PCR質(zhì)量手冊(cè)簡(jiǎn)要概述

PCR質(zhì)量手冊(cè)簡(jiǎn)明概述文件編號(hào) 前言某某省某某醫(yī)院臨床基因擴(kuò)增檢驗(yàn)試驗(yàn)室建于12月。試驗(yàn)室設(shè)置、設(shè)備及人員配置均嚴(yán)格按照部、省臨床基因診療試驗(yàn)室規(guī)范化標(biāo)準(zhǔn)結(jié)合本身?xiàng)l件而建立。各項(xiàng)管理制度、質(zhì)量確保體系以及基本操作要求和標(biāo)準(zhǔn)操作程序均已制訂。某某省某某醫(yī)院臨床基因擴(kuò)增檢驗(yàn)試驗(yàn)室將面向全省衛(wèi)生系統(tǒng),開展臨床基因診療試驗(yàn)和相關(guān)知識(shí)培訓(xùn)工作,使被培訓(xùn)人員掌握臨床基因診療基礎(chǔ)理論知識(shí)、試驗(yàn)室管理和質(zhì)量確保方法、規(guī)范化操作方法以及了解基因診療領(lǐng)域進(jìn)展。同時(shí)還將開展基因(主要是遺傳基因方面)臨床檢測(cè)及科學(xué)研究工作,為本省臨床基因診療事業(yè)發(fā)展做出一份貢獻(xiàn)。質(zhì)量方針臨床基因擴(kuò)增檢驗(yàn)試驗(yàn)室是嚴(yán)格按照部、省臨床基因擴(kuò)增試驗(yàn)室規(guī)范化標(biāo)準(zhǔn)進(jìn)行管理與操作,一直遵照:以病人為中心以質(zhì)量為關(guān)鍵以科學(xué)為依據(jù)編制: 日期: 審批: 日期: 文件編號(hào) 版本 第二版崗位職責(zé)1．試驗(yàn)室責(zé)任人崗位職責(zé)確定質(zhì)量方針,編制質(zhì)量手冊(cè),并組織人員學(xué)習(xí),統(tǒng)一思想。負(fù)責(zé)試驗(yàn)室全方面質(zhì)量,包含試劑盒質(zhì)量檢驗(yàn);操作質(zhì)量檢驗(yàn);質(zhì)量控制(室內(nèi)室間質(zhì)評(píng))結(jié)果檢驗(yàn);試驗(yàn)結(jié)果查對(duì)、質(zhì)檢和簽發(fā)匯報(bào);確定人員培訓(xùn)計(jì)劃;安排日常工作,確保及時(shí)發(fā)出質(zhì)量合格匯報(bào)。定時(shí)審核和評(píng)審質(zhì)量手冊(cè)運(yùn)行情況。對(duì)試驗(yàn)室對(duì)內(nèi)外發(fā)出匯報(bào)負(fù)責(zé),并以署名簽字形式表示。2．技術(shù)人員崗位職責(zé)按時(shí)消毒、清潔試驗(yàn)室,并統(tǒng)計(jì)簽字。檢驗(yàn)儀器設(shè)備維護(hù)情況,統(tǒng)計(jì)使用情況并簽字。按質(zhì)量手冊(cè)要求標(biāo)準(zhǔn)操作程序(SOP)操作試驗(yàn),并填寫匯報(bào)簽字。按要求進(jìn)行試驗(yàn)自主質(zhì)控工作(每次試驗(yàn)必須有室內(nèi)質(zhì)控方法),并做好統(tǒng)計(jì)簽字。編制: 日期: 審批: 日期: 文件編號(hào) 版本 第二版人員培訓(xùn)及成果人員組成及技術(shù)檔案本室有工作人員2人,其中1名中級(jí),1名初級(jí)。2．培訓(xùn)統(tǒng)計(jì)及專業(yè)文章發(fā)表情況編制: 日期: 審批: 日期: 文件編號(hào) 版本 第二版試驗(yàn)室設(shè)施環(huán)境及規(guī)章制度1、試驗(yàn)室分區(qū)管理平面圖:見圖示1。2、試驗(yàn)室基本設(shè)施:分隔和面積:試驗(yàn)室嚴(yán)格按照標(biāo)準(zhǔn),分隔為三個(gè)獨(dú)立工作室:試劑準(zhǔn)備室、樣品處理室、基因擴(kuò)增室。工作流程:從試劑準(zhǔn)備→樣品處理→基因擴(kuò)增,工作人員只能單向流動(dòng)。進(jìn)入下一區(qū)域,必須更換工作服、手套。通風(fēng):各室空氣流通性良好。