病證結(jié)合動(dòng)物模型的研究進(jìn)展

病證結(jié)合動(dòng)物模型的研究進(jìn)展

“病證結(jié)合”的動(dòng)物模型不僅具有西醫(yī)疾病的特點(diǎn)，而且具有中醫(yī)證候的特點(diǎn)。這有助于中醫(yī)藥的研究和評(píng)價(jià)，有助于更好地理解中醫(yī)藥的科學(xué)內(nèi)容。它為探討疾病病理生理變化與中醫(yī)癥狀之間的關(guān)系提供了許多優(yōu)勢(shì)。近年來(lái),圍繞證候本質(zhì),從臨床研究到動(dòng)物實(shí)驗(yàn),從尋求單一的“證”的特異性指標(biāo)到病證結(jié)合研究某一病證的客觀指標(biāo),積累了豐富的研究資料,但同時(shí)也存在許多問(wèn)題?，F(xiàn)將病證結(jié)合模型的研究進(jìn)展綜述如下。1疾病和癥狀的結(jié)合1.1中醫(yī)病因病辨選擇研究的疾病與證候應(yīng)具有密切的關(guān)聯(lián)性,也應(yīng)具有發(fā)展階段的同步性,易于找出兩者在臨床上的結(jié)合點(diǎn),比如發(fā)現(xiàn)冠心病與血瘀證的密切聯(lián)系,腎虛與骨關(guān)節(jié)疾病聯(lián)系密切等?！安　迸c“證”是不同醫(yī)學(xué)體系中的兩個(gè)概念,是分別從不同角度對(duì)疾病的認(rèn)識(shí),“辨證”是中醫(yī)的優(yōu)勢(shì),“辨病”是西醫(yī)的特長(zhǎng)。病證結(jié)合動(dòng)物模型就是在制作動(dòng)物模型時(shí),同時(shí)考慮病、證制作出的動(dòng)物模型,如冠心病血瘀證動(dòng)物模型、高血壓病腎陰虛證動(dòng)物模型、潰瘍病脾虛證動(dòng)物模型等。1.2動(dòng)物的造模改造病證結(jié)合動(dòng)物模型所用的造模動(dòng)物既要滿足對(duì)造模藥物敏感、模型特征出現(xiàn)迅速、持續(xù)和穩(wěn)定的要求,又要滿足易于造成所要研究的疾病和相應(yīng)證候特征的要求。不同品系、不同性別的實(shí)驗(yàn)動(dòng)物對(duì)造模因素的耐受程度和敏感度不同,所以同等強(qiáng)度的造模因素作用于不同種系、不同生長(zhǎng)階段的動(dòng)物上所表現(xiàn)出來(lái)的造模效果也是不相同的。另外,人和實(shí)驗(yàn)動(dòng)物宏觀和微觀的疾病變化規(guī)律也不完全一致。要找與人體組織器官相似的動(dòng)物來(lái)復(fù)制模型,或者是某個(gè)系統(tǒng),甚至是某個(gè)器官相似的動(dòng)物用作造模動(dòng)物。最好是找宏觀、微觀變化規(guī)律都相似的動(dòng)物。例如弗氏完全佐劑和II型膠原誘導(dǎo)的類(lèi)風(fēng)濕性關(guān)節(jié)炎模型,根據(jù)動(dòng)物易感程度的不同,前者造模常用Wistar大鼠,后者用DBA—/1、NFR/N、B10.G近交系小鼠。又如許文玉等制作冠心病血瘀證動(dòng)物模型,選用中華小型豬作為模型動(dòng)物,因?qū)嶒?yàn)小型豬的心臟解剖結(jié)構(gòu)及側(cè)枝循環(huán)與人類(lèi)相似;被毛稀少,皮膚組織結(jié)構(gòu)和人最相似,便于觀察皮膚變化;還可按中醫(yī)辨證施治要求作舌診觀察,用相機(jī)記錄病程中舌象的變化;多次反復(fù)大量采取血液和其他體液,便于動(dòng)態(tài)觀察血液流變學(xué)和其他生化指標(biāo)。