毛細(xì)管電泳儀的使用電泳儀的使用方法

毛細(xì)管電泳儀的使用（原創(chuàng)）*電泳儀的使用方法毛細(xì)管，電泳儀，原創(chuàng)概要：準(zhǔn)備工作1.毛細(xì)管的制備：①剪略長于需要長度的毛細(xì)笥使用專用的裁剪紗布），斷端利用鑷子小心移除。②燒窗：從毛細(xì)管進(jìn)液端開始到實(shí)驗(yàn)者需要長度的位置燒窗，窗口盡量小，過程中可用防護(hù)工具對窗口兩端.準(zhǔn)備工作毛細(xì)管的制備：剪略長于需要長度的毛細(xì)管（使用專用的裁剪紗布）。斷端利用鑷子小心移除。燒窗：從毛細(xì)管進(jìn)液端開始到實(shí)驗(yàn)者需要長度的位置燒窗，窗口盡量小，過程中可用防護(hù)工具對窗口兩端的毛細(xì)管進(jìn)行防護(hù)。燒好的窗需用粘有酒精的棉花擦拭。注：檢測的有效長度為從毛細(xì)管進(jìn)液端到檢測窗之間的距離，這個(gè)距離一般根據(jù)實(shí)驗(yàn)者的需要自己掌握。取出卡槽：打開安放卡槽區(qū)域的門。旋轉(zhuǎn)固定卡槽的杠桿90度，按卡槽中央的釋放按鈕，握住卡槽的兩端向上抽出卡槽。安裝毛細(xì)管：將進(jìn)液端的毛細(xì)管小心的從卡槽的出口插入。進(jìn)入時(shí)可輕輕旋轉(zhuǎn)。當(dāng)窗口到達(dá)檢測點(diǎn)時(shí)停止插入，將游離的進(jìn)液端毛細(xì)管從卡槽的入口引出。并固定好毛細(xì)管外端的橡膠管。注：插入毛細(xì)管時(shí)小心操作，窗口位置的毛細(xì)管非常容易破裂，需格外謹(jǐn)慎。過程中切忌使用暴力。安放卡槽：用與取出的步驟相反順序的操作安放卡槽。添加樣品，緩沖液及沖洗液：為了減少樣品及緩沖液的揮發(fā)。在插入加液管前可在加樣管固定器的小孔內(nèi)加入少量的ddH2O。已添加好的加液管，在插入轉(zhuǎn)盤上的固定槽前先離心2min加液時(shí)注意加樣槍頭緊貼管壁，防止氣泡的產(chǎn)生。為了減少虹吸作用，需要保持入口處和出口處的runningbuffer量一致，對于500ul體積的加液管，推薦加入500ul的劑量；對1.5ml體積的加液管，推薦1.3ml的劑量。推薦加入樣品的最小劑量為50ul檢測需要的最小劑量為15ul。在出口處的waste管中加入50ul的ddH2O，可以防止檢測端的毛細(xì)管被沖洗液的殘留污染。電泳儀的操作插上電源。檢查電泳儀的連接情況。檢查制冷區(qū)小槽內(nèi)水量是否充足，打開電腦，打開電泳儀的開關(guān)（兩扇門都需要關(guān)閉）。在電腦桌面點(diǎn)開BioFocus的圖標(biāo)。進(jìn)入到BioFocus的控制界面。設(shè)置程序：①點(diǎn)擊Reagents鍵，在已有的ReagentsDatabase中查看是否含有需要使用的配液，有可點(diǎn)擊該配液查看?；蚴褂胑dit鍵進(jìn)行修改；沒有則點(diǎn)擊add進(jìn)行編輯添加。添加之后注意命名名稱的唯一性。點(diǎn)擊Cartridges鍵，對卡槽的相關(guān)參數(shù)進(jìn)行查看，修改。如CartridgesDatabase中沒有和試驗(yàn)要求匹配的配置參數(shù)則點(diǎn)擊Add進(jìn)行添加。注意需要激活相應(yīng)的或者設(shè)置的卡槽。點(diǎn)擊Configurations^Define：添加需要的信息：configurationID；Configurationdescription；selectthecartridge^Continue：Regent雙擊左下角regentdatabase中需要選擇的regent；雙擊屏幕右邊你需要放置該regent的InletCarouselPosition^Sample:命名。同樣的方式從左下角的Reagents中添加到右側(cè)相應(yīng)的位置上一點(diǎn)擊empty然后點(diǎn)擊需要刪除的Regent；點(diǎn)擊clear清除所有設(shè)置的Regent擺放次序一OK。注：在以上幾步中，記得同時(shí)設(shè)置好中止的清洗程序，及Shutdown程序。ddH2O清洗5分鐘。氮?dú)獯蹈?。點(diǎn)擊Methods：選擇設(shè)置好的程序-^Define:填寫MethodIDDescription^InletRegent0選擇電泳中需要的Runningbuffer^OutletRegent選擇電泳中需要的RunningbufferfVoltageMode填寫需要的電壓，電流，正負(fù)極。