藥用油脂類輔料的質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)控制要點

油脂類輔料的質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)控制要點上海市食品藥品檢驗所生化藥品生物制品室陳鋼2023/9/28SHANGHAIINSTITUTEFORFOODANDDRUGCONTROL2油脂類輔料的質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)控制要點一、如何制訂油脂類輔料質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)二、中國藥典2010版對油脂類產(chǎn)品的質(zhì)量控制要求三、國外藥典對油脂類產(chǎn)品的質(zhì)量控制要求四、其他質(zhì)量控制要求2023/9/28SHANGHAIINSTITUTEFORFOODANDDRUGCONTROL3如何制訂油脂類輔料質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)在油脂類輔料的質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)研究過程中如何尋找切入點？應(yīng)采用什么方法？要達(dá)到什么目的？標(biāo)準(zhǔn)中要訂多少項目才算夠？2023/9/28SHANGHAIINSTITUTEFORFOODANDDRUGCONTROL4油脂類輔料的質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)研究原則

——總則輔料背景的了解：包括理化性質(zhì)、用途、不良反應(yīng)、生產(chǎn)工藝等；輔料質(zhì)量的狀況：對現(xiàn)有的國內(nèi)外標(biāo)準(zhǔn)、藥典標(biāo)準(zhǔn)進(jìn)行收集、比對；分析手段的掌握：對先進(jìn)分析技術(shù)的理解和掌握；多快好?。簷z測樣品多、檢測速度快、檢測質(zhì)量好、檢測成本省。（QuEChERS）5（1）單純脂質(zhì)是由脂肪酸和甘油形成的酯（也稱三酰甘油），如大豆油，以及由長鏈脂肪酸和長鏈醇或固醇組成的酯，如蠟。1、油脂的分類（2）復(fù)合脂質(zhì)除含脂肪酸和醇外，尚有其他非脂分子的成分，如磷脂（非脂成分為磷酸和含氮堿）及糖脂（非脂成分是糖）。（3）衍生脂質(zhì)由單純脂質(zhì)和復(fù)合脂質(zhì)衍生而來或與之關(guān)系密切，如固醇類（甾類）和萜等。磷脂酰乙醇胺以環(huán)戊烷多氫菲為基本結(jié)構(gòu)，并含有醇基。2023/9/28SHANGHAIINSTITUTEFORFOODANDDRUGCONTROL62、脂肪酸的命名和種類脂肪酸是由一條長的烴鏈和一個末端羧基組成的羧酸。由于脂質(zhì)中脂肪酸是最主要的成分之一，對其深入了解有助于脂質(zhì)的質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)研究。（1）命名

脂肪酸的常用簡寫方式，以亞油酸——C18:2（c9,c12）為例。2023/9/28SHANGHAIINSTITUTEFORFOODANDDRUGCONTROL7（2）種類

脂肪酸的一條長的烴鏈不含雙鍵（和三鍵）的為飽和脂肪酸，含一個或多個雙鍵的為不飽和脂肪酸。只含單個雙鍵的脂肪酸稱為單不飽和脂肪酸；含兩個或兩個以上雙鍵的稱為多不飽和脂肪酸。不飽和脂肪酸中含一個或多個非共軛的反式雙鍵的稱為反式脂肪酸。不同脂肪酸之間的主要區(qū)別在于烴鏈的長度（碳原子數(shù)目）、雙鍵數(shù)目和位置。3、油脂的生產(chǎn)工藝2023/9/28SHANGHAIINSTITUTEFORFOODANDDRUGCONTROL8油脂類輔料的質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)控制要點一、如何制訂油脂類輔料質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)二、中國藥典2010版對油脂類產(chǎn)品的質(zhì)量控制要求三、國外藥典對油脂類產(chǎn)品的質(zhì)量控制要求四、其他質(zhì)量控制要求2023/9/28SHANGHAIINSTITUTEFORFOODANDDRUGCONTROL9脂質(zhì)的物理測定（1）相對密度物質(zhì)的密度與標(biāo)準(zhǔn)物質(zhì)的密度之比，稱之為相對密度。大部分情況下，標(biāo)準(zhǔn)物質(zhì)是水。天然油脂的相對密度均小于1，除極少數(shù)如肉豆蔻油的相對密度高達(dá)0.996外，一般為0.91~0.94。2023/9/28SHANGHAIINSTITUTEFORFOODANDDRUGCONTROL10脂質(zhì)的物理測定（2）折光率折光率是有機化合物最重要的物理常數(shù)之一，它能精確而方便地測定出來，作為液體物質(zhì)純度的標(biāo)準(zhǔn)，它比沸點更為可靠。利用折光率，可鑒定未知化合物。如果一個化合物是純的，那么就可以根據(jù)所測得的折光率排除考慮中的其它化合物，而識別出這個未知物來。另外，折光率也用于確定液體混合物的組成。這也是液體脂質(zhì)需要測定折光率的原因之一。2023/9/28SHANGHAIINSTITUTEFORFOODANDDRUGCONTROL11脂質(zhì)的物理測定（3）熔點熔點是物質(zhì)的一個物理性質(zhì)，即在一定壓力下，純物質(zhì)的固態(tài)和液態(tài)呈平衡時的溫度。物質(zhì)的熔點并不是固定不變的，有兩個因素對熔點影響很大。一是壓強，另一個就是物質(zhì)中的雜質(zhì)，我們平時所說的物質(zhì)的熔點，通常是指純凈的物質(zhì)。天然油脂由于都是多種三酰甘油的混合物，因此沒有明確的熔點，只有一個大概范圍。三酰甘油的熔點與其脂肪酸的組成有關(guān)，一般隨組分中不飽和脂肪酸（雙鍵數(shù)目）和低相對分子質(zhì)量脂肪酸的比例增高而降低。MeltingPointsandSolubilityinWaterofFattyAcidsSolubilityinWaterChainLengthMeltingPointFattyAcids