照明:室內(nèi)有良好照明度。環(huán)境:潔凈、無(wú)菌;各室均配有紫外消毒設(shè)備。各室儀器、試驗(yàn)和文具用具以及清潔物品均屬于各室專用。3、試驗(yàn)室消毒隔離及污物處理:見試驗(yàn)室廢棄物處理標(biāo)準(zhǔn)操作程序。4、試驗(yàn)室規(guī)章制度:4.1總則4.1.1進(jìn)入基因診療試驗(yàn)室任何工作人員都必須恪守試驗(yàn)室規(guī)則;非工作人員未經(jīng)允許不得入內(nèi),尤其不得為找人而逆向誤入PCR試驗(yàn)室,以免造成不應(yīng)有污染。臨床基因診療試驗(yàn)室分試劑準(zhǔn)備、樣品處理、基因擴(kuò)增室三個(gè)室,各室擁有專用儀器設(shè)備及試驗(yàn)物品(含加樣器、試管架、吸頭、統(tǒng)計(jì)紙、筆、甚至清潔用具等),不得混用,須貼上不一樣顏色標(biāo)簽給予區(qū)分;試劑準(zhǔn)備室為白色標(biāo)識(shí)、樣品制備室為藍(lán)色標(biāo)識(shí)、擴(kuò)增室為綠色標(biāo)識(shí)。臨床基因診療試驗(yàn)室工作人員應(yīng)具備醫(yī)學(xué)檢驗(yàn)、微生物學(xué)檢驗(yàn)基本知識(shí)、大中專以上學(xué)歷、并受過(guò)PCR試驗(yàn)基本知識(shí)和技能培訓(xùn)。4.2.1進(jìn)入試驗(yàn)室工作人員必須恪守試驗(yàn)室唯一流向要求,禁止反向流動(dòng)。4.2.2進(jìn)入試驗(yàn)室,必須更換本室有顏色標(biāo)識(shí)工作服(含帽和鞋)。勤換洗工作服。4.2.3接收樣品時(shí)應(yīng)檢驗(yàn)樣品是否符合要求、貼上標(biāo)簽并做好登記。4.2.4試驗(yàn)室技術(shù)人員必須嚴(yán)格按照PCR試驗(yàn)標(biāo)準(zhǔn)操作程序進(jìn)行,包含試驗(yàn)室擦洗、臺(tái)面消毒,離心管、吸頭無(wú)菌滅活準(zhǔn)備,儀器使用和廢棄物處理等。4.2.5進(jìn)入PCR試驗(yàn)室后區(qū)物品不許帶進(jìn)PCR試驗(yàn)室前區(qū)。4.2.6任何試驗(yàn)操作包含儀器使用等情況均須做好統(tǒng)計(jì)。4.2.7檢測(cè)結(jié)果匯報(bào)應(yīng)完整(包含:檢驗(yàn)項(xiàng)目、靶核酸類型及結(jié)果等),并經(jīng)專業(yè)責(zé)任人審核簽字后方可發(fā)出。4.2.8天天試驗(yàn)開始前,結(jié)束后均應(yīng)按要求清潔、消毒地面和試驗(yàn)臺(tái)面。4.2.9保持臨床基因診療試驗(yàn)室內(nèi)空氣唯一流向和空氣流通。4.2.10定時(shí)校準(zhǔn)和維修PCR儀、離心機(jī)、水浴箱、冰箱等儀器、設(shè)備。4.2.11試驗(yàn)室內(nèi)不得從事與試驗(yàn)無(wú)關(guān)事宜如聊天、飲食、吸煙等;室內(nèi)禁用電風(fēng)扇。4.2.12天天下班前處理好廢棄物品,關(guān)好水、電和門窗。4.3試劑準(zhǔn)備室4.3.1試驗(yàn)人員進(jìn)入該室須穿本室專用白色工作服。試驗(yàn)中須戴手套。4.3.2天天試驗(yàn)開始前,清潔試驗(yàn)臺(tái)并應(yīng)打開紫外線燈消毒30分鐘。4.3.3取出當(dāng)日試驗(yàn)需配制和使用試劑,其余試劑要立刻收好,放回冰箱內(nèi)。4.3.4試驗(yàn)中使用離心管、吸頭等應(yīng)經(jīng)過(guò)滅活無(wú)菌處理,(應(yīng)在消毒使用期內(nèi))。4.3.5其它室用具不得帶入本室。4.3.6每次試驗(yàn)都有統(tǒng)計(jì);且使用本室專用、帶有本室標(biāo)識(shí)統(tǒng)計(jì)本、紙筆。4.3.7試驗(yàn)完成后要整理、清潔工作臺(tái)面。