1.3模型中的選定因素目前病證結(jié)合模型的造模多采用西醫(yī)病理造模因素疊加中醫(yī)證候造模因素的方法。另外也有使用單一物理或化學(xué)因素造成病證結(jié)合模型的方法。1.3.1病證結(jié)合模型根據(jù)中醫(yī)病因病機(jī)理論,使用物理因素制造中醫(yī)證候模型,疊加藥物因素制造西醫(yī)病理模型:如梁俊清等以Wistar大鼠為實(shí)驗(yàn)動(dòng)物,采用高同型半胱氨酸血癥誘發(fā)血管內(nèi)皮功能障礙為基礎(chǔ)病理模型,疊加“基礎(chǔ)進(jìn)食和強(qiáng)迫負(fù)重游泳”誘發(fā)氣虛證候,制作絡(luò)氣虛滯型血管內(nèi)皮功能障礙動(dòng)物模型。又如徐珊等采用CCl4注射法復(fù)制肝硬化疾病模型疊加大黃灌胃法、游泳疲勞法制備肝纖維化肝脾虛病證結(jié)合模型。陳天娥等研究制作“大鼠脾氣虛胃潰瘍證病結(jié)合模型”,麻醉動(dòng)物,暴露胃竇部,將0.02mL50%冰醋酸注入黏膜下層,然后逐層縫合切口,手術(shù)后采用的耗氣破氣加飲食失節(jié)法連續(xù)14d,造成脾氣虛模型。李冀等用大黃法、飲食失節(jié)法疊加乙酸涂抹法復(fù)制脾虛胃潰瘍大鼠病證結(jié)合模型。西醫(yī)病理因素或化學(xué)藥物疊加制作病證結(jié)合模型:如韓清民等使用SD雌性大鼠雙側(cè)卵集切除去勢(shì)結(jié)合單側(cè)膝前后交叉韌帶、內(nèi)側(cè)副韌帶切斷的方法復(fù)制腎虛型骨性關(guān)節(jié)炎模型。梁愛(ài)華等用細(xì)菌內(nèi)毒素與角叉菜膠兩種因素疊加,制作血瘀證和血栓形成病證結(jié)合動(dòng)物模型。西醫(yī)病理因素造或化學(xué)藥物中醫(yī)證候模型,疊加藥物或病理因素造西醫(yī)疾病模型:如徐世杰等用切除小鼠卵巢疊加Ⅱ型膠原皮下注射以誘導(dǎo)關(guān)節(jié)炎的的方法制備小鼠腎陽(yáng)虛型免疫性關(guān)節(jié)炎病證結(jié)合模型。1.3.2證結(jié)合模型疾病患者臨床結(jié)合應(yīng)用單一病理因素制備病證結(jié)合模型,即使用單一病理因素作為病證結(jié)合模型疾病與證候共同的造模因素。如劉蕾等采用對(duì)中華小型豬施行冠脈Ameroid環(huán)縮術(shù)的方法,制作心肌缺血血瘀證小型豬模型。單一藥物因素制備病證結(jié)合模型,即使用單一病理因素作為病證結(jié)合模型疾病與證候共同的造模因素。如楊宇飛等以腹腔注射促紅細(xì)胞生成素腹腔注射的方法造成繼發(fā)性紅細(xì)胞增多癥動(dòng)物模型,該模型既符合繼發(fā)性紅細(xì)胞增多癥疾病模型,又符合中醫(yī)血瘀證模型,為病證結(jié)合模型。又如裴妙榮等采用Wistarda大鼠每日0.1%丙基硫氧嘧啶(PTU)灌胃(用生理鹽水配成0.1%的溶液),給藥劑量1mL/100g的方法,制備大鼠腎陽(yáng)虛型甲狀腺功能減退癥病證結(jié)合模型。這種使用單一造模手段制作病證結(jié)合模型的造模方法,文獻(xiàn)報(bào)道并不多見(jiàn),但是由于其造模因素單一,可控性相對(duì)較強(qiáng),其針對(duì)一些特殊的病證,如心肌缺血血瘀證,不失為一種有效可行的方法。2疾病和癥狀的綜合評(píng)價(jià)2.1同指標(biāo)轉(zhuǎn)換問(wèn)題首先,在人的證候診斷標(biāo)準(zhǔn)基礎(chǔ)上,注重挖掘動(dòng)物身上的具有診斷意義的信息特征,對(duì)模型進(jìn)行恰當(dāng)?shù)谋孀C診斷。