第八章外源化學(xué)物致癌作用03

第八章外源化學(xué)物致癌作用羅曉明2015.4.29主要內(nèi)容第一節(jié)概述第二節(jié)化學(xué)致癌過程第三節(jié)化學(xué)致癌機(jī)制第四節(jié)有關(guān)化學(xué)致癌的分子事件第五節(jié)化學(xué)致癌物的分類第六節(jié)化學(xué)致癌物的基本篩查方法掌握基本概念；化學(xué)致癌物的代謝活化；直接和間接致癌物；體細(xì)胞突變；癌基因、抑癌基因；化學(xué)致癌多階段過程熟悉IARC致癌物的分類、化學(xué)致癌性的判別；短期致癌實(shí)驗(yàn)、動(dòng)物致癌實(shí)驗(yàn)和人群流行病學(xué)的觀察。了解致癌作用的影響因素；化學(xué)致癌物的危險(xiǎn)評(píng)價(jià)學(xué)習(xí)目標(biāo)CompanyLogoWorldCancerReport2014CompanyLogoChinaWhy？基本概念化學(xué)致癌作用(chemicalcarcinogenesis)：化學(xué)物質(zhì)引起正常細(xì)胞發(fā)生惡性轉(zhuǎn)化并發(fā)展成腫瘤的過程。----化學(xué)致腫瘤作用化學(xué)致癌物(chemicalcarcinogen)是指具有化學(xué)致癌作用的化學(xué)物質(zhì)。外源性化學(xué)物致癌過程的認(rèn)識(shí)煤焦油和煙灰陰囊癌燃料膀胱癌多環(huán)芳烴皮膚癌聯(lián)苯胺膀胱癌1775189519221945PottRehnKenne-awayCase化學(xué)致癌過程腫瘤（Tumor），指有分裂潛能的細(xì)胞受致癌因素的作用后發(fā)生惡性轉(zhuǎn)化和克隆性增生所形成的新生物，在人體任何部位、任何組織都可以發(fā)生腫瘤。癌癥（Cancer)，亦稱惡性腫瘤（Malignantneoplasm），由控制細(xì)胞生長(zhǎng)增殖機(jī)制失常而引起的疾病。癌癥發(fā)生發(fā)展過程營(yíng)養(yǎng)調(diào)控修復(fù)增殖分化健康凋亡內(nèi)源、外源性化學(xué)物調(diào)控-修復(fù)-啟動(dòng)細(xì)胞固定腫瘤癌啟動(dòng)階段促進(jìn)階段惡性進(jìn)展階段癌癥發(fā)生發(fā)展過程---引發(fā)階段引發(fā)階段：指致癌劑誘導(dǎo)細(xì)胞的基因突變或表觀遺傳變異，導(dǎo)致異常增生的單個(gè)克隆癌細(xì)胞的生成，從而引發(fā)致癌過程。特征：（1）遺傳改變的不可逆性；（2）啟動(dòng)細(xì)胞的表型可能正常，不具備自主生長(zhǎng)性。腸癌發(fā)生的各個(gè)階段和腫瘤相關(guān)基因的異常結(jié)腸癌發(fā)生發(fā)展過程結(jié)腸癌發(fā)生發(fā)展過程涉及多種基因改變促進(jìn)階段：是單克隆的癌細(xì)胞在一種或多種促癌物質(zhì)的不斷作用下，表型發(fā)生改變，惡性腫瘤細(xì)胞的各種性狀得以表達(dá)的過程。癌癥發(fā)生發(fā)展過程---促進(jìn)階段Promotion:theaccumulationofmutationsincellgrowthorproliferation-relatedgenes特征：1.在基因表達(dá)和細(xì)胞水平上有可逆性2.持續(xù)給予促長(zhǎng)劑可維持促長(zhǎng)細(xì)胞群3.對(duì)衰老、飲食和激素因子敏感4.內(nèi)源性促長(zhǎng)劑可引起自發(fā)促長(zhǎng)作用5.劑量反應(yīng)關(guān)系顯示有可測(cè)定的閾值和最大作用6.以能否有效擴(kuò)大引發(fā)細(xì)胞群來確定促長(zhǎng)劑的強(qiáng)度癌癥發(fā)生發(fā)展過程---促進(jìn)階段進(jìn)展階段：是指良性腫瘤轉(zhuǎn)變?yōu)閻盒阅[瘤，并進(jìn)一步演變成更具惡性表型或具有侵襲特性的腫瘤的過程。細(xì)胞表現(xiàn)出高增殖率和低凋亡率。癌癥發(fā)生發(fā)展過程---進(jìn)展階段Progression:againintumormassthroughincreasedratesofcellproliferationand/orreducedratesofapoptosis特征：1.