daselisa方法篩查6種馬鈴薯病毒病

daselisa方法篩查6種馬鈴薯病毒病

馬蹄是水稻、小麥和玉米的第四大重要谷物。在中國，馬蹄的種植面積超過560萬公頃。主要產(chǎn)于西南山區(qū)、西北、內(nèi)蒙古和東北地區(qū)的兔子，美國排名第一。然而，中國的蘑菇平均產(chǎn)量為22.5%-45。hm大多數(shù)生產(chǎn)單位都達到了37.5.45hm，大多數(shù)生產(chǎn)單位都達到了37.5.45。他們中的大多數(shù)人仍然處于低產(chǎn)量，遠低于發(fā)達國家的生產(chǎn)水平。主要原因是，生產(chǎn)標(biāo)準(zhǔn)化水平低，病毒病影響了蘑菇的生產(chǎn)，是導(dǎo)致蘑菇產(chǎn)量降低的主要原因。加勒比海。侵染馬鈴薯常見的病毒主要包括:馬鈴薯A病毒(PVA)、馬鈴薯Y病毒(PVY)、馬鈴薯S病毒(PVS)、馬鈴薯X病毒(PVX)、馬鈴薯M病毒(PVM)、馬鈴薯卷葉病毒(PLRV)、馬鈴薯紡錘狀塊莖類病毒(PSTVd)和煙草花葉病毒(TMV)。病毒對馬鈴薯產(chǎn)量影響不同,PVA減產(chǎn)40%,PLRV減產(chǎn)40%~60%,PVY減產(chǎn)20%~50%,PVX減產(chǎn)10%~50%,PVS減產(chǎn)10%~20%,PVS+PVM減產(chǎn)20%~30%,PVS+PVX減產(chǎn)20%~30%,PVY+PVX減產(chǎn)39%,PVY+PVA減產(chǎn)80%［４－５］。馬鈴薯各種病毒的發(fā)生率與馬鈴薯的種薯級別、品種和地區(qū)有很大的相關(guān)性,而且馬鈴薯病毒對馬鈴薯生產(chǎn)的影響與馬鈴薯病毒種類和環(huán)境條件也有關(guān)。到目前為止,國際上通用最有效的防治病毒病的方法還是推廣種植脫毒種薯,同時在馬鈴薯種薯生產(chǎn)過程中進行病毒檢測,依照國家標(biāo)準(zhǔn)《馬鈴薯種薯》,劃分不同級別的種薯。該試驗應(yīng)用DAS-ELISA法對我國12個省份馬鈴薯主產(chǎn)區(qū)的試管苗、原原種和大田樣品進行了6種主要病毒的檢測,比較近年來主產(chǎn)區(qū)馬鈴薯病毒病發(fā)病情況,指導(dǎo)種薯生產(chǎn),從而有針對性地為馬鈴薯病毒病發(fā)病情況提供理論依據(jù)。1材料和方法1.1材料表面供試材料為馬鈴薯試管苗、原原種和田間病毒癥狀樣品;檢測試劑為馬鈴薯病毒檢測試劑盒,購自英國Adgen試劑公司,其它化學(xué)試劑為分析純。1.2馬鈴薯病毒病田間調(diào)查1.2.1試驗設(shè)計2010年,在馬鈴薯現(xiàn)蕾期和收獲期,分別對甘肅省、河北省、黑龍江省、吉林省、內(nèi)蒙古、山西省、陜西省、天津、云南省、西藏、重慶和北京的部分馬鈴薯主產(chǎn)區(qū)進行病毒病田間檢驗和調(diào)查。試管苗樣品采用隨機抽取,原原種和大田選擇有花葉、矮化、卷葉和壞死等病毒癥狀的樣品,無癥狀的地塊采取5點取樣法隨機取樣。所采集的樣品包括馬鈴薯試管苗309株,原原種135株以及大田樣品205株。1.2.2檢測病毒種類馬鈴薯主要病毒PVX、PVY、PVS、PLRV、PVA和PVM。1.2.3檢測方法雙抗體夾心酶聯(lián)檢測(DAS-ELISA)法參照李芝芳［６］的方法。2結(jié)果與分析2.1試苗的pvs檢出情況應(yīng)用DAS-ELISA法對所采樣品進行檢測,結(jié)果見表1。2010年試管苗、原原種和大田樣品檢測樣品數(shù)分別為309、135和205株,合格率依次為84.46%、89.63%和67.32%。由表1得到,試管苗樣品PVS檢出率最高為10.36%,共檢出32株;其次為PVM,檢出率為6.80%,檢出21株;PVY共檢出10株。原原種樣品PVX檢出率最高為7.40%,共檢出10株;PLRV次之,為2.96%,PVA為2.22%,PVM為0.74%,PVY與PVS沒有檢出。大田樣品PVY檢出率最高為26.34%,檢出54株;PVS次之為4.88%,PVX檢出率為3.90%,LRV檢出率為2.44%,PVA檢出率為0.98%,PVM沒有檢出。