第四章食品安全性評(píng)價(jià)基本方法課件

第四章

食品安全評(píng)價(jià)基本方法第四章

食品安全評(píng)價(jià)基本方法本章內(nèi)容概述11.急性毒性試驗(yàn)及其評(píng)價(jià)2.亞慢性和慢性毒性試驗(yàn)及其評(píng)價(jià)3.遺傳毒性試驗(yàn)4.致癌試驗(yàn)5.生殖發(fā)育試驗(yàn)本章內(nèi)容概述11.急性毒性試驗(yàn)及其評(píng)價(jià)第一節(jié)急性毒性試驗(yàn)及其評(píng)價(jià)急性毒性試驗(yàn)概述急性毒性試驗(yàn)的目的急性毒性試驗(yàn)的主要參數(shù)急性毒性的試驗(yàn)方法急性毒性試驗(yàn)結(jié)果評(píng)價(jià)本節(jié)內(nèi)容第一節(jié)急性毒性試驗(yàn)及其評(píng)價(jià)急性毒性試驗(yàn)概述急性毒性試驗(yàn)的第一節(jié)急性毒性試驗(yàn)及其評(píng)價(jià)一、急性毒性試驗(yàn)概述1.定義（1）指機(jī)體（人或試驗(yàn)動(dòng)物）一次接觸或24h內(nèi)多次接觸化學(xué)物后在短期內(nèi)（最長(zhǎng)到14d）所發(fā)生的毒性效應(yīng)。（2）一次接觸經(jīng)口和注射接觸，“一次”指在瞬間將受試化學(xué)物輸入實(shí)驗(yàn)動(dòng)物體內(nèi)；經(jīng)呼吸道吸入與經(jīng)皮膚接觸，“一次”指在一個(gè)特定期間內(nèi)實(shí)驗(yàn)動(dòng)物持續(xù)地接觸受試化學(xué)物的過(guò)程第一節(jié)急性毒性試驗(yàn)及其評(píng)價(jià)一、急性毒性試驗(yàn)概述經(jīng)口和注射第一節(jié)急性毒性試驗(yàn)及其評(píng)價(jià)確定急性毒性評(píng)價(jià)參數(shù)找出劑量-效應(yīng)劑量-反應(yīng)關(guān)系試驗(yàn)?zāi)康腁B為毒作用機(jī)制研究提供線索D為后續(xù)試驗(yàn)的劑量和觀察指標(biāo)選擇提供依據(jù)C二、急性毒性試驗(yàn)的試驗(yàn)?zāi)康牡谝还?jié)急性毒性試驗(yàn)及其評(píng)價(jià)確定急性毒找出劑量-效應(yīng)試驗(yàn)?zāi)康谝还?jié)急性毒性試驗(yàn)及其評(píng)價(jià)三、急性毒性試驗(yàn)的主要參數(shù)第一節(jié)急性毒性試驗(yàn)及其評(píng)價(jià)三、急性毒性試驗(yàn)的主要參數(shù)第一節(jié)急性毒性試驗(yàn)及其評(píng)價(jià)三、急性毒性試驗(yàn)的主要參數(shù)1.ED50與EC50（半數(shù)效應(yīng)劑量或濃度）指一次給予實(shí)驗(yàn)動(dòng)物某種化學(xué)物質(zhì)引起動(dòng)物群體中50%個(gè)體出現(xiàn)某種特殊效應(yīng)的劑量。2.ATE（急性毒性估計(jì)值）同一受試物在不同實(shí)驗(yàn)室、不同動(dòng)物之間，或在重復(fù)實(shí)驗(yàn)中獲得的LD50值有很大差異對(duì)某些低毒或劇毒物質(zhì)沒(méi)必要準(zhǔn)確確定LD50（LC50）便可對(duì)受試物毒性分級(jí)處于動(dòng)物福利觀念和節(jié)約資金、資源、時(shí)間和人力的觀念。第一節(jié)急性毒性試驗(yàn)及其評(píng)價(jià)三、急性毒性試驗(yàn)的主要參數(shù)第一節(jié)急性毒性試驗(yàn)及其評(píng)價(jià)1234以死亡和死亡率作為試驗(yàn)終點(diǎn)和急性毒性的評(píng)定參數(shù)；可以獲得劑量-效應(yīng)/反應(yīng)曲線、曲線的斜率、LD50及其可信限等重要參數(shù)；實(shí)驗(yàn)動(dòng)物用量大；是一種體內(nèi)試驗(yàn)方法。四、急性毒性試驗(yàn)的試驗(yàn)方法1.經(jīng)典急性毒性試驗(yàn)的特點(diǎn)第一節(jié)急性毒性試驗(yàn)及其評(píng)價(jià)1234以死亡和死可以獲得劑實(shí)第一節(jié)急性毒性試驗(yàn)及其評(píng)價(jià)四、急性毒性試驗(yàn)的試驗(yàn)方法2.實(shí)驗(yàn)動(dòng)物（1）動(dòng)物物種選擇原則：實(shí)驗(yàn)動(dòng)物接觸受試物的毒性反應(yīng)與

人類(lèi)基本一致，并且對(duì)受試物最敏感兩種實(shí)驗(yàn)動(dòng)物：嚙齒類(lèi)動(dòng)物：大鼠、小鼠、豚鼠、兔非嚙齒類(lèi)動(dòng)物：狗、猴第一節(jié)急性毒性試驗(yàn)及其評(píng)價(jià)四、急性毒性試驗(yàn)的試驗(yàn)方法嚙齒第一節(jié)急性毒性試驗(yàn)及其評(píng)價(jià)四、急性毒性試驗(yàn)的試驗(yàn)方法2.實(shí)驗(yàn)動(dòng)物（2）動(dòng)物品系的選擇大鼠品系為SD（sprague-dawley）和Wistar大鼠

小鼠品系為昆明種、NIH和ICR（3）性別和年齡的選擇

一般雌雄各半

一般選擇初成年者動(dòng)物體重動(dòng)物體重動(dòng)物體重大鼠180~240g家兔2~2.5kg犬10~12kg小鼠18~25g豚鼠200~250g貓1.5~2kg第一節(jié)急性毒性試驗(yàn)及其評(píng)價(jià)四、急性毒性試驗(yàn)的試驗(yàn)方法動(dòng)物第一節(jié)急性毒性試驗(yàn)及其評(píng)價(jià)四、急性毒性試驗(yàn)的試驗(yàn)方法2.實(shí)驗(yàn)動(dòng)物（4）實(shí)驗(yàn)動(dòng)物數(shù)量和分組一般分5~7組，大、小鼠不少于10只，家兔不少于8只，犬不少于6只

分組遵循隨機(jī)原則（5）動(dòng)物飼養(yǎng)和管理

動(dòng)物在實(shí)驗(yàn)前應(yīng)有1~2周檢疫觀察期

適應(yīng)飼料和環(huán)境3~5d

染毒前禁食、空腹，大鼠和大型動(dòng)物隔夜禁食，小鼠禁食4h左右，染毒后禁食2~4h。飲水不限。第一節(jié)急性毒性試驗(yàn)及其評(píng)價(jià)四、急性毒性試驗(yàn)的試驗(yàn)方法第一節(jié)急性毒性試驗(yàn)及其評(píng)價(jià)急性毒性試驗(yàn)的試驗(yàn)方法3.受試物處理和染毒途徑（2）染毒途徑

