薄層色譜法鑒定丹皮酚

來自中國藥典2005一部牡丹皮拼音名：Mudanpi英文名：CORTEXMOUTAN書頁號：2005年版一部-119本品為毛茛科植物牡丹PaeoniasuffruticosaAndr.的干燥根皮。 秋季采挖根部，除去細(xì)根和泥沙，剝?nèi)「ぃ瑫窀?。【性狀?本品呈筒狀或半筒狀，有縱剖開的裂縫，略向內(nèi)卷曲或張開，長5?20cm，直徑0.5?1.2cm，厚0.1?0.4cm。外表面灰褐色或黃褐色，有多數(shù)橫長皮孔樣突起及細(xì)根痕，栓皮脫落處粉紅色；內(nèi)表面淡灰黃色或淺棕色，有明顯的細(xì)縱紋，常見發(fā)亮的結(jié)晶。質(zhì)硬而脆，易折斷，斷面較平坦，淡粉紅色，粉性。氣芳香，味微苦而澀?！捐b別】（1）本品粉末淡紅棕色。淀粉粒甚多，單粒類圓形或多角形，直徑3?16pm，臍點點狀、裂縫狀或飛鳥狀；復(fù)粒由2?6分粒組成。草酸鈣簇晶直徑9?45|Jm，有時含晶細(xì)胞連接，簇晶排列成行，或一個細(xì)胞含數(shù)個簇晶。木栓細(xì)胞長方形，壁稍厚，淺紅色。（2）取本品粉末1g，加乙醚10ml，密塞，振搖10分鐘，濾過，濾液揮干，殘渣加丙銅2ml使溶解，作為供試品溶液。另取丹皮酚對照品，加丙酮制成每1ml含5mg的溶液，作為對照品溶液。照薄層色譜法（附錄WB）試驗，吸取上述兩種溶液各10|Jl，分別點于同一硅膠G薄層板上，以環(huán)己烷-乙酸乙酯（3:1）為展開劑，展開，取出，晾干，噴以鹽酸酸性5%三氯化鐵乙醇溶液，加熱至斑點顯色清晰。供試品色譜中，在與對照品色譜相應(yīng)的位置上，顯相同的藍(lán)褐色斑點。【檢查】水分照水分測定法（附錄IXH第二法）測定，不得過13.0%?？偦曳植坏眠^5.0%（附錄XK）。酸不溶性灰分不得過1.0%（附錄IXK）?！窘鑫铩?照醇溶性浸出物測定法項下的熱浸法（附錄XA）測定，用乙醇作溶劑，不得少于15.0%?！竞繙y定】照高效液相色譜法（附錄VID）測定。色譜條件與系統(tǒng)適用性試驗 以十八烷基硅烷鍵合硅膠為填充劑；以甲醇-水（45：55）為流動相；檢測波長為274nm。理論板數(shù)按丹皮酚峰計算應(yīng)不低于5000。對照品溶液的制備 精密稱取丹皮酚對照品適量，加甲醇制成每1ml含20pg的溶液，即得。供試品溶液的制備取本品粗粉約0.5g，精密稱定，置具塞錐形瓶中，精密加入甲醇50ml，密塞，搖勻，稱定重量，超聲處理（功率300W，頻率50kHz）30分鐘，放冷，再稱定重量，用甲醇補足減失的重量，搖勻，濾過。精密量取續(xù)濾液1ml，量10ml量瓶中，加甲醇稀釋至刻度，搖勻，即得。測定法 分別精密吸取對照品溶液與供試品溶液各10M1,注入液相色譜儀，測定，即得。本品按干燥品計算，含丹皮酚(C9H10O3)不得少于1.2%。【炮制】迅速洗凈，潤后切薄片，曬干。【性味與歸經(jīng)】苦、辛，微寒。歸心、肝、腎經(jīng)?！竟δ芘c主治】清熱涼血，活血化瘀。用于溫毒發(fā)斑，吐血衄血，夜熱早涼，無汗骨蒸，經(jīng)閉痛經(jīng)，癰腫瘡毒，跌撲傷痛?！居梅ㄅc用量】6?12g。【貯藏】置陰涼干燥處。附錄VI B.薄層色譜法附錄V B.薄層色譜法薄層色譜法系將供試品溶液點于薄層板上，在展開容器內(nèi)用展開劑展開，使供試品所含成分分離，所得色譜圖與適宜的對照物按同法所得的色譜圖對比，并可用薄層掃描儀進(jìn)行掃描，用于鑒別、檢查或含量測定。