急性毒性實驗終結(jié)版LC50

急性毒性試驗－LD50

與LC50

的測定急性毒性試驗實驗?zāi)康募耙饬x： 確定受試物的半數(shù)致死劑量LD50/LC50、觀察受試物所致的急性中毒癥狀及其毒性作用特點，為進一步的毒性試驗提供重要的參考依據(jù)。 急性毒性試驗的染毒方式可有多種，包括經(jīng)口、經(jīng)呼吸道、經(jīng)皮及注射染毒方式等。經(jīng)口急性毒性試驗（LD50）

試驗?zāi)康?/p>

學(xué)習(xí)急性毒性試驗的實驗設(shè)計原則熟練掌握經(jīng)口灌胃染毒操作技術(shù)掌握LD50計算方法和急性毒性分級標(biāo)準

試驗內(nèi)容動物選擇和性別鑒定稱重、編號和隨機分組小鼠經(jīng)口灌胃操作技術(shù)

毒性癥狀觀察、LD50計算和毒性分級操作步驟動物選擇及性別辨認 急性毒性實驗一般首選哺乳動物，其中又以大小鼠最為常用。大、小鼠主要依據(jù)肛門與生殖器之間的距離來區(qū)分。遠——♂、近——♀。成年鼠：雄性臥位可見睪丸，雌性可見腹部有12個乳頭。動物稱重、編號和隨機分組應(yīng)依據(jù)統(tǒng)計學(xué)原則進行隨機分組。12345612...組數(shù)只數(shù)體重123456789受試物劑量選擇對于一種新的化學(xué)物質(zhì)，劑量選擇可參照同系物的毒性或文獻資料加以估計，先用少量動物以組距較大的一系列劑量進行預(yù)實驗，找出粗略的致死劑量范圍，然后再設(shè)計出正式實驗劑量組受試物配制 本次試驗所用的受試物是80％的敵敵畏(DDVP)原液。按照事先設(shè)計的劑量分別稀釋配制為幾種不同濃度的受試物溶液，而各個劑量組的動物均給予相同單位體重體積的受試化學(xué)物。劑量mg/kg

原液量(g)原液量(ml)定容量(ml)原液量(ml)36.440.11390.0813500.094851.020.15940.1139500.132771.430.22320.1594500.18581000.31250.2232500.26031400.43750.3125500.36421960.61250.4375500.5099敵敵畏（DDVP）配制：（組距1.4，給藥量0.2ml/10g）（4℃）（25℃）灌胃操作將動物固定成垂直體位，腹部面向操作者，使動物的上消化道固定成一直線毒性作用/中毒癥狀和動物死亡情況觀察 高劑量組動物的死亡常很快發(fā)生，染毒后應(yīng)即刻密切觀察。觀察和記錄中毒癥狀及出現(xiàn)的時間，死亡數(shù)量和時間及死亡前的特征。按照實驗結(jié)果，填寫急性毒性實驗記錄表。 中毒的癥狀觀察：興奮、流涎、肌震顫、抽搐、管狀尾、呼吸減慢、呼吸困難、四肢無力、站立不穩(wěn)、大小便失禁、大劑量側(cè)臥以致死亡。 改進寇氏法是利用劑量對數(shù)與死亡率呈S型曲線而設(shè)計的方法，又稱Karber法或平均致死量法。本法要求每個染毒劑量組動物數(shù)要相同，各劑量組組距呈等比級數(shù)，死亡率呈正態(tài)分布，最低劑量組死亡率呈<20%，最高劑量組死亡率>80%。LD50計算（改良寇氏法） 根據(jù)實驗動物中毒癥狀、死亡時間、特征和LD50，按受試物種類，分別參照相應(yīng)的經(jīng)口急性毒性分級標(biāo)準進行評定，判斷該受試物的毒性大小及毒性特征。毒性分級及結(jié)果評定健康成年小鼠若干只（按每組5~6人，每組10只動物，♂♀各半）、50ml容量瓶(每組1個)、加樣器（200μl、1000μl）、加樣槍頭、DDVP原液、1ml玻璃注射器、灌胃針頭（每組2套）、棉簽、染液、LD50記錄紙、小鼠籠（每組2個）、電子天平（2臺）、搪瓷托盤（每組一個）、受試物、苦味酸酒精飽和液、0.5%品紅溶液或其它染色劑。實驗課所需準備的試劑和材料：經(jīng)呼