M.P.(℃)mg/100mlSolubleinH2OC18700.04C4-8

-C6-4970C81675C10316C12440.55C14540.18C16630.08熔點及溶解度與脂肪酸鏈長的關(guān)系熔點與雙鍵的關(guān)系F.A.M.P.(℃)16:1

1

6016:0

6318:0

1618:1

-518:2

-1118:3

7520:0

-5020:42023/9/28SHANGHAIINSTITUTEFORFOODANDDRUGCONTROL15脂質(zhì)的物理測定（4）脂肪酸凝點凝點是反映化合物純度的物理常數(shù)。由于目前有更好的化學(xué)方法測定脂質(zhì)中的脂肪酸比例和分布，故此測定目前不常用。2023/9/28SHANGHAIINSTITUTEFORFOODANDDRUGCONTROL16脂質(zhì)的化學(xué)測定（1）酸值（游離脂肪酸）表示脂肪和脂肪油中含有游離酸的一種指標(biāo)。其定義為中和1g油脂中的游離脂肪酸所需氫氧化鉀的毫克數(shù)。常用以表示油脂緩慢氧化后的酸敗程度。一般酸值大于6的油脂不宜使用。USP的定義與中國藥典略有不同，以酸度表示：脂肪和脂肪油的酸度以中和10.0g物質(zhì)中的游離脂肪酸所需0.1N堿的毫升數(shù)表示。USP提供了兩種方法，除正文中另有規(guī)定外，采用方法一測定，中國藥典采用的方法與USP的方法一相同。2023/9/28SHANGHAIINSTITUTEFORFOODANDDRUGCONTROL17脂質(zhì)的化學(xué)測定（2）皂化值三酰甘油在堿溶液中水解，產(chǎn)物之一是脂肪酸的鹽（如鈉、鉀鹽），俗稱皂；油脂的堿水解作用稱皂化作用。皂化值系指中和并皂化1.0g供試品中游離脂肪酸和酯類所需氫氧化鉀的mg數(shù)。皂化值的高低表示油脂中脂肪酸分子量的大?。粗舅崽荚拥亩嗌伲Ｔ砘涤?，說明脂肪酸分子量愈小，親水性較強，失去油脂的特性；皂化值愈低，則脂肪酸分子量愈大或含有較多的不皂化物，油脂接近固體，難以注射和吸收，所以注射用油需規(guī)定一定的皂化值范圍，使油中的脂肪酸在C16~C18的范圍。中國藥典采用的方法與國外藥典基本一致。如果為了防腐，脂肪油事先充有二氧化碳的話，在稱量之前，應(yīng)將供試品置于淺盤中，在真空干燥器里放置24小時。2023/9/28SHANGHAIINSTITUTEFORFOODANDDRUGCONTROL18脂質(zhì)的化學(xué)測定（3）羥值系指與1.0g物質(zhì)中的羥基含量等值的氫氧化鉀的毫克數(shù)，是對脂肪中羥基數(shù)目的定量。羥值的測試都是酸酐反應(yīng)（?；磻?yīng)）做基礎(chǔ)的，以被消耗的酸酐量測試出羥基含量。?；磻?yīng)在各國藥典中的方式有略微差異。由于?；磻?yīng)時游離脂肪酸羧基中的羥基未參與反應(yīng)，故根據(jù)定義應(yīng)將酸值加上。另外，也有用乙酰值來表示油脂的羥基化程度。2023/9/28SHANGHAIINSTITUTEFORFOODANDDRUGCONTROL19脂質(zhì)的化學(xué)測定（4）碘值表示100g供試品在規(guī)定的條件下消耗的碘的g數(shù)。油脂分子中的不飽和脂肪酸也和游離不飽和脂肪酸一樣，能與鹵素起加成反應(yīng)。鹵化反應(yīng)中吸收鹵素的量反映不飽和鍵的多少。USP提供了兩種方法，除正文中另有規(guī)定外，采用方法一測定，中國藥典采用的與方法一相同。（注意：若超過一半的溴化碘試劑被供試品消耗，減少供試品取樣量，重新測定。）牦牛奶脂肪碘價與季節(jié)變化2023/9/28SHANGHAIINSTITUTEFORFOODANDDRUGCONTROL21脂質(zhì)的化學(xué)測定（5）過氧化值系指每1000g供試品中的過氧化物量，以活性氧的毫摩爾數(shù)表示。過氧化值表示油脂和脂肪酸等被氧化程度的一種指標(biāo)。用于說明樣品是否已被氧化而變質(zhì)。油脂氧化后生成過氧化物等，其氧化能力較強，能將碘化鉀氧化成游離碘?？捎昧虼蛩徕c來滴定。由于油脂氧化酸敗會產(chǎn)生一些小分子物質(zhì)（如自由基），其在體內(nèi)會產(chǎn)生不良影響，所以過氧化值太高的油不宜食用，更不用說用來制藥了。（注：取樣后需迅速進(jìn)行測定，以防供試品被氧化。）2023/9/28SHANGHAIINSTITUTEFORFOODANDDRUGCONTROL22油脂類輔料的質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)控制要點一、如何制訂油脂類輔料質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)二、中國藥典2010版對油脂類產(chǎn)品的質(zhì)量控制要求三、國外藥典對油脂類產(chǎn)品的質(zhì)量控制要求四、其他質(zhì)量控制要求2023/9/28SHANGHAIINSTITUTEFORFOODANDDRUGCONTROL23USP,Ph.Eur.1、酯化值

