制備液相色譜技術(shù)(LC-MS)課件

高效制備液相色譜技術(shù)高效制備液相色譜技術(shù)1高效制備液相色譜的原理：色譜分離原理無論是分析型色譜還是制備型色譜都是相同的，那就是色譜理論。

但是在理論的遵循上，制備型有時需打折扣。這是由于兩種類型的色譜最終的目的是不同的。分析型色譜：分離度高，靈敏度高，以含量測定為目的。制備型色譜：要求純度、產(chǎn)量和收益。高效制備液相色譜的原理：色譜分離原理無論是分2

經(jīng)典的制備色譜方法與高效制備液相色譜的異同及優(yōu)缺點：相同：目的相同；某些方法原理也相同。不同：自動化程度不同，效率不同，分離復雜化合物的能力不同。經(jīng)典制備色譜方法：柱色譜、薄層色譜……經(jīng)典的制備色譜方法與高效制備液相色譜的異同及3制備液相色譜技術(shù)(LC-MS)課件4制備液相色譜技術(shù)(LC-MS)課件5制備液相色譜技術(shù)(LC-MS)課件6高效制備液相色譜優(yōu)點：效率高，收率相對較高，特別適合復雜樣品、性質(zhì)接近化合物的純化。純化效果理想。缺點：設(shè)備復雜昂貴，投資大，運行費用較高。經(jīng)典制備色譜方法優(yōu)點：設(shè)備簡單，投資小，見效快。能滿足一般樣品的純化要求。缺點：效率低下，收率低，對于過于復雜的化合物，純化效果不理想。高效制備液相色譜經(jīng)典制備色譜方法7制備液相色譜又稱純化系統(tǒng)，是目前高效率制備純化合物最有力的方法，廣泛應用于：1.天然產(chǎn)物的分離與純化2.合成藥物的純化3.合成反應中間產(chǎn)物或副產(chǎn)物的制備4.手性藥物的分離與純化5.藥物雜質(zhì)的分離制備......制備液相色譜又稱純化系統(tǒng)，是目前高效率制備純8制備液相色譜技術(shù)(LC-MS)課件9重復性重復性10選擇性要求選擇性要求11色譜柱吸附等溫線正常載荷(loading)：色譜柱吸附等溫線正常載荷(loading)：12色譜柱吸附等溫線超載(overloading)：色譜柱吸附等溫線超載(overloading)：13純度（purity)、產(chǎn)量（throughput）和收益（yield）（PTY）三者的關(guān)系純度（purity)、產(chǎn)量（throughput）14濃度過載和體積過載濃度過載和體積過載15濃度過載和體積過載色譜示意圖濃度過載和體積過載色譜示意圖16什么時候使用濃度過載?什么時候使用體積過載?一般情況下，由于需要有較大的throughput，所以濃度過載使用較多，但當樣品濃度過稀，又沒有合適的方法濃縮時或流動相溶解樣品的能力較弱時，這時就應當使用體積過載。什么時候使用濃度過載?一般情況下，由于需要有較17由分析型色譜如何擴展到制備型色譜？擴展計算由分析型色譜如何擴展到制備型色譜？擴展計算18擴展計算擴展計算19擴展計算舉例r1=1.5mm,r2=10.6mm,V1=0.6mL/min

V2=?計算結(jié)果：30mL/min擴展計算舉例r1=1.5mm,r2=10.6mm,V120=30ml/min擴展計算舉例?計算結(jié)果25mg=30ml/min擴展計算舉例?計算結(jié)果25mg210.35mL/min流速下的色譜圖（分析型）0.35mL/min流速下的色譜圖（分析型）22經(jīng)擴展計算，采用不同的柱徑、進樣量和流速樣品的色譜圖經(jīng)擴展計算，采用不同的柱徑、進樣量和流速樣品的色譜圖23上述五種色譜狀態(tài)的參數(shù)：上述五種色譜狀態(tài)的參數(shù)：24在分析型色譜柱上，不同進樣量的色譜圖在分析型色譜柱上，不同進樣量的色譜圖25在制備型色譜柱上的色譜圖在制備型色譜柱上的色譜圖26制備液相餾分收集的三種方式1.基于時間（Time-based）2.基于峰（peak-based）3.基于質(zhì)量（Mass-based）制備液相餾分收集的三種方式1.基于時間（Time-base27基于時間（Time-based）根據(jù)餾分的保留時間及其色譜峰寬，以時間作為餾分收集器動作的指令參數(shù)。特點：參數(shù)設(shè)置方便，樣品收益高、損失少。色譜保留時間的不穩(wěn)定會影響到餾分的純度和收益?；跁r間（Time-based）根據(jù)餾分的保28Time-based用峰的時間分割，按峰收集餾分色譜峰重疊嚴重，重疊面積很大，收集到的兩個餾分將明顯不純。－－－這時應考慮使用Time-based。Time-based用峰的時間分割，按峰收集餾分29Time-basedTime-based30基于峰（Peak-based）根據(jù)色譜峰的正負斜率，觸發(fā)餾分收集器，以色譜峰正負斜率作為餾分收集器動作的指令參數(shù)。特點：餾分純度高。餾分保留時間的不穩(wěn)定不會影響到餾分的純度。參數(shù)設(shè)置不方便（斜率參數(shù)需計算）；受色譜峰峰形改變的影響較大。樣品收益低。基于峰（Peak-based）根據(jù)色譜峰的正31利用正、負斜率按峰進行餾分收集。Peak-based