試管苗和原原種中PVY的檢出不高,但在大田樣品中發(fā)病率卻最高,說明在田間環(huán)境條件下有利于PVY的擴散。2.2不同病毒的復(fù)合感染情況由表2可以看出,2010年試管苗病毒檢測存在病毒單獨侵染和復(fù)合侵染情況。其中,抽檢的試管苗PVS單獨侵染率最高,達到3.24%,PVY、PLRV、PVM及PVA單獨侵染率分別為1.94%、1.29%、1.29%和0.32%,PVX無單獨侵染病毒檢出,PVS+PVM復(fù)合侵染率最高,達到4.85%,PVS+PVY、PVM+PLRV、PVS+PVX、PVS+PVY+PLRV及PVS+PVM+PL-RV復(fù)合侵染也被檢出,試管苗復(fù)合侵染也比較普遍。抽檢的原原種,僅有PVX、PVA單獨侵染被檢出,侵染率分別為4.44%和1.48%。PVX+PLRV復(fù)合侵染率最高,為2.22%,PVM+PL-RV及PVX+PVA侵染率均為0.74%,其它復(fù)合侵染未被檢出。大田樣品中,PVY單獨侵染率最高,達到22.44%,除PVM外,其余待檢病毒均有單獨侵染檢出;PVS+PVY復(fù)合侵染率最高,達到2.93%,其次為PVS+PVY+PLRV,為0.98%,PVS+PVX檢出率為0.49%。2.3pvy和pva病毒檢出率分析比較分析白艷菊、張威、高艷玲、范國權(quán)2004~2009年病害發(fā)生率［７－１０］,結(jié)合2010年馬鈴薯病毒病的發(fā)生情況進行比較(見圖1~圖3)。從圖1可看出,連續(xù)7a的檢測中,試管苗總病毒檢出率從2004~2009年的38.7%、44.6%、25.77%、48.37%下降到2010年的23.62%。試管苗檢出最主要的病毒是PVS,發(fā)病率一直最高,已是繁殖試管苗時面臨最大的問題。PVX和PLRV發(fā)病比例一直不高,PVX2008~2010年的檢出率比較低,結(jié)果都在0.7%左右,控制得較好,PLRV檢出率有所波動,但檢出率較低。PVY病毒檢出率明顯降低,2008年前PVY為第二大病害,之后降為第三大病害,發(fā)病率降到3.8%左右。自2008年檢測發(fā)現(xiàn)PVM和PVA后,PVA檢出率不高,但是PVM檢出率逐年升高,在2008年之后已成為第二大檢出病害,應(yīng)提高重視程度。分析圖2得到,2004~2007年原原種病毒檢出率為13.33%~34.8%,2009年總病毒檢出率僅為1.08%,2008和2010年在13.86%左右。PVX病毒連續(xù)幾年降低后,2010年出現(xiàn)反彈,成為危害馬鈴薯原原種最大的病害。PVA病毒在連續(xù)幾年的檢測中僅在2010年檢出,又是檢疫性病害,并且比例較高,應(yīng)加強檢測力度防止擴散。PVM比例一直較低,PVY病毒的發(fā)病率有較大的波動性,在2009~2010年都沒有檢出,對原原種危害較小。PVS病毒逐年下降?？傮w檢測結(jié)果向好的趨勢發(fā)展,但還沒有達到國家標(biāo)準(zhǔn)《馬鈴薯種薯》的要求。2004~2008年大田樣品發(fā)病率從83.8%、29.5%、73.84.%下降到2009~2010年的17.38%和38.54%,其中PVY檢出率從41.3%~62.58%下降到16.74%~22.44%,總體有所下降,波動性較大,但仍是檢出率最高、危害最大的病害。大田種薯生產(chǎn),防治PVY是控制種薯質(zhì)量的關(guān)鍵。其它幾種病毒發(fā)病率連續(xù)幾年的結(jié)果相差不大,發(fā)病比例不高。3馬鈴薯病毒病的防治對策分析連續(xù)7a的檢測結(jié)果,試管苗樣品中PVS發(fā)病比例一直最高,是危害試管苗最嚴(yán)重的病毒病。原原種樣品中,2009年檢測出PVS,2010年檢測出PVX和PVA,結(jié)合白艷菊等的調(diào)查結(jié)果分析,表明原原種發(fā)病率大大降低,但試管苗的發(fā)病率卻相對最高,說明通過試管苗的嚴(yán)格檢測把關(guān),可以有效控制原原種質(zhì)量。原原種生產(chǎn)過程中應(yīng)在溫室或保護地中栽培,受環(huán)境影響較小,然而研究發(fā)現(xiàn)PVY的發(fā)病率波動性較大,認(rèn)為是在生產(chǎn)過程中,溫室或網(wǎng)棚中傳毒介體控制不好,或人工操作時摩擦接種所致。