蛋白質(zhì)分離純化與鑒定

蛋白質(zhì)分離純化與鑒定

—綜合性實(shí)驗(yàn)三峽大學(xué)醫(yī)學(xué)院生物化學(xué)教研室1、從血清獲得高純度的白蛋白2、掌握蛋白質(zhì)鹽析、G-25葡聚糖凝膠層析脫鹽、DEAE-纖維素離子交換層析、SDS電泳的原理與實(shí)驗(yàn)操作技術(shù)3、掌握考馬斯亮藍(lán)G250染色法定量檢測(cè)蛋白質(zhì)的原理和操作方法4、了解紫外檢測(cè)儀、自動(dòng)部分收集器、記錄儀、恒壓高位槽的原理與使用方法實(shí)驗(yàn)?zāi)康膶?shí)驗(yàn)流程蛋白質(zhì)鹽析葡聚糖凝膠Ｇ-25（脫鹽）DEAE-Cellulose離子交換（純化）蛋白質(zhì)濃度檢測(cè)SDS電泳法（鑒定蛋白質(zhì)純度）柱層析實(shí)驗(yàn)裝置UVmonitorRecorderFractionCollectorColumnBufferReservoir柱層析實(shí)驗(yàn)儀器一：HD-3紫外檢測(cè)儀波長(zhǎng)光量靈敏度電源調(diào)零根據(jù)光吸收原理設(shè)計(jì)，光源為紫外光，可監(jiān)測(cè)具有紫外吸收物質(zhì)(蛋白質(zhì)、核酸、多肽、酶)的檢測(cè)儀器，與層析柱、部份收集器及記錄儀配套，組成一個(gè)完整的液相色譜分離分析裝置。構(gòu)造和功能1.檢查：連接是否正確，將“波長(zhǎng)”旋鈕旋到所需波長(zhǎng)刻度；2.預(yù)熱：按下“電源”開關(guān)，電源指示燈亮；3.調(diào)100%：把“靈敏度”旋鈕選擇到“100％”檔，調(diào)節(jié)“光量”旋鈕，數(shù)字顯示為100，即透光率為100％；4.調(diào)零：把“靈敏度”旋到所需檔（使用者自行掌握），緩慢調(diào)節(jié)“調(diào)零”旋鈕，數(shù)字顯示為“0”。備注：以上步驟需反復(fù)調(diào)節(jié)幾次。在樣品檢測(cè)過程中，不可再調(diào)節(jié)“調(diào)零”、“光量”旋鈕。如繪出的圖譜即出峰過小，可改變“靈敏度”選擇檔，每檔成兩倍放大關(guān)系。使用方法柱層析實(shí)驗(yàn)儀器二：BSZ-100自動(dòng)部份收集器構(gòu)造和功能選擇置數(shù)手/自動(dòng)切換復(fù)位按照設(shè)定的時(shí)間自動(dòng)收集樣品使用方法1.準(zhǔn)備：檢查“漏液報(bào)警板”、試管插在收集架上；2.定位：按“復(fù)位”鍵，“報(bào)警”后，再按“復(fù)位”鍵，儀器自動(dòng)復(fù)位；把安全閥上橫桿一頭的硅膠管對(duì)準(zhǔn)第一根試管位置，固定好螺釘；3.定時(shí)：按“手動(dòng)/自動(dòng)”鍵，儀器為[手動(dòng)]狀態(tài)，按“選擇”鍵選定位置，按“置數(shù)”鍵設(shè)置時(shí)間，再按“選擇”鍵確定；4.自動(dòng)收集：按“切換”鍵，“收集”指示燈亮，儀器為[收集]狀態(tài)；按“手動(dòng)/自動(dòng)”鍵，儀器為[自動(dòng)收集]狀態(tài)；5.停止收集：或按“手/自動(dòng)”鍵，儀器為[手動(dòng)]狀態(tài)或關(guān)電源。柱層析實(shí)驗(yàn)儀器三：LM17型記錄儀構(gòu)造和功能抬/落筆手柄量程顯示調(diào)紙速紙速啟停紙速顯示電源量程/零位切換鍵當(dāng)樣品流過檢測(cè)儀時(shí)，記錄儀即可繪出洗脫圖譜使用方法1.打開：按“電源”

；2.

調(diào)零：按“量程/零位”鍵，零位指示燈亮，數(shù)碼管顯示“Po”，按[左移]或[右移]鍵，使記錄筆移至所需零位；3.

選擇量程：按“量程/零位”鍵，量程指示燈亮，數(shù)碼管顯示當(dāng)前量程范圍，按[增加]或[減少]鍵，使量程為10mV；4.

調(diào)紙速：按“啟/?！辨I，