經(jīng)口染毒

經(jīng)呼吸道染毒經(jīng)皮膚染毒經(jīng)注射染毒

染毒途徑第一節(jié)急性毒性試驗(yàn)及其評(píng)價(jià)急性毒性試驗(yàn)的試驗(yàn)方法經(jīng)口第一節(jié)急性毒性試驗(yàn)及其評(píng)價(jià)四、急性毒性試驗(yàn)的試驗(yàn)方法5.試驗(yàn)周期14天為宜6.毒性觀察中毒癥狀死亡時(shí)間和數(shù)量動(dòng)物體重變化病理學(xué)檢查其他指標(biāo)第一節(jié)急性毒性試驗(yàn)及其評(píng)價(jià)四、急性毒性試驗(yàn)的試驗(yàn)方法第一節(jié)急性毒性試驗(yàn)及其評(píng)價(jià)四、急性毒性試驗(yàn)的試驗(yàn)方法7.試驗(yàn)設(shè)計(jì)與LD50計(jì)算常用方法改良寇氏法方法1霍恩氏法方法2威爾氏法方法3概率單位法方法4第一節(jié)急性毒性試驗(yàn)及其評(píng)價(jià)四、急性毒性試驗(yàn)的試驗(yàn)方法常用第一節(jié)急性毒性試驗(yàn)及其評(píng)價(jià)五、急性毒性試驗(yàn)結(jié)果評(píng)價(jià)1.分級(jí)標(biāo)準(zhǔn)第一節(jié)急性毒性試驗(yàn)及其評(píng)價(jià)五、急性毒性試驗(yàn)結(jié)果評(píng)價(jià)第二節(jié)急性毒性試驗(yàn)及其評(píng)價(jià)五、急性毒性試驗(yàn)結(jié)果評(píng)價(jià)1.分級(jí)標(biāo)準(zhǔn)我國(guó)工業(yè)毒物急性毒性分級(jí)標(biāo)準(zhǔn)急性毒性分級(jí)小鼠1次經(jīng)口LD50/（mg/kg）小鼠吸入2hLC50/（mg/m3）兔經(jīng)皮LD50/（mg/kg）劇毒＜10＜50＜10高毒11~10051~50011~50中等毒101~1000501~500051~500低毒1001~100005001~50000501~5000微毒＞10000＞50000＞5001第二節(jié)急性毒性試驗(yàn)及其評(píng)價(jià)五、急性毒性試驗(yàn)結(jié)果評(píng)價(jià)急性毒第二節(jié)急性毒性試驗(yàn)及其評(píng)價(jià)五、急性毒性試驗(yàn)結(jié)果評(píng)價(jià)1.分級(jí)標(biāo)準(zhǔn)我國(guó)農(nóng)藥急性毒性分級(jí)標(biāo)準(zhǔn)毒性分級(jí)經(jīng)口LD50/(mg/kg)經(jīng)皮LD50/(mg/kg)，4h吸入LD50/(mg/m3)，2h劇毒＜5＜20＜20高毒5~5020~20020~200中等毒50~500200~2000200~2000低毒＞500＞2000＞2000第二節(jié)急性毒性試驗(yàn)及其評(píng)價(jià)五、急性毒性試驗(yàn)結(jié)果評(píng)價(jià)我國(guó)農(nóng)第二節(jié)亞慢性和慢性毒性試驗(yàn)及其結(jié)果評(píng)價(jià)

亞慢性和慢性毒性試驗(yàn)概述亞慢性和慢性毒性試驗(yàn)的目的亞慢性和慢性毒性試驗(yàn)的方法亞慢性和慢性毒性試驗(yàn)結(jié)果評(píng)價(jià)1234本節(jié)內(nèi)容第二節(jié)亞慢性和慢性毒性試驗(yàn)及其結(jié)果評(píng)價(jià)亞慢性和慢性毒第二節(jié)亞慢性和慢性毒性作用和評(píng)價(jià)一、亞慢性毒性試驗(yàn)1.定義：指人或?qū)嶒?yàn)動(dòng)物連續(xù)較長(zhǎng)時(shí)間接觸較大劑量的外源化學(xué)物所引起的毒性效應(yīng)。2.持續(xù)時(shí)間：實(shí)驗(yàn)動(dòng)物壽命的1/30~1/10，一般為3個(gè)月。3.劑量與染毒：上限劑量＜LD50，每次染毒劑量及染毒時(shí)間相等。二、慢性毒性試驗(yàn)1.定義：指實(shí)驗(yàn)動(dòng)物或人長(zhǎng)期（甚至終生）反復(fù)接觸外源化學(xué)物所產(chǎn)生的毒性效應(yīng)。2.持續(xù)時(shí)間：嚙齒類(lèi)動(dòng)物生命周期的絕大部分時(shí)間或終生。3.舉例：小鼠18個(gè)月，大鼠24個(gè)月，其他動(dòng)物一般為2年，特殊情況可長(zhǎng)達(dá)7~10年。概述第二節(jié)亞慢性和慢性毒性作用和評(píng)價(jià)一、亞慢性毒性試驗(yàn)二、慢第二節(jié)亞慢性和慢性毒性作用和評(píng)價(jià)一、亞慢性和慢性毒性試驗(yàn)的目的1確定受試物亞慢性和慢性毒性的效應(yīng)譜，對(duì)在急性毒性試驗(yàn)中發(fā)現(xiàn)的毒作用提供新信息，并發(fā)現(xiàn)以往未發(fā)現(xiàn)的毒作用2研究受試物亞慢性和慢性毒作用的靶器官3研究受試物亞慢性和慢性毒性劑量-反應(yīng)（效應(yīng)）關(guān)系，確定其LOAEL和NOAEL，提出安全限量參考值第二節(jié)亞慢性和慢性毒性作用和評(píng)價(jià)一、亞慢性和慢性毒性試驗(yàn)第二節(jié)亞慢性和慢性毒性作用和評(píng)價(jià)一、亞慢性和慢性毒性試驗(yàn)的目的4研究受試物亞慢性和慢性毒性損害的可逆性5亞慢性毒性試驗(yàn)為慢性毒性試驗(yàn)的劑量設(shè)計(jì)及觀察指標(biāo)的選擇提供依據(jù)6確定不同動(dòng)物物種對(duì)受試物亞慢性和慢性毒效應(yīng)的差異，為將毒性研究結(jié)果外推到人提供依據(jù)第二節(jié)亞慢性和慢性毒性作用和評(píng)價(jià)一、亞慢性和慢性毒性試驗(yàn)第二節(jié)亞慢性和慢性毒性作用和評(píng)價(jià)二、亞慢性毒性試驗(yàn)方法1.實(shí)驗(yàn)動(dòng)物的選擇2.染毒途徑3.劑量選擇與分組4.觀察指標(biāo)一般指標(biāo)生理生化指標(biāo)病理學(xué)檢查特異性指標(biāo)中毒癥狀動(dòng)物體重食物利用率尸檢臟器系數(shù)組織學(xué)檢查第二節(jié)亞慢性和慢性毒性作用和評(píng)價(jià)二、亞慢性毒性試驗(yàn)方法一第二節(jié)亞慢性和慢性毒性作用和評(píng)價(jià)二、亞慢性毒性試驗(yàn)方法1.實(shí)驗(yàn)動(dòng)物的選擇（1）種系選擇（2）性別：一般雌雄各半（3）年齡小鼠15g左右，大鼠100g左右組內(nèi)體重差不超過(guò)平均體重的10%;

