液體活檢在NSCLC診療中的應(yīng)用

液體活檢

在NSCLC診療中的應(yīng)用周燕斌中山大學(xué)附屬第一醫(yī)院

呼吸內(nèi)科精準(zhǔn)醫(yī)療時代NSCLC診療面對的困境精準(zhǔn)醫(yī)療時代下NSCLC診療面對的困境約1/3晚期NSCLC患者無法獲得足夠用于檢測的組織樣本腫瘤的異質(zhì)性NEnglJMed.2012Mar8;366(10):883-92

不同患者的分子遺傳信息個體差異明顯；

同一患者的疾病不同部位分子遺傳信息存在差異；

同一患者的疾病不同階段分子遺傳信息存在差異；

實(shí)時腫瘤個體化治療依賴于由實(shí)時樣本提供實(shí)時分子遺傳信息；腫瘤實(shí)時個體化治療精準(zhǔn)醫(yī)療時代下NSCLC診療的臨床問題約1/3晚期NSCLC患者無法獲得用于檢測的組織樣本組織異質(zhì)性，活檢樣本無法反映腫瘤突變的全貌時空異質(zhì)性，無法實(shí)時監(jiān)測患者的病情血液標(biāo)本是首選的實(shí)時樣本！什么是液體活檢

Crowleyet.al,Nat.Rev.Clin.Oncol.，2013Aug;10(8):472-84游離DNActDNA和cfDNACTC循環(huán)腫瘤細(xì)胞什么是液體活檢？SchwarzenbachH,etal.Nat.Rev.Cancer.2011,11,426循環(huán)腫瘤DNA（CirculatingTumorDNA）循環(huán)腫瘤DNA（ctDNA)攜帶有實(shí)體瘤細(xì)胞基因突變/變異、甲基化、微衛(wèi)星序列改變等信息游離DNA（cfDNA）CellfreeDNA，外周血中一種無細(xì)胞狀態(tài)的胞外DNAKrebsetal.,NatRevClinOncol.2014;11(3):129-44.保留完整的細(xì)胞形態(tài)，可以提供數(shù)量、遺傳、細(xì)胞生物學(xué)特性等信息，指導(dǎo)預(yù)后循環(huán)腫瘤細(xì)胞（CirculatingTumorcells，CTC）ctDNA與CTC在臨床應(yīng)用中的比較類別臨床應(yīng)用優(yōu)勢臨床應(yīng)用劣勢CTCs有完整的細(xì)胞形態(tài)疾病轉(zhuǎn)移或進(jìn)展的預(yù)后判斷下游基因檢測或免疫研究可體外培養(yǎng)低豐度和易破碎CTC分離，步驟繁瑣假陽性和假陰性，表面抗原CTC的異質(zhì)性ctDNA數(shù)量多，容易檢測多可克服異質(zhì)性檢測到疾病進(jìn)展更加敏感基因檢測指導(dǎo)用藥可能影響治療方案假陽性和假陰性無法分離ctDNActDNACTC異質(zhì)性無有技術(shù)難點(diǎn)靈敏度CTC分離，靈敏度檢測內(nèi)容基因突變，突變豐度，濃度數(shù)量，基因突變臨床應(yīng)用伴隨診斷指導(dǎo)用藥預(yù)后預(yù)后動態(tài)監(jiān)測ctDNA檢測的臨床應(yīng)用更加簡單、成熟ctDNA與CTC技術(shù)指標(biāo)比較ctDNA的特點(diǎn)—片段化Heitzeret.al.,ClinicalChemistry2015,61(1)：112–123提示其來源為壞死和凋亡細(xì)胞ctDNA的特點(diǎn)—個體差異大腫瘤患者體內(nèi)ctDNA濃度0.01-90%不等，與臨床分期、分化程度密切相關(guān)Guoetal.,OncoTargetsTher.2015Nov6;8:3289-3296.Bettegowdaetal.,SciTranslMed.2014February19;6(224):224ra24如何檢測ctDNA的特點(diǎn)—代謝快半衰期約2h，可以實(shí)時反映腫瘤的變化情況

Crowleyet.al,Nat.Rev.Clin.Oncol.，2013Aug;10(8):472-84ab現(xiàn)有檢測技術(shù)比較技術(shù)檢出限檢測區(qū)域技術(shù)特點(diǎn)Sanger>10%全基因序列雙脫氧鏈終止法qPCR1%已知位點(diǎn)熒光素標(biāo)記ARMSPCR0.1%已知位點(diǎn)擴(kuò)增阻滯突變NGS0.1-1%全基因序列SBS/半導(dǎo)體測序數(shù)字PCR0.01%或更低已知位點(diǎn)微滴反應(yīng)數(shù)字PCR：超靈敏的精確定量方法“Divide

and

Conquer”

Digital

PCR是一種基于單分子模板PCR擴(kuò)增，進(jìn)行核算拷貝數(shù)精確定量的分析方法數(shù)字PCR平臺結(jié)果判讀可檢測低至0.04%的EGFR790M突變更高靈敏度更適合ctDNA的檢測精確定量更適合做動態(tài)監(jiān)測操作簡便，周期短適合臨床應(yīng)用數(shù)字PCR與其他方法的比較Thressetal.,LungCancer,2015,90(3):509-515驅(qū)動基因并行檢測與NSCLC治療Shamesetal.,JPathol.2014Jan;232(2):121-33一代EGFRTKI和克唑替尼獲得性耐藥機(jī)制Camidgeetal.,NatRevClinOncol.2014Aug;11(8):473-81.EGFRTKI耐藥機(jī)制：信號通路KRAS等