不可逆性2.核型不穩(wěn)定導(dǎo)致細(xì)胞基因組結(jié)構(gòu)的形態(tài)學(xué)改變3.在進(jìn)展階段早期，已改變的細(xì)胞對(duì)環(huán)境因子敏感4.在進(jìn)展階段可觀察到良性或惡性腫瘤5.進(jìn)展劑使已促長(zhǎng)的細(xì)胞進(jìn)入此期癌癥發(fā)生發(fā)展過程---進(jìn)展階段體細(xì)胞基因組突變（自發(fā)、環(huán)境因素、化學(xué)品、輻射、病毒）腫瘤基因激活（促進(jìn)增殖）細(xì)胞凋亡調(diào)控基因改變（增加存活）腫瘤抑制基因激活（促進(jìn)增殖和存活）異常蛋白質(zhì)的表達(dá)和生長(zhǎng)負(fù)調(diào)控蛋白表達(dá)的缺失克隆增殖體細(xì)胞突變的積累惡性腫瘤（癌癥）癌癥發(fā)生發(fā)展過程腫瘤抑制基因腫瘤基因不死性遷移性失去接觸抑制生長(zhǎng)信號(hào)的自給自足對(duì)程序性細(xì)胞死亡的逃逸每個(gè)人身上都有癌細(xì)胞？化學(xué)致癌機(jī)制--腫瘤相關(guān)基因原癌基因：被激活或者異常表達(dá)后可使細(xì)胞發(fā)生惡性轉(zhuǎn)化的基因。抑癌基因：正常細(xì)胞分裂生長(zhǎng)的負(fù)性調(diào)節(jié)因子，其編碼蛋白質(zhì)能降低細(xì)胞分裂活性，對(duì)細(xì)胞的生長(zhǎng)、增殖、分化起負(fù)性調(diào)節(jié)作用。化學(xué)致癌機(jī)制與致突變有關(guān)，且致癌模式可以分為損傷-修復(fù)-突變-腫瘤模式。細(xì)胞癌變的多階段學(xué)說化學(xué)致癌作用——多因素、多基因參與的多階段過程致癌過程有多個(gè)與癌有關(guān)的基因參與不同器官來源、不同組織類型、臨床階段以至同一種腫瘤在不同地區(qū)所見的遺傳變化是不同的多種環(huán)境致癌物、致癌因子或條件可協(xié)同作用個(gè)體的不同遺傳背景對(duì)腫瘤的發(fā)生發(fā)展有重要影響CompanyLogo多階段致癌的形態(tài)學(xué)和生物學(xué)特征CompanyLogo化學(xué)致癌機(jī)制化學(xué)致癌機(jī)制其中最經(jīng)典的是體細(xì)胞突變學(xué)說或稱遺傳損傷機(jī)制學(xué)說.與之對(duì)應(yīng)的是非突變致癌學(xué)說，泛指所有不涉及堿基序列改變的致癌機(jī)制。目前普遍認(rèn)為致癌物誘導(dǎo)腫瘤的形成是上述兩種機(jī)制共同作用的結(jié)果。體細(xì)胞突變學(xué)說致癌物代謝活化后生成的DNA加合物誘導(dǎo)基因突變癌基因的突變以及抑癌基因的突變或缺失在腫瘤中普遍存在，并且可以傳遞給子代細(xì)胞大多數(shù)致癌物在致突變?cè)囼?yàn)中呈陽性DNA修復(fù)缺陷可以導(dǎo)致腫瘤發(fā)生發(fā)生染色體畸變基因組不穩(wěn)定腫瘤細(xì)胞來源于單細(xì)胞克隆理論依據(jù)CompanyLogoDNA的改變成了體細(xì)胞突變機(jī)制的分子基礎(chǔ)非突變致癌機(jī)制CompanyLogo基因結(jié)構(gòu)未發(fā)生改變而是其調(diào)控出現(xiàn)異常。有些致癌物對(duì)細(xì)胞DNA并無致突變作用。因此，有學(xué)者提出非突變致癌學(xué)說或表觀遺傳致癌學(xué)說。非突變致癌機(jī)制表觀遺傳變異表觀遺傳現(xiàn)象：是指基因表達(dá)發(fā)生改變但不涉及DNA序列的變化，能夠在代與代之間傳遞。表觀遺傳變異包括基因沉默、DNA甲基化、核仁顯性、休眠轉(zhuǎn)座子激活和基因組印記等方面，周圍的環(huán)境也很重要?；虮磉_(dá)模式DNA甲基化DNA甲基化是指在DNA甲基化轉(zhuǎn)移酶的作用下，在基因組CpG二核苷酸的胞嘧啶5‘碳位共價(jià)鍵結(jié)合一個(gè)甲基基團(tuán)，生成m5CpG。DNA的不同甲基化狀態(tài)(過甲基化與去甲基化)與基因的活性和功能有關(guān)。