4.4樣品準(zhǔn)備室4.4.1試驗(yàn)人員進(jìn)入該室須穿本室專用蘭色工作服。試驗(yàn)中須戴手套,手套需常更換。4.4.2天天試驗(yàn)開始前,清潔試驗(yàn)室和試驗(yàn)臺(tái),并應(yīng)打開紫外燈消毒30分鐘。4.4.3樣品接收,登記,保留和提取按標(biāo)準(zhǔn)操作程序及試劑盒要求進(jìn)行。4.4.4使用本室專用,經(jīng)滅菌處理加樣器和帶濾心吸頭。4.4.5做好試驗(yàn)統(tǒng)計(jì),并使用本室專用統(tǒng)計(jì)本和筆。4.4.6PCR擴(kuò)增后區(qū)物品不得帶入本室。4.4.7試驗(yàn)完成清潔試驗(yàn)室和試驗(yàn)臺(tái),并打開紫外燈消毒。4.5基因擴(kuò)增室4.5.1試驗(yàn)人員進(jìn)入該室須穿本室專用綠色工作服．試驗(yàn)中須戴手套,手套需常更換。4.5.2天天試驗(yàn)開始前,清潔試驗(yàn)室和試驗(yàn)臺(tái),并應(yīng)打開紫外燈消毒30分鐘。4.5.3使用本室專用,經(jīng)滅菌處理加樣器和帶濾心吸頭。4.5.4需在此進(jìn)行操作,如巢式擴(kuò)增,第一次擴(kuò)增模板必須在本室內(nèi)從反應(yīng)管中取出,并加入另一只反應(yīng)管中,此操作不可返回?cái)U(kuò)增前區(qū)進(jìn)行。4.5.5非全封閉操作(即須開啟反應(yīng)管),應(yīng)打開排風(fēng)扇二十四小時(shí)排氣,保持室內(nèi)負(fù)壓狀態(tài)。4.5.6做好試驗(yàn)統(tǒng)計(jì),且使用本室專用統(tǒng)計(jì)本和筆。4.5.7PCR擴(kuò)增室物品不得帶入擴(kuò)增前區(qū)。4.5.8試驗(yàn)完成清潔試驗(yàn)室和試驗(yàn)臺(tái),并打開紫外燈消毒。編制: 日期: 審批: 日期: 文件編號(hào) 版本 第二版儀器設(shè)備和標(biāo)準(zhǔn)物質(zhì)儀器設(shè)備配置1.1試劑準(zhǔn)備室內(nèi)配置設(shè)備:紫外燈、普通高速臺(tái)式離心機(jī)、旋渦振蕩器、一套連續(xù)可調(diào)式移液槍和無(wú)菌過(guò)濾咀型移液器槍頭、冰箱、各種規(guī)格無(wú)菌備用離心管、PCR反應(yīng)管和玻璃器皿、試驗(yàn)臺(tái)及本室專用文具、紙張;本室專用白色隔離服、一次性手套、污物桶及清潔用具。1.2樣品制備室內(nèi)配置設(shè)備:紫外燈、臺(tái)式高速冷凍離心機(jī)、旋渦振蕩器、恒溫水浴鍋、二套連續(xù)可調(diào)式移液槍、無(wú)菌過(guò)濾咀型移液器槍頭、冰箱、各種規(guī)格無(wú)菌備用離心管和玻璃器皿、試驗(yàn)臺(tái)及本室專用樣品登記本、文具、紙張;本室專用藍(lán)色隔離服、一次性手套、污物桶及清潔用具。1.3基因擴(kuò)增室內(nèi)配置設(shè)備:紫外燈、PCR擴(kuò)增儀、試驗(yàn)臺(tái)及本室專用文具、紙張;本室專用綠色隔離服、一次性手套、污物桶及清潔用具。儀器設(shè)備使用、維護(hù)及校準(zhǔn)見儀器使用、維護(hù)及校準(zhǔn)標(biāo)準(zhǔn)操作程序。儀器設(shè)備統(tǒng)計(jì)和標(biāo)識(shí)全部關(guān)于基因診療試驗(yàn)室儀器使用、維護(hù)及校準(zhǔn)操作均統(tǒng)計(jì)立案。校準(zhǔn)后儀器貼上標(biāo)識(shí),說(shuō)明校準(zhǔn)日期和狀態(tài)。標(biāo)準(zhǔn)物質(zhì)陽(yáng)性、陰性對(duì)照:起源于對(duì)應(yīng)檢測(cè)試劑盒。室內(nèi)質(zhì)控物、室間質(zhì)評(píng)物:起源于衛(wèi)生部和省臨檢中心。