正、負斜率和閾值可預先設(shè)置。當色譜信號都超出預先設(shè)置的正斜率和閾值兩個參數(shù)時，將觸發(fā)峰的收集信號；當色譜信號低于閾值或低于預先設(shè)置的負斜率時，將觸發(fā)停止收集信號。設(shè)置閾值的目的是為了消除噪聲的影響。利用正、負斜率按峰進行餾分收集。Peak-based32制備液相色譜技術(shù)(LC-MS)課件33Peak-based實例（只收集后面這一組分）Peak-based實例（只收集后面這一組分）34基于質(zhì)量（Mass-based）根據(jù)餾分的質(zhì)量作為指令參數(shù)，觸發(fā)餾分收集器。特點：餾分純度高、且收益高；餾分保留時間以及色譜峰峰形改變都不會影響到餾分的純度；參數(shù)設(shè)置方便；需配備MS檢測器，設(shè)備費用投入較大?；谫|(zhì)量（Mass-based）根據(jù)餾分的質(zhì)35Mass-based當使用按質(zhì)量進行餾分收集時，只有當MSD檢測到色譜峰含有目標質(zhì)量數(shù)，且該目標質(zhì)量數(shù)的強度超出特定的閾值時，餾分收集才被觸發(fā)。這就確保了在每次進樣中只收集含目標化合物的餾分。大部分情況下只有一個餾分。不足之處是注入的其他樣品組分不能回收。Mass-based當使用按質(zhì)量進行餾分收集36按質(zhì)量數(shù)進行餾分收集的結(jié)果按質(zhì)量數(shù)進行餾分收集的結(jié)果37三種餾分收集方式的比較三種餾分收集方式的比較38它們與純度、產(chǎn)量和收益（PTY）的關(guān)系怎樣？結(jié)合實際需求合理選擇。三種餾分收集方式如何選擇？它們與純度、產(chǎn)量和收益（PTY）的關(guān)系怎樣？結(jié)合實際需求合理39制備液相色譜技術(shù)(LC-MS)課件40制備液相色譜技術(shù)(LC-MS)課件41制備液相色譜技術(shù)(LC-MS)課件42制備液相色譜技術(shù)(LC-MS)課件43制備液相色譜技術(shù)(LC-MS)課件44高效制備液相色譜流路示意圖高效制備液相色譜流路示意圖451、延遲體積校正

2、擴散影響兩個問題：1、延遲體積校正

2、擴散影響兩個問題：46什么是延遲體積？理想情況下，當檢測器檢測到組分信號時，同一時刻，組分也被餾分收集器收集到。實際情況下，這是做不到的，因為存在一個延遲體積。延遲體積：檢測池到餾分收集器之間管路的體積。什么是延遲體積？理想情況下，當檢測器檢測到47高效制備液相色譜流路示意圖高效制備液相色譜流路示意圖48延遲體積校正后運行時間：是指分析物組分從檢測池到餾分收集器所用的時間。為了準確地觸發(fā)餾分收集器的啟動和停止，必須測定后運行時間。后運行時間可以轉(zhuǎn)換成與流速無關(guān)的延遲體積。后運行時間測定方法之一：通過在流路內(nèi)注射一種染料，當餾分收集器針尖出現(xiàn)該染料時記錄時間。后運行時間＝t餾分收集器-

t檢測器延遲體積校正后運行時間：是指分析物組分從檢測49后運行時間測定方法之二：在餾分收集器內(nèi)裝入一個檢測器，該檢測器稱為延遲傳感器。將延遲校正物注入流路，兩個檢測器都記錄信號。兩個檢測器之間的時間差就是后運行時間。根據(jù)校正時所用的流速，系統(tǒng)將自動計算出準確的延遲體積，并保存，同時也能計算出每個流速下的后運行時間，當流速改變時，不需要再校正后運行時間。后運行時間測定方法之二：50擴散擴散使峰（譜帶）變寬，嚴重削弱了色譜的分辨（分離）能力。譜帶變寬與流速成反比，與管線長度和管線內(nèi)徑成正比。擴散擴散使峰（譜帶）變寬，嚴重削弱了色譜的51三種不同管徑的擴散影響所以，制備液相色譜中更應注意縮短管路的長度，減少不必要的死體積。三種不同管徑的擴散影響所以，制備液相色譜中更52各種類型的制備液相展示各種類型的制備液相展示53制備液相色譜技術(shù)(LC-MS)課件54制備液相色譜技術(shù)(LC-MS)課件55制備液相色譜技術(shù)(LC-MS)課件56制備液相色譜技術(shù)(LC-MS)課件57制備液相色譜技術(shù)(