CpG島位于多種動(dòng)物已知基因轉(zhuǎn)錄起始位點(diǎn)周圍、由胞嘧啶(C)和鳥嘧啶(G)組成的串聯(lián)重復(fù)序列。在結(jié)構(gòu)基因的5’端調(diào)控區(qū)域,CpG二連核苷常常以成簇串聯(lián)形式排列，這種富含CpG二連核苷的區(qū)域稱為CpG島(CpGislands)，其大小為500-1000bp，約56%的編碼基因含該結(jié)構(gòu)。啟動(dòng)子區(qū)中CpG島的未甲基化狀態(tài)是基因轉(zhuǎn)錄所必需的。遺傳學(xué)和表觀遺傳學(xué)基因序列發(fā)生改變基因序列不發(fā)生改變，可遺傳表觀遺傳變異特點(diǎn)可遺傳的，即這類改變通過有絲分裂或減數(shù)分裂，能在細(xì)胞或個(gè)體世代間遺傳；可逆性的基因表達(dá)調(diào)節(jié)，也有較少的學(xué)者描述為基因活性或功能的改變；沒有DNA序列的改變或不能用DNA序列變化來解釋表觀遺傳學(xué)機(jī)制DNA甲基化和腫瘤CompanyLogo甲基化甲基化細(xì)胞異常增生腫瘤是正常細(xì)胞在致癌因素長(zhǎng)期作用下，出現(xiàn)過度增生或異常分化而形成的新生物。與正常細(xì)胞相比，腫瘤細(xì)胞具有超常的增生能力。反復(fù)炎癥刺激可使良性增生發(fā)展成異常增生，臨床研究證實(shí)細(xì)胞增生是許多癌前病變的共同特征。免疫抑制研究發(fā)現(xiàn)，某些腫瘤細(xì)胞能通過自分泌或旁分泌形式分泌免疫抑制因子，如轉(zhuǎn)化生長(zhǎng)因子β（TGF-β）、白細(xì)胞介素-6（IL-6）和前列腺素E（PGE2）等，能抑制機(jī)體對(duì)腫瘤細(xì)胞的殺傷。內(nèi)分泌激素失衡長(zhǎng)期使用激素可以導(dǎo)致腫瘤發(fā)生。環(huán)境內(nèi)分泌干擾物（EEDs):存在于環(huán)境中并能干擾體內(nèi)天然激素的合成、分泌、運(yùn)輸、結(jié)合、作用、代謝及消除的外源性化學(xué)物質(zhì)，表現(xiàn)出擬天然激素或抗天然激素的作用，通過干擾機(jī)體的內(nèi)分泌功能而致病。CompanyLogoCompanyLogo世界衛(wèi)生組織早在2002年就指出EEDs污染呈現(xiàn)全球性EEDs三大特點(diǎn)---分布廣泛CompanyLogoEEDs三大特點(diǎn)---種類繁多EEDs三大特點(diǎn)---危害嚴(yán)重危害嚴(yán)重：生殖與發(fā)育毒性、致癌、神經(jīng)毒性、免疫毒性等。已知的EDCs和相關(guān)腫瘤乳腺癌：雙酚A、雌二醇、二噁英、DTT、毒殺芬、鄰苯二甲酸酯前列腺癌：雙酚A、鎘、雌二醇、乙烯雌酚睪丸癌：鄰苯二甲酸酯、鎘陰道癌、卵巢癌：乙烯雌酚