組間體重差不超過(guò)平均體重的5%（4）數(shù)量小動(dòng)物每組不少于20只，大動(dòng)物每組6~8只試驗(yàn)中期如果要處死動(dòng)物則要相應(yīng)增加數(shù)量嚙齒類(lèi)動(dòng)物非嚙齒類(lèi)動(dòng)物：犬——Beagle犬小白鼠：昆明種、NIH或ICR大白鼠：Wistar、SD第二節(jié)亞慢性和慢性毒性作用和評(píng)價(jià)二、亞慢性毒性試驗(yàn)方法嚙第二節(jié)亞慢性和慢性毒性作用和評(píng)價(jià)二、亞慢性毒性試驗(yàn)方法2.染毒途徑（1）選擇原則（2）經(jīng)口染毒飼喂法：每日染毒，連續(xù)給予，定時(shí)定量灌胃和膠囊吞咽法：適用于有異味、易揮發(fā)、易水解、易氧化的受試物（1）盡量模擬人類(lèi)在環(huán)境中接觸化合

物的途徑或方式（2）與預(yù)期進(jìn)行慢性毒性試驗(yàn)的接觸

途徑相一致第二節(jié)亞慢性和慢性毒性作用和評(píng)價(jià)二、亞慢性毒性試驗(yàn)方法（第二節(jié)亞慢性和慢性毒性作用和評(píng)價(jià)二、亞慢性毒性試驗(yàn)方法3.劑量選擇與分組（1）試驗(yàn)設(shè)組高劑量組、中劑量組、低劑量組、空白對(duì)照組（2）劑量設(shè)計(jì)原則高劑量組在試驗(yàn)期內(nèi)既不發(fā)生死亡，又能引起明顯的毒性反應(yīng)，或僅有個(gè)別動(dòng)物死亡（＜10%）中劑量組為觀察到最小損害作用劑量（LOAEL）低劑量組為未觀察到損害作用劑量（NOAEL）第二節(jié)亞慢性和慢性毒性作用和評(píng)價(jià)二、亞慢性毒性試驗(yàn)方法第二節(jié)亞慢性和慢性毒性作用和評(píng)價(jià)二、亞慢性毒性試驗(yàn)方法3.劑量選擇與分組（3）劑量設(shè)計(jì)依據(jù)高劑量組：急性毒性試驗(yàn)的閾劑量，或LD50的1/20~1/5中、低劑量組：以3~10倍公比等比設(shè)計(jì)3組劑量一般適宜設(shè)計(jì)范圍為L(zhǎng)D50的1/10~1/80之間做等比設(shè)計(jì)第二節(jié)亞慢性和慢性毒性作用和評(píng)價(jià)二、亞慢性毒性試驗(yàn)方法第二節(jié)亞慢性和慢性毒性作用和評(píng)價(jià)二、亞慢性毒性試驗(yàn)方法4.觀察指標(biāo)（1）一般指標(biāo)中毒癥狀：每日觀察實(shí)驗(yàn)動(dòng)物出現(xiàn)的行為改變和客觀征象的異常，出現(xiàn)的時(shí)間和先后次序動(dòng)物體重：每周稱重，在上午的同一時(shí)間進(jìn)行；觀察各組間差異是否有劑量-反應(yīng)關(guān)系食物利用率定義：動(dòng)物每食入100g飼料所增加的體重克數(shù)。若干擾物質(zhì)吸收代謝，則食物利用率↓，體重↓；若不適口而降低食欲，則食物利用率不變，體重↓第二節(jié)亞慢性和慢性毒性作用和評(píng)價(jià)二、亞慢性毒性試驗(yàn)方法第二節(jié)亞慢性和慢性毒性作用和評(píng)價(jià)二、亞慢性毒性試驗(yàn)方法4.觀察指標(biāo)（2）生理生化指標(biāo)血常規(guī)：紅細(xì)胞數(shù)（RBC）、白細(xì)胞數(shù)（WBC）、血紅蛋白量（Hb）、紅細(xì)胞壓積容量（PCV）、白細(xì)胞分類(lèi)數(shù)（DC）、血凝時(shí)間血液生化指標(biāo)：血清總蛋白（TG）、白蛋白（ALB）、血糖（GLU）、血清尿素氮（BUN）、總膽紅素（T-BIL）、肌酐（Crea）、總膽固醇（T-CHO）、總甘油三酯（TG）、LDL、VLDL、HDL、谷丙轉(zhuǎn)氨酶（SGPT）、谷草轉(zhuǎn)氨酶（SGOT）、堿性磷酸酶（ALP）等尿指標(biāo)：外觀、pH值、尿蛋白、尿糖、尿潛血等第二節(jié)亞慢性和慢性毒性作用和評(píng)價(jià)二、亞慢性毒性試驗(yàn)方法第二節(jié)亞慢性和慢性毒性作用和評(píng)價(jià)二、亞慢性毒性試驗(yàn)方法4.觀察指標(biāo)（3）病理學(xué)檢查尸檢臟器系數(shù)定義：又稱臟/體比值，指某個(gè)臟器濕重在每100g體重中所占的質(zhì)量。舉例：肝/體比，即（全肝濕重/體重）×100