需要注意的是,這里有一個(gè)生物意義上相同指標(biāo)的轉(zhuǎn)換問(wèn)題,即人與動(dòng)物四診的轉(zhuǎn)換問(wèn)題,需要進(jìn)一步探討。其次,將臨床研究和基礎(chǔ)研究中能夠較客觀地反映證候特征的微觀指標(biāo),也移植到動(dòng)物模型評(píng)價(jià)上。以及借鑒四診的客觀化研究成果。如利用心電圖反映動(dòng)物的心臟情況;根據(jù)動(dòng)物的脫毛、抓取激惹、拱背蜷縮等程度不同進(jìn)行半定量評(píng)分。此外,可采用中藥反佐證明的方法,對(duì)模型進(jìn)行評(píng)價(jià)。如模型動(dòng)物服用四君子湯后癥狀、體征和實(shí)驗(yàn)檢測(cè)指標(biāo)明顯好轉(zhuǎn),并恢復(fù)正常,提示此模型為脾虛證。2.2疾病模型評(píng)價(jià)疾病總會(huì)在機(jī)體代謝、機(jī)能及形態(tài)等方面表現(xiàn)出異常改變,疾病在發(fā)生發(fā)展過(guò)程中必然出現(xiàn)一些臟器組織的病變或血液組織液中某些特異性物質(zhì)的變化。通過(guò)疾病發(fā)病機(jī)制的研究,可以掌握與疾病相關(guān)性大的一些生理生化成分。通過(guò)檢測(cè)這些成分的變化,可以對(duì)疾病模型的造模進(jìn)行評(píng)價(jià)。例如用于類(lèi)風(fēng)濕性關(guān)節(jié)炎研究的佐劑型關(guān)節(jié)炎大鼠模型,其特異性指標(biāo)變化為:踝關(guān)節(jié)腫脹、炎細(xì)胞浸潤(rùn)、血管翳形成、軟骨組織的破壞和骨侵蝕、血清中細(xì)胞壞死因子α和白介素Ιβ的含量顯著增高等。2.3同時(shí)間生物測(cè)定如代謝組學(xué)的方法,具備反映和解決證候問(wèn)題的“組”、“群”、“譜”集成的分析功能,側(cè)重于尋找相關(guān)特定組分的共性加以分析、判斷。它能夠通過(guò)檢測(cè)不同時(shí)間的尿液或血液,對(duì)這些由疾病引起的代謝產(chǎn)物進(jìn)行分析,有助于了解病變過(guò)程及機(jī)體內(nèi)物質(zhì)的代謝途徑和代謝狀況,還有助于疾病的生物標(biāo)記物的發(fā)現(xiàn),可以提高診斷的科學(xué)化、定量化,避免了人為因素的干擾,為證候和疾病標(biāo)準(zhǔn)化的研究提供了一種可行的方法。如王米渠等用基因芯片的方法研究中醫(yī)寒證患者,發(fā)現(xiàn)寒證的基因表達(dá)譜有顯著差異,在59條差異表達(dá)基因中,絕大多數(shù)與代謝(能量代謝、蛋白質(zhì)代謝等)有關(guān),說(shuō)明寒證患者的代謝網(wǎng)絡(luò)有別于常人。3價(jià)格補(bǔ)充3.1病證結(jié)合模型評(píng)價(jià)要制作出比較理想的病證結(jié)合模型并形成比較合理的評(píng)價(jià)標(biāo)準(zhǔn),我們應(yīng)該關(guān)注于疾病和中醫(yī)證候的物質(zhì)基礎(chǔ)研究。隨著疾病發(fā)病機(jī)制研究以及中醫(yī)證候研究的不斷深入,我們掌握了越來(lái)越多的信息,這對(duì)我們進(jìn)一步改進(jìn)病證模型造模方法是很有幫助的。例如,研究表明血清Sa抗體對(duì)類(lèi)風(fēng)濕性關(guān)節(jié)炎診斷的特異性為95.8%,其有可能作為類(lèi)風(fēng)濕性關(guān)節(jié)炎動(dòng)物模型的一個(gè)特異性指標(biāo)用于模型評(píng)價(jià)。