儀器與材料薄層板市售薄層板 市售薄層板分普通薄層板和高效薄層板，如硅膠薄層板、硅膠GF<[254]>薄層板、聚酰胺薄膜等。自制薄層板 在保證色譜質(zhì)量的前提下，如需對薄層板進(jìn)行特別處理和化學(xué)改性，以適應(yīng)供試品分離的要求時，也可用實驗室自制的薄層板。最常用的固定相有硅膠G、硅膠GF254、硅膠H、硅膠HF254、微晶纖維素等，其顆粒大小一般要求直徑為10?40|Jm，加水或用梭甲基纖維素鈉水溶液(0.2%?0.5%)適量調(diào)成糊狀，均勻涂布于玻板上。使用涂布應(yīng)能使固定相在玻板上涂成一層符合厚度要求的均勻薄層。玻板應(yīng)光滑、平整，洗凈后不附水珠。點樣器一般采用微升毛細(xì)管或手動、半自動、全自動點樣器材。展開容器上行展開一般可用適合薄層板大小的專用平底或有雙槽展開缸，展開時須能密閉，水平展開用專用的水平展開缸。顯色裝置噴霧顯色應(yīng)使用玻璃噴霧瓶或?qū)Ｓ脟婌F器，要求用壓縮氣體使顯色劑呈均勻細(xì)霧狀噴出，浸漬顯色可用專用玻璃器械或用適宜的展開缸代用；蒸氣熏蒸顯色可用雙槽展開缸或適宜大小的干燥器代替。檢視裝置為裝有可見光、254nm及365nm紫外光光源及相應(yīng)的濾光片的暗箱，可附加攝像設(shè)備供拍攝圖像用，暗箱內(nèi)光源應(yīng)有足夠的光照度。薄層色譜掃描儀系指用一定波長的光對薄層板上有吸收的斑點，或經(jīng)激發(fā)后能發(fā)射出熒光的斑點，進(jìn)行掃描，將掃描得到的譜圖和積分?jǐn)?shù)據(jù)用于物質(zhì)定性或定量的分析儀器。操作方法(1)薄層板制備市售薄層板 臨用前一般應(yīng)在110°C活化30分鐘。聚酰胺薄膜不需活化。鋁基片薄層板可根據(jù)需要剪裁，但須注意剪裁后的薄層板底邊的硅膠層不得有破損。如在存放期間被空氣中雜質(zhì)污染，使用前可用三氯甲烷、甲醇或二者的混合溶劑在展開缸中上行展開預(yù)洗，110C活化，置干燥器中備用。自制薄層板除另有規(guī)定外，將1份固定相和3份水(或加有黏合劑的水溶液)在研缽中按同一方向研磨混合，去除表面的氣泡后，倒入涂布器中，在玻板上平穩(wěn)地移動涂布器進(jìn)行涂布(厚度為0.2?0.3mm)，取下涂好薄層的玻板，置水平臺上于室溫下晾干后，在110C烘30分鐘，即置有干燥劑的干燥箱中備用。使用前檢查其均勻度，在反射光及透視光下檢視，表面應(yīng)均勻、平整、光滑，無麻點、無氣泡、無破損及污染。點樣除另有規(guī)定外，在潔凈干燥的環(huán)境，用專用毛細(xì)管或配合相應(yīng)的半自動、自動點樣器械點樣于薄層板上，一般為圓點狀或窄細(xì)的條帶狀，點樣基線距底邊10?15mm，高效板一般基線離底邊8?10mm。圓點狀直徑一般不大于3mm，高效板一般大于3mm；接觸點樣時注意勿損傷薄層表面。條帶狀寬度一般為5~10mm。高效板條帶寬度一般為4~8mm，可用專用半自動或自動點樣器械噴霧法點樣。點間距離可視斑點擴散情況以相鄰斑點互不干擾為宜，一般不少于8mm，高效板供試品間隔不少于5mm。展開將點好樣品的薄層板放入展開缸的展開劑中，浸入展開劑的深度為距原點5mm為宜，密閉。除另有規(guī)定外，一般上行展開8?15cm，高效薄層板上展開5?8cm。溶劑前沿達(dá)到規(guī)定的展距，取出薄層板，晾干，待檢測。展開前如需要溶劑蒸氣預(yù)平衡，可在展開缸中加入適量的展開劑，密閉，一般保持15~30分鐘。溶劑蒸氣預(yù)平衡后，應(yīng)迅速放入載有供試品的薄層板，立即密閉，展開。