化學(xué)致癌相關(guān)事件基因突變基因異常表達(dá)干擾細(xì)胞凋亡端粒調(diào)控異常細(xì)胞周期紊亂化學(xué)致癌相關(guān)事件基因突變?cè)┗蛞职┗虻蛲鱿嚓P(guān)基因腫瘤易感基因活化為癌基因，與膜有關(guān)的G蛋白ras基因、核轉(zhuǎn)錄因子的myc基因失活，調(diào)節(jié)轉(zhuǎn)錄的Rb基因，錯(cuò)配DNA修復(fù)的hMLH1基因促凋亡基因：myc、P53、Bax抗凋亡基因：Ras、Bcl-2、Rb主要見于乳腺癌患者家屬：BRCA1和BRCA2TEXT轉(zhuǎn)移相關(guān)基因特定轉(zhuǎn)移基因Mst1為代表；一些癌基因：Ras、myc端粒調(diào)控與細(xì)胞永生化CompanyLogo端粒（telomere）：是真核細(xì)胞染色體末端的一個(gè)特殊的DNA-蛋白質(zhì)結(jié)構(gòu)，其DNA由5‘TTAGGG-3’六個(gè)堿基的重復(fù)序列組成，能穩(wěn)定和保護(hù)染色體，在每次細(xì)胞分裂后，該重復(fù)序列都要縮短50-100bp，最終導(dǎo)致細(xì)胞衰老、死亡。端粒酶（telomerase):是一種核糖核酸蛋白酶，能在染色體末端合成端粒序列，以維持端粒的長(zhǎng)度。端粒酶的活性存在于生殖細(xì)胞、永生細(xì)胞、癌細(xì)胞及活化的淋巴細(xì)胞中，大多數(shù)人原發(fā)腫瘤中含有端粒酶活性。

CompanyLogo熒光原位雜交顯示的端粒和端粒序列端粒酶具有逆轉(zhuǎn)錄功能，能以自身為RNA為模板合成端粒DNA，從而維持端粒長(zhǎng)度。被稱為細(xì)胞分裂計(jì)時(shí)器，在細(xì)胞永生化過程中起著重要的作用。細(xì)胞周期調(diào)控紊亂細(xì)胞周期（cellcycle）是指細(xì)胞從一次分裂完成開始到下一次分裂結(jié)束所經(jīng)歷的全過程，分為間期與分裂期兩個(gè)階段CompanyLogo細(xì)胞周期調(diào)控的核心成員：細(xì)胞周期素（cyclin），周期素依賴性蛋白激酶（cyclindependentkinase，CDK）和CDK抑制蛋白（CDKinhibitor）CompanyLogoG1-S轉(zhuǎn)換和G2-M轉(zhuǎn)換關(guān)卡；細(xì)胞周期監(jiān)控：DNA損傷感應(yīng)、細(xì)胞生長(zhǎng)阻滯、DNA修復(fù)和細(xì)胞凋亡啟動(dòng)。細(xì)胞凋亡與腫瘤發(fā)生細(xì)胞凋亡（apoptosis）：細(xì)胞在一定的生理或病理?xiàng)l件下，受內(nèi)在遺傳機(jī)制的控制自動(dòng)結(jié)束生命的過程，是一種自然的生理過程。細(xì)胞壞死（Necrosis):在種種不利因素下，由于細(xì)胞正常代謝活動(dòng)受損或中斷引起的細(xì)胞死亡。