設(shè)定電泳時(shí)毛細(xì)管需要的溫度，以及電泳時(shí)間一Add:添加在電泳前后需要灌注的洗液等。填寫灌注的時(shí)間fInjection:選擇電壓或者氣壓的進(jìn)液方式；前者需選擇恒壓或者恒流。以及進(jìn)液時(shí)間的長短；后者需選擇壓力 *時(shí)間的進(jìn)液常數(shù)fDetector:DetectorParameters:設(shè)置波長。時(shí)間。通道，AU范圍；Displayparameters：設(shè)置波長。AU范圍。偏移；Options:設(shè)置RiseTimeTurnofflampatrunendDesignation：該設(shè)者存儲的位置fOK點(diǎn)擊AutoSeqs:選擇需要的程序fDefine查看。編輯需要調(diào)整的程序。如States顯示Conflict則需要對相應(yīng)的設(shè)置進(jìn)行調(diào)整。知道狀態(tài)顯示PendingfPendingoReadyfOKfStart停止，存儲，查看文件①等待所有的程序完成后(包括運(yùn)行程序及情節(jié)程序)。要停止運(yùn)行的程序。則可點(diǎn)擊屏幕左上角的Stop鍵f選擇需要中止運(yùn)行的某一步(AbortCurrentRunOnly)，某一組(AbortCurrentRunGroup)或所有編輯的程序(AbortAutomationSequencefOKf存儲在指定盤上(Yes),自定義盤(NO)f需要取出加液管及轉(zhuǎn)盤(YES)不需要(NO)注：在所有的對話框消失之前。以及轉(zhuǎn)盤沒有回到初始位置之前，不能打開電泳儀的門。操作要點(diǎn)：將毛細(xì)管電泳儀放置于有空調(diào)的房間。保持室溫恒定。同時(shí)。操作中控制毛細(xì)管及儀器恒溫。緩沖液加壓一段時(shí)間后。淌度和電滲流會變化，要經(jīng)常更換。緩沖液要用0.45mm微孔濾膜過濾后使用。對未涂漬的毛細(xì)管柱每天使用前先用0.1mol/L氫氧化鈉溶液、水及運(yùn)行緩沖液各沖洗10min平衡后使用。更換緩沖液時(shí)。要用水沖洗3min后，再用緩沖液沖洗10min平衡后進(jìn)樣。樣品宜溶于稀釋5~10倍的運(yùn)行緩沖液中。以獲得好的峰形。為提高定量準(zhǔn)確性。宜加入一內(nèi)標(biāo)。在保證峰形的前提下。樣品宜用高濃度，進(jìn)樣時(shí)間應(yīng)大于5psisec。摸索實(shí)驗(yàn)條件時(shí)?？上扔靡欢讨?，用磷酸鹽、硼砂或Tris在不同的pH值條件下試驗(yàn)。當(dāng)選定緩沖液種類時(shí)，可先改變pH值獲得最佳分離。再改變濃度以獲得較好的峰形及柱效。為使分析高效、快速，電壓一般可用18?20kv。每次作完實(shí)驗(yàn)后，用水沖洗5min，可將毛細(xì)管兩端置于水中保存。也可用氮?dú)獯蹈珊蟊４妗Ｃ?xì)管電泳儀的保養(yǎng)卡槽的清潔松開固定卡槽前方Holder的螺絲，用羊毛刷及ddH2O清潔卡槽。然后用干凈的刷子將其擦干。如果可以的話?？梢杂卯惐迹状蓟蛘咭掖即嫠M(jìn)行清潔，這樣保存的時(shí)間較長。壓力電極的清潔吸入端電極的清理非常重要，利用甲醇，異丙醇，或者乙醇清潔內(nèi)部及其頂端。在電極內(nèi)部小孔的頂部涂上一層薄薄的潤滑油進(jìn)行有效的防護(hù)。壓力電極底部邊緣的兩個(gè)小孔需要用羊毛刷和水每個(gè)月進(jìn)行清潔。毛細(xì)管卡槽的清潔每次電泳完畢之后。應(yīng)該將毛細(xì)管用清洗液。ddH2O沖洗。然后用氮?dú)獯蹈?。托盤的清潔托盤內(nèi)的小槽可能由于電泳液的溢出而收到污染，應(yīng)采用溫水以及性能較為溫和的去污劑浸泡。然后用ddH2O沖洗干凈。晾干，然后再安裝好。清洗過程中注意不要讓安放EP管的小槽劃出托盤，經(jīng)常使用的小槽應(yīng)重點(diǎn)清理。制冷器的更換及灌注在常規(guī)的使用中。制冷儲備槽應(yīng)當(dāng)經(jīng)常檢查和補(bǔ)充水量。水量應(yīng)控制在槽內(nèi)壁兩條線之間，每周加入1到2毫升的甲醇以防止細(xì)菌的滋長。使用電壓在20KV以下時(shí)，ddH2O可以作為制冷液，在20-25KV時(shí)。大部份的情況下仍然可以采用水作為制冷液，在沱25KV時(shí)就要采用FluorinertFC77Bio-Radcatalog#148-6050（機(jī)器配置時(shí)