又如,通過(guò)對(duì)中醫(yī)證候本質(zhì)的深入研究,觀察到肝陽(yáng)上亢證與植物神經(jīng)功能及前列腺素代謝間的聯(lián)系;血瘀證與血小板結(jié)構(gòu)、功能、代謝間的聯(lián)系;肝氣郁結(jié)證與神經(jīng)內(nèi)分泌紊亂的聯(lián)系。沈自尹從臟腑辨證思路著手,對(duì)“證”的研究通過(guò)“形見(jiàn)于外”探求“藏居于內(nèi)”的本質(zhì),設(shè)立統(tǒng)一辨證標(biāo)準(zhǔn),選擇符合“形見(jiàn)于外”腎陽(yáng)虛證而無(wú)其它證夾雜的典型患者,結(jié)果發(fā)現(xiàn)腎陽(yáng)虛患者普遍有尿17-羥皮質(zhì)類(lèi)固醇含量低下的現(xiàn)象。嚴(yán)惠芳等選擇臨床慢性腎小球腎炎腎陰虛證和腎陽(yáng)虛證患者為研究對(duì)象,檢測(cè)其血清白細(xì)胞介素6、腫瘤壞死因子α的濃度。結(jié)果:三組間血清白細(xì)胞介素6、腫瘤壞死因子α濃度差異呈現(xiàn)為腎陰虛組>腎陽(yáng)虛組>正常健康組,表明慢性腎炎均存在著不同程度的免疫功能紊亂。王立新等人發(fā)現(xiàn),腎陽(yáng)虛模型動(dòng)物的代謝網(wǎng)絡(luò)明顯偏離正常,而用溫陽(yáng)中藥干預(yù)后,模型動(dòng)物的代謝譜回歸至正常范圍,呈現(xiàn)網(wǎng)絡(luò)修復(fù)的結(jié)果。這都為病證結(jié)合模型評(píng)價(jià)標(biāo)準(zhǔn)的制定和完善提供了依據(jù)和研究方向。尋找中醫(yī)證候與疾病病理狀態(tài)關(guān)聯(lián)性大的檢測(cè)指標(biāo)目前多數(shù)病證結(jié)合模型的造模及評(píng)價(jià)方法將證候和疾病人為分開(kāi),兩套方法、兩種標(biāo)準(zhǔn)整合在同一動(dòng)物上。雖然這種評(píng)價(jià)方法現(xiàn)在是最常用的,也是有一定根據(jù)和理論支撐的,但是這種方法常常是證候指標(biāo)和病理指標(biāo)的簡(jiǎn)單相加,將病證結(jié)合模型中證候和疾病的關(guān)聯(lián)性忽視了。應(yīng)該重視病證的內(nèi)在聯(lián)系,充分利用各種研究手段,尋找中醫(yī)證候與疾病病理狀態(tài)關(guān)聯(lián)性大的指標(biāo)。在研究腎虛證與一些免疫系統(tǒng)疾病如類(lèi)風(fēng)濕性關(guān)節(jié)炎關(guān)系的過(guò)程中,有學(xué)者發(fā)現(xiàn)OPN(骨橋蛋白)是抗體誘導(dǎo)的關(guān)節(jié)炎發(fā)展過(guò)程中的關(guān)鍵分子之一,它參與類(lèi)風(fēng)濕關(guān)節(jié)炎、系統(tǒng)性紅斑狼瘡等多種自身免疫性疾病的發(fā)病機(jī)制,在骨質(zhì)代謝及免疫系統(tǒng)中起雙重作用,是溝通骨代謝和免疫之間的橋梁。腎臟為表達(dá)OPN的主要器官之一。腎虛證可以影響OPN的表達(dá),這也可能是腎虛證可以加重免疫疾病癥狀的原因,是病證內(nèi)在聯(lián)系的關(guān)鍵點(diǎn)。孫然等發(fā)現(xiàn)SLE中醫(yī)辨證分型與抗核抗體譜等免疫指標(biāo)之間的內(nèi)在聯(lián)系。4種證型間ANA