如需使展開缸達(dá)到溶劑蒸氣飽和的狀態(tài)，則須在展開缸的內(nèi)側(cè)放置與展開缸內(nèi)徑同樣大小的濾紙，密閉一定時間，使達(dá)到飽和再如法展開。必要時，可進(jìn)行二次展開或雙向展開。顯色與檢視供試品含有可見光下有顏色的成分可直接在日光下檢視，也可用噴霧法或浸漬法以適宜的顯色劑顯色，或加熱顯色，在日光下檢視。有熒光的物質(zhì)或遇某些試劑可激發(fā)熒光的物質(zhì)可在365nm紫外光燈下觀察熒光色譜。對于可見光下無色，但在紫外光下有吸收的成分可用帶有熒光劑的硅膠板(如硅膠GF254板)，在254nm紫外光燈下觀察熒光板面上的熒光猝滅物質(zhì)形成的色譜。記錄薄層色譜圖像一般可采用攝像設(shè)備拍攝，以光學(xué)照片或電子圖像的形式保存。也可用薄層掃描儀掃描記錄相應(yīng)的色譜圖。3.系統(tǒng)適用性試驗按各品種項下要求對實驗條件進(jìn)行系統(tǒng)適用性試驗，即用供試品和對照品對實驗條件進(jìn)行試驗和調(diào)整，應(yīng)達(dá)到規(guī)定的檢測靈敏度、分離度和重復(fù)性要求。檢測靈敏度用于限量檢查時，采用供試品溶液和對照品溶液與稀釋若干倍的對照品溶液在規(guī)定的色譜條件下，于同一薄層板上點樣、展開、檢視，后者應(yīng)顯清晰的斑點。分離度用于鑒別時，對照品溶液與供試品溶液中相應(yīng)的主斑點，應(yīng)顯示兩個清晰分離的斑點。用于限量檢查和含量測定時，要求定量峰與相鄰峰之間有較好的分離度，分離(R)的計算公式為：R=2(d2-d1)/(W1+W2)式中 d2為相鄰兩峰中后一峰與原點的距離；dl為相鄰兩峰中前一峰與原點的距離；W1及W2為相鄰兩峰各自的峰寬。除另有規(guī)定外，分離度應(yīng)大于1.0。（3）重復(fù)性同一供試品溶液在同一薄層板上平行點樣的待測成分的峰面積測量值的相對標(biāo)準(zhǔn)偏差應(yīng)不大于3.0%；需顯色后測定的相對標(biāo)準(zhǔn)偏差應(yīng)不大于5.0%。4.測定法（1）鑒別取適宜濃度的對照溶液與供試品溶液，在同一薄層板上點樣、展開與檢視，供試品溶液所顯主斑點的顏色（或熒光）和位置應(yīng)與對照溶液的斑點一致。（2） 限度檢查采用定量配制的對照品對照或?qū)φ掌废♂寣φ?。供試品溶液色譜中待檢查的斑點應(yīng)與相應(yīng)的對照品溶液或系列對照品溶液的相應(yīng)斑點比較，顏色（或熒光）不得更深；或照薄層色譜掃描法操作，峰面積不得大于對照品的峰面積值。必要時應(yīng)規(guī)定檢查的斑點數(shù)和限量值。（3）含量測定照薄層色譜掃描法，測定供試品中相應(yīng)成分的含量。3.薄層色譜掃描法系指用一定波長的光照射在薄層板上，對薄層色譜中可吸收紫外光或可見光的斑點，或經(jīng)激發(fā)后能發(fā)射出熒光的斑點進(jìn)行掃描，將掃描得到的圖譜及積分?jǐn)?shù)據(jù)用于藥品的鑒別、檢查或含量測定。測定時可根據(jù)不同薄層掃描儀的結(jié)構(gòu)特點，按照規(guī)定方式掃描測定，一般選擇反射方式，采用吸收法或熒光法。除另有規(guī)定外，含量測定應(yīng)使用市售薄層板。掃描方法可采用單波長掃描或雙波長掃描。如采用雙波長掃描，應(yīng)選用待測斑點無吸收或最小吸收的波長為參比波長，供試品色譜中待測斑點的比移值（Rf值）和光譜掃描得到的吸收光譜圖或測得的光譜最大吸收與最小吸收應(yīng)與對照