是指用于皂化1.0g物質(zhì)中的酯所需要的氫氧化鉀的毫克數(shù)。如果已測定了皂化值和酸值，則兩者之差即為酯化值。即酯化值＝皂化值－酸值。也可參照USP的方法進(jìn)行測定。2023/9/28SHANGHAIINSTITUTEFORFOODANDDRUGCONTROL24USP,Ph.Eur.2、不皂化物

系指油脂中能溶于有機溶劑中但不能被堿性氫氧化物皂化的物質(zhì)，以及能溶于有機溶劑的皂化產(chǎn)物。這些物質(zhì)是高級脂肪醇、甾醇和碳?xì)浠衔锏?，能溶于乙醚等有機溶劑。具體測定方法參照USP。2023/9/28SHANGHAIINSTITUTEFORFOODANDDRUGCONTROL25USP,Ph.Eur.3、脂肪酸組成

大多數(shù)天然油脂都是簡單甘油三酯和混合甘油三酯的復(fù)雜混合物。但從油脂的脂肪酸組成來看，還是有一定的規(guī)律的（見表2）?？梢詮闹舅岬慕M成和比例來區(qū)分不同的油脂。主要采用氣相色譜法，具體測定方法參照USP。2023/9/28SHANGHAIINSTITUTEFORFOODANDDRUGCONTROL26USP,Ph.Eur.4、ω-3脂肪酸的測定和分類ω-3脂肪酸（也表示成n-3）的研究始于愛斯基摩人很少得心血管類疾病，研究顯示ω-3脂肪酸能促進(jìn)甘油三酯的降低，有益心臟健康，所以油脂特別是魚油中需要測定ω-3脂肪酸。以下方法用于測定來自魚、植物或微生物的原料油或膠丸中的二十碳五烯酸（EPA）（C20:5n-3）、二十二碳六烯酸（DHA）（C22:6n-3）和總ω-3脂肪酸。方法中所用溶液應(yīng)避免與光、氧化性物質(zhì)、氧化催化劑和空氣接觸。（1）EPA和DHA含量參照USP進(jìn)行（氣相色譜法）。（2）總ω-3脂肪酸含量參照USP進(jìn)行（氣相色譜法）。2023/9/28SHANGHAIINSTITUTEFORFOODANDDRUGCONTROL27USP,Ph.Eur.5、甲氧基苯胺值是指在每100ml溶劑和試劑混合液（按藥典規(guī)定的方法配制）中溶解的1g供試品得到的溶液在1-cm的小池中測定吸光度的100倍值。油脂中不飽和甘油三酯在氧的存在下，生成過氧化物后，在適宜的條件下，可繼續(xù)分解成醛和酮等物質(zhì)。醛和酮類物質(zhì)與甲氧基苯胺反應(yīng)生成醇胺，醇胺脫水生成醛亞胺，可用紫外法測定。通過測定甲氧基苯胺值可反映油中醛和酮類物質(zhì)的量。具體的測定方法可參照USP。（注：盡快操作，防止暴露于光線）。經(jīng)查USP（33版），制訂甲氧基苯胺值的品種共有5個，均為含魚油或ω-3脂肪酸（如DHA和EPA）的產(chǎn)品，限值從15至30不等。2023/9/28SHANGHAIINSTITUTEFORFOODANDDRUGCONTROL28USP,Ph.Eur.6、總氧化值（TOTOX）

