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文檔簡介

小鼠脾臟淋巴細胞分離與鑒定實驗原理免疫細胞的數(shù)量與功能，是判斷機體免疫功能狀態(tài)的重要指標；人外周血中淋巴細胞——反映外周循環(huán)淋巴細胞狀態(tài)；實驗動物的胸腺、脾臟或淋巴結等——重要的淋巴細胞標本來源；脾臟是人體中最大的淋巴器官，占全身淋巴組織總量的25%，是機體細胞免疫和體液免疫的中心。

Ficoll密度梯度離心法脾臟細胞混懸液中各種有形成分比重存在差異，利用比重為1.077、近于等滲的Ficoll-hypaque混合液（又稱淋巴細胞分離液）做密度梯度離心時，各種成分將按密度梯度重新聚集。紅細胞及其他細胞和死細胞碎片F(xiàn)icoll分液層PBS覆蓋層淋巴細胞層實驗步驟清潔級小鼠頸椎脫臼處死，仰臥位固定；用鑷子夾起腹股溝中線處皮膚，用剪刀做一橫 切口。用鑷子捏住切口兩端的皮膚朝著小鼠的 尾部和頭部縱向撕開皮膚，暴露腹腔膜壁；切開腹腔壁膜，用鑷子夾住脾臟，并用剪子剪去與其相連的組織，置于裝有PBS的平皿內；取200目不銹鋼過濾網(wǎng)，用注射器內芯研磨脾臟，磨碎后加入少量PBS，吹打至混合均勻，轉入15ml

離心管，定容至10ml，1500rpm，離心

10min，棄上清，用4ml

PBS重懸細胞；將4mL淋巴細胞分離液（室溫）預先加入到15ml離心管中，然后將細胞懸液緩慢加入到此離心管中（切記緩慢）；2200rpm，25℃，離心25min，注意，離心機一定要慢升慢降；用吸管吸取中間層的灰白細胞，放入另一只試管中，加10mlPBS，1500rpm，離心10min，棄上清，用2~5ml

PBS(4ml)重懸；正常小鼠淋巴細胞8.

取50μL細胞懸液制備細胞涂片，晾干后滴加瑞氏染液3~5滴，染1min，再于瑞氏染液上滴加等

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