意義：增加則表明有充血、水腫、增生、肥大等減小則表明出現(xiàn)萎縮、退行性變化等組織學(xué)檢查第二節(jié)亞慢性和慢性毒性作用和評(píng)價(jià)二、亞慢性毒性試驗(yàn)方法第二節(jié)亞慢性和慢性毒性作用和評(píng)價(jià)二、亞慢性毒性試驗(yàn)方法4.觀察指標(biāo)（4）特異指標(biāo)定義：指受試物對(duì)機(jī)體亞慢性毒性作用本質(zhì)的特征性指標(biāo)。獲得方法（1）分析急性毒作用特征，初步發(fā)現(xiàn)主要危害的組織系統(tǒng)或靶器官，從而發(fā)現(xiàn)敏感或特異的指標(biāo)（2）進(jìn)行文獻(xiàn)檢索，參考一些化學(xué)物的某些特殊基團(tuán)具有的特定毒性，利用其化學(xué)結(jié)構(gòu)中的共性來(lái)選擇亞慢性毒性指標(biāo)第二節(jié)亞慢性和慢性毒性作用和評(píng)價(jià)二、亞慢性毒性試驗(yàn)方法第二節(jié)亞慢性和慢性毒性作用和評(píng)價(jià)三、慢性毒性試驗(yàn)方法實(shí)驗(yàn)動(dòng)物的選擇染毒途徑劑量選擇與分組觀察指標(biāo)1234第二節(jié)亞慢性和慢性毒性作用和評(píng)價(jià)三、慢性毒性試驗(yàn)方法實(shí)驗(yàn)第二節(jié)亞慢性和慢性毒性作用和評(píng)價(jià)三、慢性毒性試驗(yàn)方法1.實(shí)驗(yàn)動(dòng)物的選擇（1）種系選擇嚙齒類(lèi)首選大鼠，非嚙齒類(lèi)選犬和猴（2）性別：一般雌雄各半（3）年齡大鼠和小鼠為初斷奶者小鼠3w，10~12g；大鼠3~4w，50~70g；犬4~6month（4）數(shù)量每組小動(dòng)物≥40只，大動(dòng)物≥8只第二節(jié)亞慢性和慢性毒性作用和評(píng)價(jià)三、慢性毒性試驗(yàn)方法第二節(jié)亞慢性和慢性毒性作用和評(píng)價(jià)三、慢性毒性試驗(yàn)方法2.染毒途徑與人類(lèi)接觸途徑相似，一般采用經(jīng)口喂飼方法3.劑量設(shè)計(jì)與分組慢性毒性試驗(yàn)劑量設(shè)計(jì)參考值參考劑量名稱亞慢性閾劑量LD50MTD高劑量1/5~1/21/101/2中劑量1/50~1/101/1001/4低劑量1/1001/1000_第二節(jié)亞慢性和慢性毒性作用和評(píng)價(jià)三、慢性毒性試驗(yàn)方法參考第二節(jié)亞慢性和慢性毒性作用和評(píng)價(jià)三、慢性毒性試驗(yàn)方法4.觀察指標(biāo)（1）以亞慢性毒性試驗(yàn)的觀察指標(biāo)為基礎(chǔ)，優(yōu)先采用亞慢性毒性試驗(yàn)篩選出來(lái)的敏感、特異指標(biāo)。（2）注意試驗(yàn)前對(duì)預(yù)計(jì)觀察指標(biāo)，尤其是生理生化指標(biāo)進(jìn)行正常值測(cè)定，廢棄個(gè)體差異大的動(dòng)物試驗(yàn)期間進(jìn)行動(dòng)態(tài)觀察的各項(xiàng)指標(biāo)應(yīng)與對(duì)照組同步測(cè)定所采用的各種化驗(yàn)方法應(yīng)精確、可靠，且進(jìn)行質(zhì)量控制（3）了解毒性反應(yīng)的可逆程度第二節(jié)亞慢性和慢性毒性作用和評(píng)價(jià)三、慢性毒性試驗(yàn)方法第二節(jié)亞慢性和慢性毒性作用和評(píng)價(jià)四、亞慢性和慢性毒性試驗(yàn)結(jié)果評(píng)價(jià)1.亞慢性毒性評(píng)價(jià)試驗(yàn)中最敏感指標(biāo)的NOAEL和LOAEL（1）NOAEL小于人的可能攝入量的100倍，表示毒性較強(qiáng)，應(yīng)予放棄；（2）NOAEL大于100倍而小于300倍，繼續(xù)進(jìn)行慢性毒性試驗(yàn)；（3）NOAEL大于或等于300倍者，不必進(jìn)行慢性試驗(yàn)，直接進(jìn)行毒性評(píng)價(jià)。第二節(jié)亞慢性和慢性毒性作用和評(píng)價(jià)四、亞慢性和慢性毒性試驗(yàn)第二節(jié)亞慢性和慢性毒性作用和評(píng)價(jià)四、亞慢性和慢性毒性試驗(yàn)結(jié)果評(píng)價(jià)2.慢性毒性評(píng)價(jià)試驗(yàn)中最敏感指標(biāo)的NOAEL和LOAEL。計(jì)算慢性毒性作用帶（Zch）（1）NOAEL小于或等于人群的可能攝入量的50倍者，表示毒性較強(qiáng)，應(yīng)予放棄；（2）NOAEL大于50倍而小于100倍，需相關(guān)專(zhuān)家共同評(píng)議是否用于食品；（3）NOAEL大于或等于100倍者，則予考慮允許使用于食品，并制定衛(wèi)生標(biāo)準(zhǔn)。第二節(jié)亞慢性和慢性毒性作用和評(píng)價(jià)四、亞慢性和慢性毒性試驗(yàn)第三節(jié)食品中化學(xué)物質(zhì)的致突變作用及評(píng)價(jià)12概述致突變作用的類(lèi)型致突變作用的機(jī)制及后果致突變作用的評(píng)價(jià)方法4321第三節(jié)食品中化學(xué)物質(zhì)的致突變作用及評(píng)價(jià)12概述致突變作用的致突變作用的評(píng)價(jià)方法一、觀察項(xiàng)目的選擇1.觀察的效應(yīng)終點(diǎn)類(lèi)型遺傳學(xué)終點(diǎn)的分類(lèi)基因突變?nèi)旧w畸變DNA損傷等其他遺傳損傷的檢測(cè)致突變作用的評(píng)價(jià)方法一、觀察項(xiàng)目的選擇致突變作用的評(píng)價(jià)方法二、主要的致突變?cè)囼?yàn)1.基因突變檢測(cè)方法微生物試驗(yàn)哺乳動(dòng)物細(xì)胞基因突變?cè)囼?yàn)果蠅伴性隱性致死試驗(yàn)轉(zhuǎn)基因動(dòng)物突變?cè)囼?yàn)鼠傷寒沙門(mén)菌/組氨酸回復(fù)突變?cè)囼?yàn)（Ames試驗(yàn)）大腸桿菌WP2回復(fù)突變?cè)囼?yàn)酵母菌正向/回復(fù)突變?cè)囼?yàn)致突變作用的評(píng)價(jià)方法二、主要的致突變?cè)囼?yàn)微生物試驗(yàn)鼠傷寒沙門(mén)致突變作用的評(píng)價(jià)方法二、主要的致突變?cè)囼?yàn)1.基因突變檢測(cè)方法⑴微生物試驗(yàn)——Ames試驗(yàn)指示微生物：鼠傷寒沙門(mén)菌組氨酸缺陷突變株原理：利用若干不同基因型的組氨酸缺陷型菌株，每個(gè)菌株具有其獨(dú)特的回復(fù)突變“靶點(diǎn)”順序，可以由不同類(lèi)型的堿基置換和移碼誘變劑誘發(fā)回復(fù)突變。鼠傷寒沙門(mén)氏菌原養(yǎng)型（his+）正向突變回復(fù)突變組氨酸營(yíng)養(yǎng)缺陷性突變株（his-）受試物±代謝活化系統(tǒng)致突變作用的評(píng)價(jià)方法二、主要的致突變?cè)囼?yàn)鼠傷寒沙門(mén)氏菌原養(yǎng)型致突變作用的評(píng)價(jià)方法二、主要的致突變?cè)囼?yàn)1.基因突變檢測(cè)方法⑴微生物試驗(yàn)——Ames試驗(yàn)這組檢測(cè)菌株含有下列突變：①組氨酸基因突變②脂多糖屏障丟失（rfa）：大分子待測(cè)物能穿透菌膜進(jìn)入菌體，從而抑制其生長(zhǎng)，而野生型菌株則不受影響③紫外線切除修復(fù)系統(tǒng)缺失（ΔuvrB）：紫外線照射后不能生長(zhǎng)④抗藥性標(biāo)記R：某些菌株具有抗氨芐青霉素的質(zhì)粒，提高檢出的靈敏性，假若測(cè)試菌照常在氨芐青霉素/四環(huán)素平板上生長(zhǎng)，則具有pAQI質(zhì)粒。致突變作用的評(píng)價(jià)方法二、主要的致突變?cè)囼?yàn)致突變作用的評(píng)價(jià)方法二、主要的致突變?cè)囼?yàn)1.基因突變檢測(cè)方法⑴微生物試驗(yàn)——Ames試驗(yàn)致突變作用的評(píng)價(jià)方法二、主要的致突變?cè)囼?yàn)致突變作用的評(píng)價(jià)方法二、主要的致突變?cè)囼?yàn)1.基因突變檢測(cè)方法⑴微生物試驗(yàn)——Ames試驗(yàn)活化系統(tǒng)——S9混合液