PVA雖然是檢疫性病害,但在2010年試管苗、原原種和大田樣品中均檢測出,說明PVA的防控壓力較大。張洪峰等指出該病毒具有較高的流行風(fēng)險［１１］,感染馬鈴薯后可造成減產(chǎn)40%以上［１２］,企業(yè)在莖尖剝離前進行認(rèn)真篩查,各部門應(yīng)加大檢測力度,防止檢疫病害擴散,提高種薯生產(chǎn)質(zhì)量。大田樣品PVY檢出率仍居高不下,SoniaBoukhris-Bouhachem和NieBihua等指出馬鈴薯PVY病毒分布廣,是最具危害性的病原之一,造成嚴(yán)重經(jīng)濟損失［１３－１６］。NieXianzhou指出,馬鈴薯Y病毒組的病毒可造成寄主嚴(yán)重減產(chǎn),達100%［１７］。M.Peiman指出,馬鈴薯病毒病造成世界第一大馬鈴薯生產(chǎn)國中國的馬鈴薯減產(chǎn)30%~50%［１８］,企業(yè)應(yīng)重視種薯生產(chǎn)過程中每一步環(huán)節(jié),從源頭抓起,加大試管苗、原原種檢測力度,根據(jù)環(huán)境條件選擇適宜繁種地塊,標(biāo)準(zhǔn)化規(guī)范化生產(chǎn),做到企業(yè)自檢和送檢相結(jié)合。試管苗樣品經(jīng)歷選擇單株、莖尖剝離、形成苗過程,這期間耗費企業(yè)大量的人力物力,但樣品檢測發(fā)病率仍然較高,因此急需企業(yè)提高莖尖剝離的脫毒技術(shù),制定嚴(yán)格脫毒過程,進一步降低后續(xù)人為因素造成的感病,同時建議企業(yè)在選擇單株后首先檢測病毒,盡量淘汰有毒單株,減少脫毒難度,提高試管苗莖尖剝離的效率,使利益最大化。原原種和大田生產(chǎn)過程中,PVY發(fā)病率隨年度變化波動較大,說明該病的發(fā)生受環(huán)境因素影響較大,其中最主要是病毒的傳播介體蚜蟲。R.F.vanToor指出,通過蚜蟲傳播的病毒,造成了國際馬鈴薯的顯著減產(chǎn)［１９］。生產(chǎn)企業(yè)應(yīng)嚴(yán)防病毒的傳播媒介,在生產(chǎn)過程中,重視蚜蟲防治。以黑龍江為例,播種期一般在5月初,在4月末、5月初出現(xiàn)蚜蟲,馬鈴薯在出苗后即有蚜蟲危害,植株在幼苗期枝葉較嫩,這個時期更加容易受到蚜蟲傳毒危害,苗期感病后,發(fā)病往往比較嚴(yán)重,對產(chǎn)量影響較大。生產(chǎn)企業(yè)應(yīng)在播種時噴灑內(nèi)吸性的殺蟲劑,保證苗期起到防蚜作用,植株生長期內(nèi),定期噴施殺蟲劑,監(jiān)測蚜蟲遷飛,適時殺秧。NieXianzhou指出,利用黃板誘蚜,監(jiān)測蚜蟲數(shù)量及種類,評估蚜蟲傳播病毒的風(fēng)險,用于指導(dǎo)生產(chǎn)［２０］。9月末,大多數(shù)農(nóng)作物已經(jīng)收獲,田間作物較少,蚜蟲大量遷飛于馬鈴薯植株,造成大面積病毒侵染擴散,因此,應(yīng)及早殺秧以降低PVY發(fā)病率。建議企業(yè)選擇在高緯度、高海拔、風(fēng)速大及氣候冷涼地區(qū)建設(shè)種薯基地。樸福萬指出溫度是病毒病傳播重要影響因素之一［２１］。一般高溫(25℃以上)可降低馬鈴薯對病毒的抵抗力,利于病毒繁殖和病毒病發(fā)生,加重植株的受害程度。高溫還有利于傳毒昆蟲的繁殖、遷飛,加速病毒病的傳播擴展［２２］。不同地區(qū)還可以針對不同的地理環(huán)境選擇適宜的栽培方式,回避蚜蟲的繁殖和取食活動期［２３］,先殺秧再收獲是減少種薯再侵染病毒的有效方法,根據(jù)有翅蚜蟲遷飛規(guī)律,避開蚜蟲的活動盛期,在染病植株體內(nèi)病毒侵染到塊莖之前殺秧或早收［２４］。通過2004~2010年的檢測結(jié)果,試管苗、原原種和大田樣品總病毒檢出率呈下降趨勢,馬鈴薯種薯質(zhì)量有所提高。試管苗中PVS病毒檢出率最高,為10.36%~36.69%,PVS是影響試管苗質(zhì)量的關(guān)鍵問題,技術(shù)人員應(yīng)提高馬鈴薯脫毒技術(shù),從源頭控制試管苗質(zhì)量,脫除病毒。PVM檢出率呈逐年上升,