細(xì)胞凋亡和細(xì)胞壞死區(qū)別CompanyLogo細(xì)胞凋亡過程促進(jìn)細(xì)胞凋亡基因：p53、Rb、p16;抑制細(xì)胞凋亡基因：c-Myc、Ras、Bcl-2細(xì)胞凋亡檢測(cè)方法---Tunel細(xì)胞凋亡檢測(cè)方法---FACS證據(jù)缺乏致癌性致癌證據(jù)不足致癌證據(jù)不足致癌證據(jù)充分無結(jié)果提示致癌性或者無相關(guān)研究數(shù)據(jù)無法明確化學(xué)物與致癌作用的關(guān)系部分動(dòng)物誘癌實(shí)驗(yàn)陽性腫瘤發(fā)生率高，并有劑量-反應(yīng)關(guān)系化學(xué)致癌物的分類--4級(jí)（IARC）根據(jù)對(duì)人和動(dòng)物致癌作用分類107582495121明確致癌性可能致癌性可能致癌性現(xiàn)有證據(jù)不足可能非致癌物按化學(xué)致癌作用模式分類直接致癌物間接致癌物促癌劑不需要代謝活化即具有親電子活性，能與大分子物質(zhì)共價(jià)結(jié)合形成加和物：內(nèi)酯類、氮芥、鎳、鎘、砷需要代謝活化后才具有致癌作用：芳香烴、亞硝胺類、煙草、酒精、苯并蒽等單獨(dú)作用不致癌，卻可使啟動(dòng)的突變細(xì)胞克隆擴(kuò)增，促進(jìn)腫瘤的發(fā)展：DDT、多氯聯(lián)氨、二噁英其他分類方法：引發(fā)物、促癌物和催展物化學(xué)致癌物篩查的基本方法定量構(gòu)-效關(guān)系分析遺傳毒性實(shí)驗(yàn)細(xì)胞惡性轉(zhuǎn)化實(shí)驗(yàn)哺乳動(dòng)物致癌實(shí)驗(yàn)哺乳動(dòng)物長(zhǎng)期致癌實(shí)驗(yàn)促癌劑的檢測(cè)轉(zhuǎn)基因或基因敲除動(dòng)物在致癌篩查中的應(yīng)用人群腫瘤流行病學(xué)研究短期實(shí)驗(yàn)定量構(gòu)象關(guān)系分析QSAR（quantitativestructure-activityrelationship)是利用理論計(jì)算和統(tǒng)計(jì)分析工具研究化和物與其生物學(xué)效應(yīng)之間的定量關(guān)系。該方法是集生物、化學(xué)和統(tǒng)計(jì)學(xué)為一體的一項(xiàng)綜合技術(shù)，它的理論基礎(chǔ)是影響化學(xué)反應(yīng)速率的能力將體現(xiàn)為不同的活性指數(shù)或可量化的響應(yīng)指數(shù)。CompanyLogoHansch方法：以生理活性物質(zhì)的半數(shù)有效量作為活性參數(shù)，以分子的電性參數(shù)、立體參數(shù)和疏水參數(shù)作為線性回歸分析的變量。Free-Wilson方法：方法均是將分子作為一個(gè)整體考慮其性質(zhì)，并不能細(xì)致地反應(yīng)分子的三維結(jié)構(gòu)與生理活性之間的關(guān)系，因而又被稱作二維定量構(gòu)效關(guān)系CompanyLogo優(yōu)點(diǎn)：快速、經(jīng)濟(jì)、有效，是人類最早的合理藥物設(shè)計(jì)方法之一。QSAR缺點(diǎn)：物理意義模糊，且在分析是沒有涉結(jié)合“生物學(xué)因素”，精準(zhǔn)度收到質(zhì)疑因此，必須建立高效、精準(zhǔn)且功能強(qiáng)大的分析系統(tǒng)遺傳毒性實(shí)驗(yàn)許多化學(xué)致癌物具有誘導(dǎo)突變的作用，因此目前致突變實(shí)驗(yàn)是毒理學(xué)安全評(píng)價(jià)應(yīng)用最多的實(shí)驗(yàn)。①基因突變?cè)囼?yàn)：鼠傷寒沙門氏菌回復(fù)突變?cè)囼?yàn)(Ames試驗(yàn));②染色體畸變?cè)囼?yàn)：體外細(xì)胞系細(xì)胞遺傳學(xué)分析，小鼠骨髓微核試驗(yàn)，大鼠骨髓染色體畸變?cè)囼?yàn);③原發(fā)性DNA損傷：DNA加合物，DNA鏈斷裂，DNA修復(fù)誘導(dǎo)試驗(yàn)；④體外細(xì)胞轉(zhuǎn)化：敘利亞地鼠胚胎細(xì)胞，Balb/c3T3細(xì)胞。優(yōu)點(diǎn)：簡(jiǎn)單、快速、費(fèi)用低廉、無需特殊檢測(cè)儀器缺點(diǎn)：無法檢出非遺傳毒性致癌物。致突變實(shí)驗(yàn)陽性陰性遺傳毒性致癌物

