柴胡疏肝散、四君子湯、柴疏四君湯對肝郁脾虛證模型大鼠表觀效應群的影響

柴胡疏肝散、四君子湯、柴疏四君湯對肝郁脾虛證模型大鼠表觀效應群的影響

“方證相關性”不僅是中醫(yī)辨證論治原則的核心，也是方劑科學的邏輯基礎。本研究以肝郁脾虛證及其相關方藥為切入,在復制肝郁脾虛證大鼠模型的基礎上,從“同證異方”的角度,比較觀察了具有疏肝、健脾、疏肝健脾不同功用的柴胡疏肝散、四君子湯、柴疏四君湯3方對該模型大鼠外觀表征的影響。1材料表面1.1fp/vaf模型健康SD大鼠,雌雄各半,體重(240±10)g,級別SPF/VAF,動物許可證號為SCXK(京)2007-0001,由北京維通利華實驗動物中心提供。所有動物提前1周購入,實驗室常規(guī)飼養(yǎng)。1.2香加味劑g人參、白術、茯苓、柴胡、陳皮、川芎、香附、枳殼、芍藥、炙甘草由北京同仁堂藥業(yè)股份有限公司提供,經(jīng)鑒定均為正品。柴胡疏肝散、四君子湯按全國統(tǒng)編五版教材《方劑學》中的組成和用量,其中柴胡疏肝散組成為柴胡6g,陳皮6g,川芎4.5g,香附4.5g,枳殼4.5g,芍藥4.5g,炙甘草1.5g;四君子湯組為人參10g,白術9g,茯苓9g,炙甘草6g;柴疏四君湯為柴胡疏肝散和四君子湯的合方:柴胡4g,陳皮4g,川芎3g,香附3g,枳殼3g,芍藥3g,人參4g,白術3g,茯苓3g,炙甘草2g。3方按水提醇沉法分別制成顆粒(0.52g柴疏四君湯顆粒相當于1g生藥材,0.55g四君子湯顆粒相當于1g生藥材,0.46g柴胡疏肝散顆粒相當于1g生藥材),濃度配制為:柴胡疏肝散28.2%、四君子湯33.41%和柴疏四君湯29.12%。1.3產(chǎn)品有限公司筆式電子體溫計,北京中西化玻儀器有限公司;電子天平,北京北方首衡電子產(chǎn)品有限公司;束縛器為有機玻璃制成的圓筒狀結構,主筒長25cm,筒口外經(jīng)7cm,內(nèi)徑5cm,前端置有一直徑小于主筒的、可以前后調(diào)節(jié)的帶有透氣孔、便于大鼠頭伸進的有機玻璃前罩,后端為前后間距可調(diào)的開關閘門。2方法2.1游泳時間及限制采用慢性束縛應激+過度疲勞+飲食失節(jié)的方法。實驗前全部動物進行預游泳,剔除游泳時間少于10min、大于20min的大鼠。合格造模大鼠于每天8:00am置于束縛器中限制3h,2:00pm置于盛有溫水(22±1)℃的大塑料桶中游泳10min。隔日喂食(隔日禁食,隔日足量給食),連續(xù)28d。2.2動物分組及給藥量大鼠隨機分為正常對照組、肝郁脾虛模型組(以下簡稱模型組)、柴疏四君湯組、柴胡疏肝散組、四君子湯組共5組,每組10只。后4組動物按上述制模方法處理,連續(xù)28d;正常對照組不加任何刺激,自然飼養(yǎng)。于造模第15d,中藥各組大鼠分別給予柴胡疏肝散4.2g·kg-1、四君子湯4.53g·kg-1、柴疏四君湯4.27g·kg-1ig,1次/d;模型組和對照組分別給予等量蒸餾水,連續(xù)14d。2.3外觀行為觀察觀察并記錄各組大鼠的活動、睡眠、情緒、毛發(fā)色澤、飲食、大小便等外觀行為方面的變化。2.4體重和體溫的觀察每周測定各組大鼠的體重(周日2:00~2:30pm測定)和體溫1次(周日8:00~8:30am測定)。2.5數(shù)據(jù)的統(tǒng)計處理3結果3.1不同中藥對發(fā)揮第一大模型動物情緒狀態(tài)的影響實驗期間,正常組大鼠的外觀行為等未見異常。與正常組相比,造模2周時,模型組大鼠即表現(xiàn)出活躍程度減弱、情緒不穩(wěn)定、飲食減少、易醒、大便干結;造模4周后,模型動物情緒由開始的易怒煩躁的激惹狀態(tài)轉為情緒低落、表情淡漠和爭斗減少,飲食減少,大便轉為稀溏,毛發(fā)變?yōu)榭輥y發(fā)黃,活動漸少,扎堆甚至倦臥等。分別給予中藥3方治療2周后,柴胡疏肝散組大鼠在活躍程度和情緒狀態(tài)方面有所改善;四君子湯組大鼠在皮膚毛發(fā)、飲食狀態(tài)、大便狀態(tài)方面有所改善;柴疏四君湯組大鼠在皮膚毛發(fā)、活躍程度、情緒反應、飲食睡眠、大便性狀等方面均見較為明顯的改善。3.2各組大鼠體重比較由表1可見,觀察時間范圍內(nèi)正常組大鼠體重呈逐漸增加。