①將一組雄性大鼠進(jìn)行腹腔注射芳香族化合物（如多氯聯(lián)苯）油溶液等，以誘導(dǎo)肝臟酶系的活性，4d后殺鼠取肝臟。

②勻漿后9000g離心，所得的上清液（S9）加上NADP及葡萄糖-6-磷酸等輔助因子即制成。致突變作用的評(píng)價(jià)方法二、主要的致突變?cè)囼?yàn)致突變作用的評(píng)價(jià)方法二、主要的致突變?cè)囼?yàn)1.基因突變檢測(cè)方法⑴微生物試驗(yàn)——Ames試驗(yàn)優(yōu)點(diǎn)

方法靈敏，檢出率高，有約90%的化學(xué)致癌物都可獲得陽(yáng)性結(jié)果；方法簡(jiǎn)便、易行，不需特殊器材，容易推廣。缺點(diǎn)

微生物的DNA修復(fù)系統(tǒng)比哺乳動(dòng)物簡(jiǎn)單，基因不如哺乳動(dòng)物多，不能完全代表哺乳動(dòng)物的實(shí)際情況。致突變作用的評(píng)價(jià)方法二、主要的致突變?cè)囼?yàn)致突變作用的評(píng)價(jià)方法二、主要的致突變?cè)囼?yàn)1.基因突變檢測(cè)方法⑴微生物試驗(yàn)——大腸桿菌WP2回復(fù)突變?cè)囼?yàn)指示微生物：大腸桿菌的色氨酸缺陷型菌株原理：與Ames試驗(yàn)相似檢測(cè)誘變劑類(lèi)型：堿基替換特點(diǎn)：WP2pKM101所能檢測(cè)的誘變劑能夠覆蓋大量的TA102特異誘變劑；WP2uurA/pKM101在誘變性檢測(cè)上具有與TA102一致敏感性，且對(duì)丙烯酸酯類(lèi)衍生物和氯乙酸酯類(lèi)衍生物的遺傳毒性檢測(cè)具有特異性。致突變作用的評(píng)價(jià)方法二、主要的致突變?cè)囼?yàn)致突變作用的評(píng)價(jià)方法二、主要的致突變?cè)囼?yàn)1.基因突變檢測(cè)方法⑴微生物試驗(yàn)——酵母菌正向/回復(fù)突變?cè)囼?yàn)可檢測(cè)的類(lèi)型：正向突變、回復(fù)突變、有絲分裂重組和非整倍體4種類(lèi)型缺點(diǎn)：很多具有遺傳毒性的分子不能透過(guò)酵母菌的細(xì)胞膜，而不能達(dá)到DNA靶分子酵母的ADE1、ADE2菌株少量腺嘌呤的培養(yǎng)基白色菌落酵母的ADE1、ADE2突變菌株少量腺嘌呤的培養(yǎng)基紅色菌落嘌呤生物合成阻滯致突變作用的評(píng)價(jià)方法二、主要的致突變?cè)囼?yàn)酵母的ADE1、AD致突變作用的評(píng)價(jià)方法二、主要的致突變?cè)囼?yàn)1.基因突變檢測(cè)方法⑵哺乳動(dòng)物細(xì)胞基因突變?cè)囼?yàn)試驗(yàn)原理（如右圖）突變頻率：指觀察到的突變細(xì)胞數(shù)與存活細(xì)胞數(shù)的比值。常用的試驗(yàn)方法①小鼠淋巴瘤（L5178Y）細(xì)胞苷激酶位點(diǎn)（TK）突變檢測(cè)②中國(guó)倉(cāng)鼠卵巢（CHO）細(xì)胞及中國(guó)倉(cāng)鼠肺（V79）細(xì)胞次黃嘌呤-鳥(niǎo)嘌呤轉(zhuǎn)磷酸核糖基酶位點(diǎn)（HGPRT）突變檢測(cè)細(xì)胞+受試物代謝活化系統(tǒng)細(xì)胞傳代6-TG或TFT形成集落未形成集落計(jì)算突變頻率以評(píng)價(jià)受試物的致突變性6-TG：6-硫代鳥(niǎo)嘌呤；TFT：三氟胸腺致突變作用的評(píng)價(jià)方法二、主要的致突變?cè)囼?yàn)細(xì)胞+受試物代謝活細(xì)致突變作用的評(píng)價(jià)方法二、主要的致突變?cè)囼?yàn)1.基因突變檢測(cè)方法⑵哺乳動(dòng)物細(xì)胞基因突變?cè)囼?yàn)TK基因