具有致突變性的非致癌物

非致突變性的非致癌物

非致突變性的致癌物細(xì)胞惡性轉(zhuǎn)化實(shí)驗(yàn)細(xì)胞惡性轉(zhuǎn)化（cellmalignanttransformation)是指外源性因素對(duì)體外培養(yǎng)的細(xì)胞所誘發(fā)的惡性表型改變，包括細(xì)胞形態(tài)、細(xì)胞增殖速度、生長(zhǎng)特性、染色體畸變等變化，目的在于揭示體外培養(yǎng)細(xì)胞在接觸受試物后，細(xì)胞生長(zhǎng)自控能力的喪失，接觸抑制消失，細(xì)胞排列紊亂或呈灶狀生長(zhǎng)。觀察終點(diǎn)：細(xì)胞惡性變，可以篩查遺傳毒性致癌物質(zhì)，也可檢測(cè)非遺傳毒性致癌物。CompanyLogo細(xì)胞系1）細(xì)胞株，敘利亞倉鼠胚胎細(xì)胞（SHE），最早應(yīng)用的原代細(xì)胞系；2）細(xì)胞系，C3H/10T1/2、BALB/C-3T3；3）病毒感染的Bhas42細(xì)胞系，將v-Ha-ras癌基因轉(zhuǎn)染的BALB/c3T3細(xì)胞，被認(rèn)為是已經(jīng)啟動(dòng)的了的細(xì)胞，可以直接檢測(cè)促癌劑CompanyLogoCompanyLogo結(jié)果分析方法光鏡電鏡SEM其他：RT-PCR，WBHE&ICH評(píng)價(jià)方法轉(zhuǎn)化灶細(xì)胞密集堆積，周圍交叉排列；集落中有圓形細(xì)胞，外圍少數(shù)交叉；整個(gè)擊落均可見交叉排列和重疊生長(zhǎng)。CompanyLogo軟瓊脂克隆法細(xì)胞轉(zhuǎn)化分析—CytoSelect哺乳動(dòng)物短期致癌動(dòng)物短期致癌實(shí)驗(yàn)（limitedinvivobioassay):實(shí)驗(yàn)觀察不是終身而是在有限的時(shí)間范圍內(nèi)，而且觀察的靶器官限定為一個(gè)而不是全部。國內(nèi)外常用的有以下四種：1、小鼠腫瘤誘發(fā)實(shí)驗(yàn)2、雌性SD大鼠誘發(fā)實(shí)驗(yàn)3、大鼠肝轉(zhuǎn)變?cè)顚?shí)驗(yàn)4、小鼠皮膚腫瘤誘發(fā)實(shí)驗(yàn)觀察終點(diǎn)：癌前病變?nèi)缦倭?、瘤性增生結(jié)界CompanyLogo小鼠腫瘤誘發(fā)實(shí)驗(yàn)-肺烏拉坦i.pinjection30w氨基甲酸乙酯在體內(nèi)的代謝途徑至少有三種：超過90%的它可被分解為乙醇，氨和淡水化合物。約0.5%的它被細(xì)胞色素P450氧化成DNA加聚物，造成DNA雙鏈破壞，可導(dǎo)致癌變。約0.1%的它被細(xì)胞色素P450氧化為N-羥基-氨基甲酸乙酯，后者能誘導(dǎo)銅離子調(diào)控的DNA損傷CompanyLogo大鼠腫瘤誘發(fā)實(shí)驗(yàn)小鼠皮膚誘發(fā)腫瘤實(shí)驗(yàn)CompanyLogo