是過氧化值和甲氧基苯胺值的總和，可以很好地反映油脂的氧化情況。總氧化值以下式計算：2PV+AV式中PV為過氧化值，AV為甲氧基苯胺值。2023/9/28SHANGHAIINSTITUTEFORFOODANDDRUGCONTROL29USP,Ph.Eur.7、微量金屬元素由于油脂來源于生物體，特別是魚油來自海洋，重金屬的污染應(yīng)特別注意，故需要對微量金屬元素進(jìn)行測定。樣品經(jīng)微波消解后用原子吸收分光光度法進(jìn)行測定，石墨爐原子化器用于測定鎘、銅、鐵、鉛、鎳、鋅；自動氫化物發(fā)生原子化器用于測定砷和汞。具體方法可參見USP。2023/9/28SHANGHAIINSTITUTEFORFOODANDDRUGCONTROL30USP,Ph.Eur.8、甾醇組成

甾醇又稱固醇，是類固醇的一種。甾醇類化合物廣泛分布于生物界。用脂肪溶劑提取動植物組織中的脂類，其中常有多少不等的、不能為堿所皂化的物質(zhì)，它們均以環(huán)戊烷多氫菲為基本結(jié)構(gòu)，并含有醇基，故稱為甾醇類化合物。膽固醇是高等動物細(xì)胞的重要組分。它與長鏈脂肪酸形成的膽固醇酯是血漿脂蛋白及細(xì)胞膜的重要組分。植物細(xì)胞膜則含有其它甾醇如豆甾醇及谷甾醇。真菌和酵母則含有菌甾醇。甾醇是油脂中的一類雜質(zhì)，有些成分多了對人體有害，如膽固醇等。油脂中甾醇的組成和分布是不同的，因此也可以作為鑒別。不同油脂的甾醇組成和分布圖：葵花籽油的甾醇測定氣相色譜圖：無膽固醇（1），△7-菜油甾醇（7）、△7-豆甾醇（14）和△7-燕麥甾醇（15）含量高。β-谷甾醇圖：橄欖油的甾醇測定氣相色譜圖：含膽固醇，不含△7-菜油甾醇（7），△7-豆甾醇（14）和△7-燕麥甾醇（15）含量低。甾醇的測定（1）甾醇組分的分離，先將樣品中的不皂化物提取出來，再用薄層色譜法或液相色譜法（Ph.Eur.7.0）分離出甾醇餾分；（2）甾醇的測定，采用氣相色譜法進(jìn)行。2023/9/28SHANGHAIINSTITUTEFORFOODANDDRUGCONTROL32甾醇的測定——甾醇組分的分離2023/9/28SHANGHAIINSTITUTEFORFOODANDDRUGCONTROL33圖：供試品的甾醇分離液相色譜圖收集從20分鐘至32分鐘的洗脫液橄欖油提取不皂化物后，采用Kromasil60-5SIL硅膠柱（250×4.6mm），以異丙醇-正己烷（1：99）為流動相，經(jīng)高效液相色譜分離，流速為每分鐘1.0ml，檢測波長為210nm，采用Agilent1260FC-AS餾分收集器。甾醇的測定——甾醇的測定收集液甲酯化后，照氣相色譜法（中國藥典2010年版二部附錄VE）測定，采用5%苯基-95%甲基