編制: 日期: 審批: 日期: 文件編號(hào) 版本 第二版校準(zhǔn)移液器、擴(kuò)增儀、離心機(jī)等對(duì)檢測(cè)結(jié)果有效性、準(zhǔn)確性有影響檢驗(yàn)設(shè)備,投入使用前必須進(jìn)行校準(zhǔn),并每年校準(zhǔn)1次。參加衛(wèi)生部組織室間質(zhì)評(píng)。編制: 日期: 審批: 日期: 文件編號(hào) 版本 第二版檢驗(yàn)方法檢驗(yàn)項(xiàng)目及方法項(xiàng)目:乙型肝炎病毒DNA定量檢測(cè)、丙型肝炎病毒RNA定量檢測(cè)方法:TaqMan熒光定量PCR法乙型肝炎病毒DNA定量檢測(cè)TaqMan熒光定量PCR法丙型肝炎病毒RNA定量檢測(cè)操作手冊(cè)儀器使用、維護(hù)及校準(zhǔn)標(biāo)準(zhǔn)操作程序樣品采集、保留及運(yùn)輸標(biāo)準(zhǔn)操作程序試驗(yàn)過(guò)程標(biāo)準(zhǔn)操作程序(包含:試劑準(zhǔn)備、樣品制備、基因擴(kuò)增和產(chǎn)物檢測(cè)SOP)各檢測(cè)項(xiàng)目標(biāo)準(zhǔn)操作程序試驗(yàn)室消毒及污物處理標(biāo)準(zhǔn)操作程序質(zhì)量確保方法室內(nèi)質(zhì)控3．1核酸提取質(zhì)控在核酸提取中,帶一份弱陽(yáng)性質(zhì)控樣本和一份陰性質(zhì)控樣本(基質(zhì)與待測(cè)樣本相同),分別判定核酸提取有效性和核酸提取過(guò)程中是否發(fā)生污染。3．2核酸擴(kuò)增質(zhì)控靶核酸為DNA:帶一份弱陽(yáng)性靶DNA質(zhì)控和一份陰性質(zhì)控,以判定DNA擴(kuò)增有效性;靶核酸為RNA:一份弱陽(yáng)性cDNA質(zhì)控、一份弱陽(yáng)性RNA質(zhì)控和一份陰性對(duì)照以判定轉(zhuǎn)錄和DNA擴(kuò)增有效性3．3產(chǎn)物檢測(cè)質(zhì)控一份靶DNA或已稀釋擴(kuò)增靶DNA陽(yáng)性質(zhì)控、一份陰性質(zhì)控以及一份試劑空白質(zhì)控與待測(cè)擴(kuò)增樣本同時(shí)檢測(cè),以判定產(chǎn)物檢測(cè)中核酸雜交及顯色測(cè)定有效性。室間質(zhì)控參加由衛(wèi)生部臨床檢驗(yàn)中心組織全國(guó)臨床基因擴(kuò)增項(xiàng)目標(biāo)室間質(zhì)量評(píng)價(jià)。編制: 日期: 審批: 日期: 文件編號(hào) 版本 第二版樣品處置1．樣本標(biāo)識(shí):標(biāo)識(shí)由三部分組成--標(biāo)本采集日期、該檢測(cè)批次標(biāo)本序號(hào)和標(biāo)本類型,三部分間無(wú)間隔符號(hào),比如:02080101B分別表示年、月、日、序號(hào)和血液標(biāo)本,序號(hào)(01-99),整個(gè)標(biāo)識(shí)為8-11位;2．樣本采集、保留和運(yùn)輸:見樣品采集、保留及運(yùn)輸標(biāo)準(zhǔn)操作程序。3．樣本接收、統(tǒng)計(jì):樣品接收后,立刻貼上本室設(shè)計(jì)樣品標(biāo)識(shí),并在接收標(biāo)本統(tǒng)計(jì)表上按要求進(jìn)行登記。無(wú)簽、遲送樣品、樣品量不足、溶血樣品及其它未按要求采集樣品,拒絕接收并統(tǒng)計(jì)于拒收標(biāo)本記錄表。4．樣本處理:見樣品制備標(biāo)準(zhǔn)操作程序編制: 日期: 審批: 日期: 文件編號(hào) 版本 第二版報(bào)告包含以下信息:試驗(yàn)室名稱檢測(cè)項(xiàng)目(如丙型肝炎病毒RNA定量檢測(cè))樣本接收和檢驗(yàn)日期病人信息(姓名、性別、年紀(jì)、門診或住院病區(qū)及床號(hào))檢驗(yàn)方法(如TaqMan熒光定量PCR檢測(cè)法)結(jié)果定性××檢測(cè)項(xiàng)目檢測(cè)陰性或陽(yáng)性定量××檢測(cè)項(xiàng)目檢測(cè)陽(yáng)性