哺乳動(dòng)物短期致癌試驗(yàn)：于小鼠皮膚局部連續(xù)涂抹受試物，以觀察皮膚瘤和癌的發(fā)生；一般20周可結(jié)束實(shí)驗(yàn)，較敏感的小鼠為SENCAR小鼠。此試驗(yàn)也可設(shè)計(jì)為檢測(cè)受試物的引發(fā)活性或促長(zhǎng)活性。典型的引發(fā)劑為致癌性多環(huán)芳烴，促長(zhǎng)劑為佛波醇酯(TPA)，巴豆油。大鼠肝轉(zhuǎn)化灶實(shí)驗(yàn)對(duì)大鼠進(jìn)行肝大部切除，給以受試物，二乙基亞硝胺(DEN)，促長(zhǎng)劑為苯巴比妥(PB)。一般可在8～14周結(jié)束實(shí)驗(yàn)，觀察肝轉(zhuǎn)化灶生成。轉(zhuǎn)化灶可用組織化學(xué)或免疫化學(xué)方法鑒定。此試驗(yàn)也可設(shè)計(jì)為檢測(cè)受試物的引發(fā)活性或促長(zhǎng)活性。何時(shí)應(yīng)考慮進(jìn)行致癌性評(píng)價(jià)WhenandWhy?①人體可能長(zhǎng)期暴露于該化學(xué)物；②該化學(xué)物或其代謝物的化學(xué)結(jié)構(gòu)與已知致癌物相似；③反復(fù)染毒毒性試驗(yàn)提示該化學(xué)物可能產(chǎn)生癌前病變。通常應(yīng)該在申請(qǐng)上市之前進(jìn)行哺乳動(dòng)物長(zhǎng)期致癌實(shí)驗(yàn)動(dòng)物選擇：斷乳或斷乳不久的大鼠和小鼠，雌雄各半。動(dòng)物數(shù)量：每組至少有雌雄各50只動(dòng)物，共100只。在出現(xiàn)第一個(gè)腫瘤時(shí)，每組還應(yīng)有不少于50只動(dòng)物染毒途徑和時(shí)間：原則上試驗(yàn)期限要求長(zhǎng)期或終生，一般小鼠1.5年，大鼠2年。CompanyLogo劑量：致癌試驗(yàn)一般設(shè)三個(gè)試驗(yàn)組。ICH(1995)提出，高劑量選擇可以根據(jù)：①毒性終點(diǎn)，即最大耐受劑量(MTD);②藥代動(dòng)力學(xué)終點(diǎn)，嚙齒動(dòng)物血漿AUC(時(shí)量曲線下面積)為人的25倍；③選擇吸收飽和劑量;④藥效學(xué)終點(diǎn)，不應(yīng)產(chǎn)生生理學(xué)和內(nèi)穩(wěn)態(tài)紊亂;⑤最大可行劑量，受試物在飼料中最高含量為5％。限制劑量為1500mg／(kg體重·d)。CompanyLogo劑量：致癌試驗(yàn)一般設(shè)三個(gè)試驗(yàn)組。ICH(1995)提出，高劑量選擇可以根據(jù)：①毒性終點(diǎn)，即最大耐受劑量(MTD);②藥代動(dòng)力學(xué)終點(diǎn)，嚙齒動(dòng)物血漿AUC(時(shí)量曲線下面積)為人的25倍；③選擇吸收飽和劑量;④藥效學(xué)終點(diǎn)，不應(yīng)產(chǎn)生生理學(xué)和內(nèi)穩(wěn)態(tài)紊亂;⑤最大可行劑量，受試物在飼料中最高含量為5％。限制劑量為1500mg／(kg體重·d)。中及低劑量組則按等比級(jí)數(shù)下推，如分別為上一個(gè)劑量水平的1/2或1/3。低劑量組應(yīng)不影響動(dòng)物的正常生長(zhǎng)、發(fā)育和壽命，即不產(chǎn)生任何毒性效應(yīng)。但低劑量組應(yīng)高于人的接觸劑量，一般不低于高劑量的10％。中劑量組介于高、低劑量之間，如有可能按受試物的毒物動(dòng)力學(xué)性質(zhì)來確定。CompanyLogo結(jié)果觀察、分析和評(píng)定---腫瘤發(fā)生率腫瘤發(fā)生率（％）＝（實(shí)驗(yàn)結(jié)束時(shí)患腫瘤動(dòng)物總數(shù)／有效動(dòng)物總數(shù)）×100％，有效動(dòng)物總數(shù)指最早發(fā)現(xiàn)腫瘤時(shí)存活動(dòng)物總數(shù)。結(jié)果觀察、分析和評(píng)定---腫瘤多發(fā)性腫瘤多發(fā)性：是指一個(gè)動(dòng)物出現(xiàn)多個(gè)器官腫瘤或一個(gè)器官出現(xiàn)多個(gè)腫瘤。一般計(jì)算每一組的平均腫瘤數(shù)和每一組中出現(xiàn)2、3個(gè)或多個(gè)腫瘤的動(dòng)物數(shù)或比例。腫瘤潛伏期即從攝入受試物起到發(fā)現(xiàn)腫瘤的時(shí)間，因?yàn)閮?nèi)臟腫瘤不易覺察，通常將腫瘤引起該動(dòng)物死亡的時(shí)間定為發(fā)生腫瘤的時(shí)間。應(yīng)對(duì)試驗(yàn)結(jié)果進(jìn)行仔細(xì)的統(tǒng)計(jì)學(xué)分析，并研究劑量—反應(yīng)關(guān)系結(jié)果觀察、分析和評(píng)定---潛伏期CompanyLogo致癌試驗(yàn)陽性的判定標(biāo)準(zhǔn)陽性4321對(duì)于對(duì)照組也出現(xiàn)的一種或數(shù)種腫瘤，試驗(yàn)組腫瘤發(fā)生率增加；試驗(yàn)組發(fā)生對(duì)照組沒有的腫瘤類型；與對(duì)照組比較，試驗(yàn)組每個(gè)動(dòng)物的平均腫瘤數(shù)增加。試驗(yàn)組腫瘤發(fā)生早于對(duì)照組人群流行病學(xué)研究CompanyLogo（一）接觸標(biāo)記（二）生物效應(yīng)標(biāo)記（三）敏感性標(biāo)記流行病學(xué)調(diào)查時(shí)確定人類致癌物的唯一手段。轉(zhuǎn)基因小鼠在致癌篩查中的應(yīng)用CompanyLogo1．轉(zhuǎn)癌基因小鼠。與轉(zhuǎn)錄啟動(dòng)子連接的癌基因轉(zhuǎn)入后可直接在某些特定的組織中高效表達(dá)，使該組織細(xì)胞處于引發(fā)狀態(tài)，這類轉(zhuǎn)基因動(dòng)物是研究化學(xué)物致癌作用的敏感體系。攜帶癌基因的轉(zhuǎn)基因動(dòng)物可用于致癌試驗(yàn)，試驗(yàn)周期僅3個(gè)月左右，有希望發(fā)展成代替長(zhǎng)期動(dòng)物致癌試驗(yàn)的試驗(yàn)系統(tǒng)。這些攜帶有癌基因的轉(zhuǎn)基因動(dòng)物，可用來研究外源化學(xué)物與腫瘤相關(guān)基因的作用及外源化學(xué)物在致癌不同階段中的作用機(jī)制。2．腫瘤抑制基因敲除小鼠。在P53-/-小鼠，腫瘤(特別是淋巴肉瘤)的發(fā)生比正常小鼠(P53+/+)增加而且提前。由于P53-/-小鼠的腫瘤發(fā)生具有組織特異性，進(jìn)一步研究這些腫瘤的遺傳學(xué)基礎(chǔ)有助于鑒定P53基因的功能。而半合子小鼠(P53+/-)在出生后6個(gè)月內(nèi)自發(fā)癌發(fā)生率低，但在之后發(fā)生淋巴瘤和軟組織肉瘤，其中大部分丟失P53野生型等位基因。這種小鼠對(duì)遺傳毒性致癌物敏感性并不增加。這種半合子小鼠也可用于鑒定致癌過程中的協(xié)作基因。而且缺P53小鼠加速形成惡性腫瘤，提示此基因主要在進(jìn)展階段起作用。P53在腫瘤發(fā)生中的作用有待進(jìn)一步研究。CompanyLogo癌癥可以預(yù)防NutritioninCancerPreventionDietscontainbothinhibitorsandenhancersofcarcinogenesisAnimalstudiesalsotesttheeffectoffoodandnutritiononcancerandprovideguidanceforepidemiologicalstudies