與正常組相比,模型組和3個方藥組大鼠體重在第1至第4周各點均明顯降低,差異均有顯著性意義(P<0.05)。與模型組相比,連續(xù)給藥2周后,3個方藥組大鼠體重在觀察各點均呈不同程度增加,其中柴疏四君湯組增加有顯著性意義(P<0.05)。3個方藥組間比較,各組大鼠體重之間均無明顯差異(P>0.05)。3.3各組大鼠進行造模后各點體溫比較由表2可見,觀察時間范圍內(nèi)正常組大鼠體溫無明顯變化,模型組大鼠的體溫呈不斷降低的變化趨勢,3個方藥組大鼠在未給藥前2周體溫不斷降低,開始給藥后2周內(nèi),大鼠體溫均呈不斷增加的趨勢。與正常組相比,模型組大鼠于造模2~4周的各點體溫均明顯降低(P<0.01);柴胡疏肝散組給藥后1~2周的體溫仍明顯低于正常組(P<0.05),而四君湯組和柴疏四君湯組大鼠體溫與正常組比無明顯差異(P>0.05),柴疏四君湯組給藥2周后大鼠體溫已達正常組水平。與模型組相比,3個方藥組大鼠體溫在藥后1~2周均呈不同程度升高,差異均有非常顯著性意義(P<0.01)。3個方藥組間比較,與柴胡疏肝散組相比,柴疏四君湯組大鼠體溫明顯升高,差異有顯著性意義(P<0.05);四君湯組大鼠體溫無明顯差異(P>0.05)。與四君湯組相比,柴疏四君湯組大鼠體溫無明顯差異(P>0.05)。4不同方對模型外觀行為的影響肝郁脾虛證是中醫(yī)肝郁與脾虛的復合證,一定程度上反映了肝郁與脾虛的加和內(nèi)涵。疏肝、健脾和疏肝健脾法則分別為肝郁、脾虛、肝郁脾虛證而設立,其中疏肝健脾法在內(nèi)涵上包括了疏肝解郁和益氣健脾兩法。柴胡疏肝散、四君子湯、柴疏四君湯分別是中醫(yī)疏肝、健脾、疏肝健脾的代表方,其中柴疏四君湯是由柴胡疏肝散和四君子湯合方而成,因此理論上認為,3方與肝郁脾虛證之間有一定的關聯(lián)性,其中當以柴疏四君湯與之關聯(lián)的程度最大,所謂“方證對應”。本研究則是通過比較相關方劑對同一肝郁脾虛證模型的作用,以探討不同方劑與證之間的對應關系。研究采用慢性束縛+飲食失節(jié)+游泳疲勞復合法復制肝郁脾虛證大鼠模型。實驗觀察到,造模兩周時,模型大鼠即表現(xiàn)出類似中醫(yī)的肝郁脾虛之象。隨著造模時間的延長,模型大鼠體重增長也呈減慢的趨勢,表明模型大鼠存在生長代謝方面的異常。上述結果與之前造模所觀察到模型大鼠的外觀行為變化基本一致。臨床曾觀察到,肝郁脾虛證患者伴有植物神經(jīng)功能的失調(diào),其中以副交感神經(jīng)偏亢為多;肝郁脾虛證患者血漿腎上腺素、去甲腎上腺素水平均明顯低于健康人。已知體溫變化與植物性神經(jīng)調(diào)節(jié)功能有關,通常體溫上升期交感神經(jīng)興奮性增高,體溫下降時副交感神經(jīng)緊張性增強。不過之前有關肝郁脾虛證的研究很少涉及對體溫的觀察,本研究在對大鼠外觀行為觀察的基礎上,增設了動物體溫的測定,以完善對模型外觀表征的了解。實驗中發(fā)現(xiàn),造模1周時大鼠體溫開始降低,之后各點呈持續(xù)顯著性降低。結果提示模型大鼠可能存在下丘腦體溫調(diào)節(jié)或植物性神經(jīng)功能調(diào)節(jié)方面的異常,有待進一步研究。實驗觀察到,中藥3方給藥2周后均可使模型大鼠的外觀行為呈現(xiàn)不同程度的改善。其中柴胡疏肝散在改善模型大鼠的情緒、活動度方面較為突出;四君子湯在改善大鼠皮膚毛發(fā)、飲食、大便等方面明顯,但對大鼠情緒方面的影響不及柴胡疏肝散;柴疏四君湯對模型大鼠的皮膚毛發(fā)、活躍程度、情緒反應、飲食睡眠、大便等多個方面均有明顯的改善作用。結果表明,疏肝方和健脾方對肝郁脾虛證模型中的肝郁和脾虛有一定的選擇性作用,疏肝健脾方則對肝郁脾虛證有較全面的作用。提示中醫(yī)肝郁脾虛證中肝郁和脾虛在病機上具有一定的加和性。3方還可使模型大鼠體重和體溫呈現(xiàn)不同程度的改善,但在增加體重方面,僅柴疏四君湯的作用顯著;在改善體溫方面,3方均有顯著作用,但柴疏四君湯可使大鼠體溫恢復至正常,且作用優(yōu)于柴胡疏肝散。結合上述3方對模型大鼠外觀行為影響的結果,可以看出相關3方雖均對肝郁脾虛證模型有一定改善作用,但疏肝方和健脾方僅對模型中部分異常變化有作用,而疏肝健脾方則在作用范圍和效度上均優(yōu)于其他2方。根據(jù)中醫(yī)“方證相關”的理論,即“方劑