位于常染色體TK基因位點(diǎn)突變可反映HGPRT基因

位于X染色體，半合子狀態(tài)，能被必需的基因隱蔽應(yīng)用受限：大范圍的缺失、同源有絲分裂重組、染色體斷裂和數(shù)目改變一般不表現(xiàn)出突變克隆增加基因突變基因缺失基因轉(zhuǎn)變基因易位有絲分裂重組致突變作用的評(píng)價(jià)方法二、主要的致突變?cè)囼?yàn)基因突變致突變作用的評(píng)價(jià)方法二、主要的致突變?cè)囼?yàn)1.基因突變檢測(cè)方法⑶果蠅伴性隱性致死試驗(yàn)優(yōu)點(diǎn)：果蠅體內(nèi)對(duì)化學(xué)物的生物轉(zhuǎn)化能力與哺乳動(dòng)物相似，世代周期短、繁殖率高、飼養(yǎng)方便、經(jīng)濟(jì)、判斷突變終點(diǎn)客觀、不需活化等。缺點(diǎn)：與哺乳動(dòng)物差異較大，染毒方式與劑量計(jì)算等都與哺乳動(dòng)物試驗(yàn)不同。結(jié)果判定：陰性結(jié)果判定和外推要要慎重致突變作用的評(píng)價(jià)方法二、主要的致突變?cè)囼?yàn)致突變作用的評(píng)價(jià)方法二、主要的致突變?cè)囼?yàn)1.基因突變檢測(cè)方法⑶果蠅伴性隱性致死試驗(yàn)原理：①隱性基因在伴性遺傳中的交叉遺傳性，即雄蠅的X染色體傳給F1代雌蠅，又通過(guò)F1代傳給F2代雄蠅。②位于X染色體上的隱性基因能在半合型情況下于雄蠅中表現(xiàn)出來(lái)。③利用眼色性狀由X染色體上的基因決定，并與X染色體的遺傳相關(guān)聯(lián)的特征來(lái)作為觀察在X染色體上基因突變的標(biāo)記，以野生型雄蠅（紅色圓眼）染毒，與Basc（Muller-5）雌蠅（淡杏色棒眼）交配。有隱性致死時(shí)，在F2代中沒(méi)有紅色圓眼的雄蠅。致突變作用的評(píng)價(jià)方法二、主要的致突變?cè)囼?yàn)致突變作用的評(píng)價(jià)方法二、主要的致突變?cè)囼?yàn)1.基因突變檢測(cè)方法⑷轉(zhuǎn)基因動(dòng)物致突變檢測(cè)轉(zhuǎn)基因動(dòng)物：指基因組中整合有用實(shí)驗(yàn)方法導(dǎo)入的DNA，并能遺傳給后代的一類(lèi)動(dòng)物。常用動(dòng)物：BigBlue小鼠，以大腸桿菌LacI為靶基因；Muta-Mouse小鼠，以大腸桿菌LacZ為靶基因試驗(yàn)方法：染毒后先抽提不同器官或組織的基因組DNA，然后把純化的基因組DNA與噬菌體體外包裝抽提物混合，而將導(dǎo)入的基因載體包裝進(jìn)噬菌體中。用這些噬菌體感染大腸菌，可形成噬菌斑，通過(guò)噬菌斑顏色變化進(jìn)行突變的判斷并獲得突變子。致突變作用的評(píng)價(jià)方法二、主要的致突變?cè)囼?yàn)致突變作用的評(píng)價(jià)方法二、主要的致突變?cè)囼?yàn)2.染色體畸變?cè)囼?yàn)⑴染色體畸變分析試驗(yàn)嚙齒類(lèi)動(dòng)物骨髓細(xì)胞染色體畸變?cè)囼?yàn)嚙齒類(lèi)動(dòng)物睪丸細(xì)胞染色體畸變?cè)囼?yàn)體內(nèi)試驗(yàn)體外試驗(yàn)CHO中國(guó)倉(cāng)鼠卵巢細(xì)胞CHL中國(guó)倉(cāng)鼠肺細(xì)胞V97細(xì)胞外周血淋巴細(xì)胞致突變作用的評(píng)價(jià)方法二、主要的致突變?cè)囼?yàn)嚙齒類(lèi)動(dòng)物骨髓細(xì)胞染致突變作用的評(píng)價(jià)方法二、主要的致突變?cè)囼?yàn)2.染色體畸變?cè)囼?yàn)⑵微核試驗(yàn)（MNT）微核：染色體的斷片或者整條染色體在細(xì)胞分裂過(guò)程中未按正常程序進(jìn)入細(xì)胞核而滯留在細(xì)胞質(zhì)中的染色質(zhì)小題。來(lái)源①斷片或無(wú)著絲粒染色體環(huán)在細(xì)胞分裂后期不能定向移動(dòng)，遺留在細(xì)胞質(zhì)中②有絲分裂毒物的作用使個(gè)別染色體或帶著絲粒的染色體環(huán)和斷片在細(xì)胞分裂后期被留在細(xì)胞質(zhì)中致突變作用的評(píng)價(jià)方法二、主要的致突變?cè)囼?yàn)致突變作用的評(píng)價(jià)方法二、主要的致突變?cè)囼?yàn)2.染色體畸變?cè)囼?yàn)⑵微核試驗(yàn)（MNT）微核試驗(yàn)：通過(guò)觀察受試物能夠產(chǎn)生微核，并檢出DNA斷裂劑和非整倍體誘變劑的試驗(yàn)。用于檢測(cè)的細(xì)胞植物細(xì)胞哺乳類(lèi)動(dòng)物細(xì)胞非哺乳類(lèi)動(dòng)物細(xì)胞紫露草花粉母細(xì)胞蠶豆根尖魚(yú)紅細(xì)胞蟾蜍紅細(xì)胞骨髓細(xì)胞、肝細(xì)胞脾細(xì)胞、淋巴細(xì)胞紅細(xì)胞致突變作用的評(píng)價(jià)方法二、主要的致突變?cè)囼?yàn)植物細(xì)胞紫露草花粉母致突變作用的評(píng)價(jià)方法二、主要的致突變?cè)囼?yàn)2.染色體畸變?cè)囼?yàn)⑵微核試驗(yàn)（MNT）體內(nèi)試驗(yàn)：嚙齒類(lèi)動(dòng)物骨髓多染紅細(xì)胞微核試驗(yàn)成紅細(xì)胞排出主核多染紅細(xì)胞（PCE）保持嗜堿性24h正染紅細(xì)胞（NCE）外周血微核留在胞漿中致突變作用的評(píng)價(jià)方法二、主要的致突變?cè)囼?yàn)成紅細(xì)胞排出主核多染致突變作用的評(píng)價(jià)方法二、主要的致突變?cè)囼?yàn)2.染色體畸變?cè)囼?yàn)⑵微核試驗(yàn)（MNT）嚙齒類(lèi)動(dòng)物骨髓多染紅細(xì)胞微核試驗(yàn)劑量及分組實(shí)驗(yàn)動(dòng)物選擇：每組8只，雌雄各半試驗(yàn)過(guò)程：染毒、處死、取骨髓、涂片、固定、染色后，每鼠計(jì)數(shù)1000個(gè)PCE的微核細(xì)胞率高劑量組：LD50/7的80%低劑量組：LD50/7的40%陰性對(duì)照組陽(yáng)性對(duì)照組（環(huán)磷酰胺）注：LD50/7為在7d使50%動(dòng)物死亡的劑量致突變作用的評(píng)價(jià)方法二、主要的致突變?cè)囼?yàn)高劑量組：LD50/致突變作用的評(píng)價(jià)方法二、主要的致突變?cè)囼?yàn)2.染色體畸變?cè)囼?yàn)⑵微核試驗(yàn)（MNT）體外試驗(yàn)：細(xì)胞質(zhì)分裂阻斷法微核試驗(yàn)新進(jìn)展：利用流式細(xì)胞儀和圖像分析系統(tǒng)進(jìn)行自動(dòng)化微核檢測(cè)PBCCHLCHOV79細(xì)胞染毒培養(yǎng)后期細(xì)胞松弛素B雙核細(xì)胞微核試驗(yàn)致突變作用的評(píng)價(jià)方法二、主要的致突變?cè)囼?yàn)PBC細(xì)胞染毒細(xì)胞松致突變作用的評(píng)價(jià)方法二、主要的致突變?cè)囼?yàn)2.染色體畸變?cè)囼?yàn)⑶顯性致死試驗(yàn)顯性致死突變：指生殖細(xì)胞染色體發(fā)生結(jié)構(gòu)和數(shù)目異常的遺傳學(xué)損傷，此種損傷不影響受精，但可導(dǎo)致受精卵在著床前死亡或胚胎的早期死亡。劑量及分組三個(gè)處理組：最高劑量為L(zhǎng)D50的1/10~1/3陰性對(duì)照組陽(yáng)性對(duì)照組致突變作用的評(píng)價(jià)方法二、主要的致突變?cè)囼?yàn)三個(gè)處理組：最高劑量致突變作用的評(píng)價(jià)方法二、主要的致突變?cè)囼?yàn)2.染色體畸變?cè)囼?yàn)⑶顯性致死試驗(yàn)試驗(yàn)方法（右圖）結(jié)果分析雄鼠一次或連續(xù)5d每天染毒一次染毒后1~2d開(kāi)始交配雄:雌=1:2，同籠5d休息2d雄:雌=1:2，同籠5d交配如此循環(huán)小鼠6~8w大鼠8~10w將雌鼠于同籠第3d起的第13~14d處死，檢查宮內(nèi)的著床數(shù)、早死胎、晚死胎、活胎數(shù)1~3w對(duì)精子、精細(xì)胞有毒性作用4~5w對(duì)精母細(xì)胞有毒性作用6w~對(duì)精源細(xì)胞有毒性作用致突變作用的評(píng)價(jià)方法二、主要的致突變?cè)囼?yàn)雄鼠一次或連續(xù)5d每致突變作用的評(píng)價(jià)方法二、主要的致突變?cè)囼?yàn)3.其他DNA損傷的檢測(cè)⑴DNA鏈斷裂①單細(xì)胞凝膠電泳（SCGE）原理細(xì)胞+受試物細(xì)胞裂解液細(xì)胞膜破壞胞質(zhì)內(nèi)蛋白質(zhì)等成分進(jìn)入凝膠→裂解液核內(nèi)DNA附著在剩余的核骨架上→留在原位解旋DNA電泳DNA未損傷→DNA停留在核基質(zhì)中→圓形熒光團(tuán)無(wú)拖尾DNA損傷→DNA斷片多→小分子量DNA進(jìn)入凝膠向陽(yáng)極泳動(dòng)→亮的頭部和尾部→形似彗星致突變作用的評(píng)價(jià)方法二、主要的致突變?cè)囼?yàn)細(xì)胞+細(xì)胞裂解液細(xì)胞致突變作用的評(píng)價(jià)方法二、主要的致突變?cè)囼?yàn)3.其他DNA損傷的檢測(cè)⑴DNA鏈斷裂①單細(xì)胞凝膠電泳（SCGE）結(jié)果分析