CarbohydrateandGlycemicIndex

Highglycemic-indexdietassociatedwithincreasedriskofcancersincludingovarian,endometrial,breast,colorectal,pancreas,andlungLimitprocessedfoodsandrefinedsugarsandemphasizewholegrainsandlowGIfoodsFruitsandVegetablesFruitsandvegetablesfoundtobeassociatedwithlowerriskin128of156dietarystudiesIncreasedconsumptionoffruitsandvegetablesisassociatedwithlowerriskofcancersoftheoralcavity,esophagus,stomach,colon,rectum,andbladderEvidencelessstrongforhormone-related(類激素相關(guān)）cancerssuchasbreastandprostatecancer

1.Broccoli

MostattentionasabreastcancerpreventionfoodResearchhasshownitblockstumorgrowth,preventingthefurtherspreadofcancerifitdoesoccuranti-cancerbenefitfromothercruciferousveggies,includingcauliflower,cabbage,Brusselssprouts,andkale-eatoneormoreofthesevegetableseveryday

2.GarlicGarlicseemstohaveanimpactoncellcycling(processbywhichanormal,healthycellmightbecomecancerous)CreditforregulatingthisgoestothecomponentofgarliccalledallylsulfideAllylsulfidesarefoundthroughouttheonionfamilyPreventsbreastcancer

2.GarlicGarlicseemstohaveanimpactoncellcycling(processbywhichanormal,healthycellmightbecomecancerous)CreditforregulatingthisgoestothecomponentofgarliccalledallylsulfideAllylsulfidesarefoundthroughouttheonionfamilyPreventsbreastcancer

3.Apples

Anappleadaymaykeepcanceraway—butthere’sacatch.Peelingapple-tossingawayarichsourceoffiber,antioxidants,andothercompoundsneededforanti-cancernutrition.Labstudiesshowthatapplepeelcanactuallyfightthespreadofcancercells.

4.Pomegranates

EarlystagesresearchCellculturestudysuggeststhatthefruitcontainsacompoundthatmighthelpfightcancer’sgrowth—especiallyestrogen-dependentcancers(breast,endometrium).Alsohelpfightheartdiseaseandprostatecancer.

5.Walnuts

Walnutscontainmanyhelpfulnutrientsandhealthy-3fattyacids,whichhelpyourbodyfightinflammationResearchalsosuggeststhatwalnutsmayactuallyslowthegrowthofbreastcancertumors,sothistastynutcouldplayaroleinbreastcancermanagementevenafterdiagnosis

6.Fish

Greatsourcesof-3fattyacidsincludecertainfishandfishoil(salmon,mackerel,seabass,andtuna)Smartproteinsourcesincenutritionrecommendationsincludelimitingintakeofredmeatand