandadjustpHifnecessary.10XPBS-Tween20(0.1MPBS,0.5%Tween20,pH7.2):

Na2HPO4(anhydrous)--------------------------10.9g

NaH2PO4(anhydrous)------------------