損傷越嚴(yán)重，斷片越多、越小，遷移DNA量越大，遷移距離越長(zhǎng)，尾長(zhǎng)和尾部熒光強(qiáng)度增加。試驗(yàn)優(yōu)點(diǎn)

檢測(cè)低水平DNA損傷的敏感性高，對(duì)樣品的細(xì)胞數(shù)要求少，操作簡(jiǎn)便、費(fèi)用低。致突變作用的評(píng)價(jià)方法二、主要的致突變?cè)囼?yàn)致突變作用的評(píng)價(jià)方法二、主要的致突變?cè)囼?yàn)3.其他DNA損傷的檢測(cè)⑵DNA加合物的檢測(cè)——32P后標(biāo)記法原理①含有加合物的DNA鏈在內(nèi)外切酶的作用下降解為3’單磷酸核苷；②通過(guò)消除正常的核苷酸來(lái)富集加合的核苷酸；③在特異的T4多核苷酸激酶的作用下，將具有高度特異活性的32P-ATP的磷酸根基團(tuán)轉(zhuǎn)移到加合物的核苷酸的5’-羥基末端，使其形成3’-5’二磷酸核苷；④將標(biāo)記的加合物通過(guò)薄層層析技術(shù)分離；⑤放射自顯影定量分析。致突變作用的評(píng)價(jià)方法二、主要的致突變?cè)囼?yàn)致突變作用的評(píng)價(jià)方法二、主要的致突變?cè)囼?yàn)3.其他DNA損傷的檢測(cè)⑵DNA加合物的檢測(cè)——32P后標(biāo)記法優(yōu)點(diǎn)靈敏度高，達(dá)到1個(gè)加合物/1010個(gè)核苷酸的水平；DNA需樣量小1~10μg不需事先制備加合物標(biāo)樣，用空白對(duì)照可定量計(jì)算加合物含量可用于單一加合物檢測(cè)、復(fù)雜混合物測(cè)定，以及未知內(nèi)源性親電性物質(zhì)形成的加合物致突變作用的評(píng)價(jià)方法二、主要的致突變?cè)囼?yàn)致突變作用的評(píng)價(jià)方法二、主要的致突變?cè)囼?yàn)2.其他DNA損傷的檢測(cè)⑵DNA加合物的檢測(cè)——32P后標(biāo)記法缺點(diǎn)特異性差；步驟多；穩(wěn)定性不易掌握；不同實(shí)驗(yàn)室所測(cè)定的結(jié)果差別很大；不能明確地識(shí)別單個(gè)加合物類(lèi)型，以及確定加合物的化學(xué)結(jié)構(gòu)。致突變作用的評(píng)價(jià)方法二、主要的致突變?cè)囼?yàn)致突變作用的評(píng)價(jià)方法二、主要的致突變?cè)囼?yàn)

3.其他DNA損傷的檢測(cè)

⑶DNA加合物的檢測(cè)——免疫學(xué)方法原理：抗原抗體反應(yīng)，有多克隆抗體檢測(cè)和單克隆抗體檢測(cè)方法：競(jìng)爭(zhēng)放射免疫法（RIA）、酶聯(lián)免疫吸附法（ELISA）、放射免疫吸附法（RIST）、超敏酶促放射免疫法（USERI-A）優(yōu)點(diǎn)靈敏度高，1個(gè)加合物/107~8核苷酸；不需酶解DNA鏈；用免疫沉淀技術(shù)可以將有加合物的鏈與無(wú)加合物的鏈分離，簡(jiǎn)便易行、經(jīng)濟(jì)。致突變作用的評(píng)價(jià)方法二、主要的致突變?cè)囼?yàn)致突變作用的評(píng)價(jià)方法二、主要的致突變?cè)囼?yàn)

3.其他DNA損傷的檢測(cè)⑶DNA加合物的檢測(cè)——免疫學(xué)方法缺點(diǎn)制備抗體的過(guò)程復(fù)雜；特異抗體可能與結(jié)構(gòu)相似的化合物發(fā)生交叉反應(yīng)；DNA的需求量大，25~60μg；對(duì)非抗原性加合物和未知抗原加合物的檢測(cè)無(wú)能為力。

⑷DNA加合物的檢測(cè)——其他方法熒光測(cè)定法；色譜-質(zhì)譜法；核磁共振法；堿洗脫法；序列測(cè)定法等致突變作用的評(píng)價(jià)方法二、主要的致突變?cè)囼?yàn)熒光測(cè)定法；色譜-質(zhì)致突變作用的評(píng)價(jià)方法二、主要的致突變?cè)囼?yàn)

3.其他DNA損傷的檢測(cè)

⑸DNA修復(fù)的檢測(cè)——非程序性DNA合成試驗(yàn)（UDS）程序性DNA合成

正常細(xì)胞在有絲分裂過(guò)程中，僅在S期進(jìn)行DNA復(fù)制合成，成為程序性DNA合成。非程序性DNA合成

DNA受到化學(xué)損傷后，細(xì)胞啟動(dòng)損傷的修復(fù)過(guò)程，這一過(guò)程將合成一條較短的DNA新鏈，此修復(fù)稱為“程序外DNA合成”。致突變作用的評(píng)價(jià)方法二、主要的致突變?cè)囼?yàn)致突變作用的評(píng)價(jià)方法二、主要的致突變?cè)囼?yàn)

3.其他DNA損傷的檢測(cè)

⑸DNA修復(fù)的檢測(cè)——非程序性DNA合成試驗(yàn)（UDS）試驗(yàn)原理缺點(diǎn)

不摻入新核苷酸的DNA損傷

修復(fù)類(lèi)型無(wú)法測(cè)出將細(xì)胞阻斷于G1期阻斷DNA半保留復(fù)制細(xì)胞受試物3H-胸腺嘧啶核苷如果DNA損傷則3H-胸腺嘧啶核苷摻入DNA鏈放射自顯影法或液閃計(jì)數(shù)法測(cè)定DNA的放射活性致突變作用的評(píng)價(jià)方法二、主要的致突變?cè)囼?yàn)將細(xì)胞阻斷于G1期細(xì)致突變作用的評(píng)價(jià)方法二、主要的致突變?cè)囼?yàn)

3.其他DNA損傷的檢測(cè)

⑹姐妹染色單體交換試驗(yàn)致突變作用的評(píng)價(jià)方法二、主要的致突變?cè)囼?yàn)第四節(jié)化學(xué)致癌作用的評(píng)價(jià)方法一、短期試驗(yàn)1.致突變?cè)囼?yàn)程序篩檢陽(yáng)性篩檢陰性具有遺傳毒性的致癌物具有遺傳毒性的非致癌物非遺傳毒性的非致癌物非遺傳毒性的致癌物第四節(jié)化學(xué)致癌作用的評(píng)價(jià)方法一、短期試驗(yàn)篩檢陽(yáng)性具有遺傳第四節(jié)化學(xué)致癌作用的評(píng)價(jià)方法短期試驗(yàn)惡性轉(zhuǎn)化試驗(yàn)對(duì)培養(yǎng)細(xì)胞誘發(fā)與腫瘤形成有關(guān)的表型改變，包括細(xì)胞形態(tài)、細(xì)胞生長(zhǎng)能力、生化表型等變化，以及移植于動(dòng)物體內(nèi)能形成腫瘤的能力使用的細(xì)胞原代細(xì)胞：敘利亞倉(cāng)鼠胚體細(xì)胞（SHE細(xì)胞）

人類(lèi)成纖維細(xì)胞

小鼠皮膚或大鼠支氣管上皮細(xì)胞等細(xì)胞系：BALE/C-3T3、C3H10T1/2、BHK-21等細(xì)胞系病毒感染細(xì)胞：RLV/RE細(xì)胞——?jiǎng)谏釥柊籽〔《靖腥?/p>

的Fisher大鼠胚體細(xì)胞SA7/SHE細(xì)胞——猿猴腺病毒感染的SHE細(xì)胞第四節(jié)化學(xué)致癌作用的評(píng)價(jià)方法短期試驗(yàn)原代細(xì)胞：敘利亞倉(cāng)鼠第四節(jié)化學(xué)致癌作用的評(píng)價(jià)方法哺乳動(dòng)物短期致癌試驗(yàn)優(yōu)點(diǎn)試驗(yàn)周期短需要觀察的靶器官指標(biāo)少節(jié)省人力和物力反映受試物與動(dòng)物直接接觸的情況能驗(yàn)證受試物的致癌性、助癌性和促癌作用等機(jī)制試驗(yàn)類(lèi)型小鼠皮膚腫瘤誘發(fā)試驗(yàn)小鼠肺腫瘤誘發(fā)試驗(yàn)大鼠肝轉(zhuǎn)化灶誘發(fā)試驗(yàn)雌性大鼠乳腺癌誘發(fā)試驗(yàn)第四節(jié)化學(xué)致癌作用的評(píng)價(jià)方法哺乳動(dòng)物短期致癌試驗(yàn)第四節(jié)化學(xué)致癌作用的評(píng)價(jià)方法哺乳動(dòng)物短期致癌試驗(yàn)小鼠皮膚腫瘤誘發(fā)試驗(yàn)試驗(yàn)動(dòng)物：SENCAR小鼠試驗(yàn)方法：局部連續(xù)涂抹受試物試驗(yàn)周期：一般為9個(gè)月，如果在啟動(dòng)后使用佛波酯則縮短至20周評(píng)價(jià)指標(biāo)：皮膚乳頭瘤和其他腫瘤的發(fā)生率特點(diǎn)：可檢測(cè)受試物的啟動(dòng)活性或促癌活性，典型啟動(dòng)劑為多環(huán)芳烴，促長(zhǎng)劑為佛波醇酯第四節(jié)化學(xué)致癌作用的評(píng)價(jià)方法哺乳動(dòng)物短期致癌試驗(yàn)第四節(jié)化學(xué)致癌作用的評(píng)價(jià)方法哺乳動(dòng)物短期致癌試驗(yàn)小鼠肺腫瘤誘發(fā)試驗(yàn)試驗(yàn)動(dòng)物：SWR小鼠或A系小鼠試驗(yàn)方法：一次或多次給予受試物后，或一次給予受試物1~2周后持續(xù)多次給予促癌劑染毒途徑：腹腔注射、灌胃或吸入試驗(yàn)周期：16~30周評(píng)價(jià)指標(biāo)：肺腫瘤發(fā)生率特點(diǎn)：可檢測(cè)受試物的啟動(dòng)活性或促癌活性，典型啟動(dòng)劑為烏拉坦（抗腫瘤藥物），促長(zhǎng)劑為二丁基羥基甲苯（BHT）第四節(jié)化學(xué)致癌作用的評(píng)價(jià)方法哺乳動(dòng)物短期致癌試驗(yàn)第四節(jié)化學(xué)致癌作用的評(píng)價(jià)方法哺乳動(dòng)物短期致癌試驗(yàn)大鼠肝臟轉(zhuǎn)變?cè)钫T發(fā)試驗(yàn)試驗(yàn)動(dòng)物：敏感大鼠試驗(yàn)方法：按染毒程序給予受試物試驗(yàn)周期：8~16周評(píng)價(jià)指標(biāo)：肝轉(zhuǎn)化灶和腫瘤結(jié)節(jié)生成轉(zhuǎn)化灶特點(diǎn)：癌前病變，變化用免疫組化或酶組織化學(xué)方法鑒定特點(diǎn)：可檢測(cè)受試物的啟動(dòng)活性或促癌活性，典型啟動(dòng)劑為二乙基亞硝胺（DEN），促長(zhǎng)劑為苯巴比妥（PB）第四節(jié)化學(xué)致癌作用的評(píng)價(jià)方法哺乳動(dòng)物短期致癌試驗(yàn)第四節(jié)化學(xué)致癌作用的評(píng)價(jià)方法哺乳動(dòng)物短期致癌試驗(yàn)雌性大鼠乳腺癌誘發(fā)試驗(yàn)試