nadph氧化酶抑制劑apocynin對心肌梗死后心衰大鼠il-1、去甲腎上腺素及心功能的影響

nadph氧化酶抑制劑apocynin對心肌梗死后心衰大鼠il-1、去甲腎上腺素及心功能的影響

隨著心血管疾病發(fā)病率的增加和人口的老齡化，慢性心力衰竭（hf）的發(fā)病率逐漸增加，導(dǎo)致復(fù)發(fā)率和死亡率高。持續(xù)的交感神經(jīng)活動增強伴隨著心衰的發(fā)生發(fā)展,因此降低交感神經(jīng)興奮性成為心衰治療的關(guān)鍵之一。下丘腦室旁核(paraventricularnucleus,PVN)是調(diào)節(jié)心血管活動的重要中樞之一。心衰時,調(diào)節(jié)PVN區(qū)域神經(jīng)元活性可明顯改變外周交感神經(jīng)活動。近年來研究表明活性氧簇對包括心衰在內(nèi)的多種心血管疾病的發(fā)生發(fā)展起重要作用。最近的資料表明,心臟的損傷將通過交感神經(jīng)使下丘腦合成的TNF-α和IL-1β增加,而這類細胞因子含量的增加將反過來作用于心血管中樞,使交感活動增強。而且腦內(nèi)活性氧簇的增加主要是由NADPH氧化酶產(chǎn)生。然而腦內(nèi)氧化應(yīng)激調(diào)節(jié)交感神經(jīng)活動的機制還不清楚。因此本實驗觀察NADPH氧化酶抑制劑apocynin對心肌梗死后心衰大鼠IL-1β、去甲腎上腺素及心功能的影響,以探討腦內(nèi)氧化應(yīng)激在心力衰竭時交感神經(jīng)興奮的作用。1材料和方法1.1主試劑apocynin(APO)購自美國Sigma公司。1.2實驗動物成年健康雄性Sprague-Dawley(SD)大鼠24只,體重(250±30)g,西安交通大學(xué)醫(yī)學(xué)院實驗動物中心提供。1.3apo治療及人工瞳室插管大鼠隨機分為兩組,一組用于心衰模型的制備,另一組作假手術(shù)模型對照。結(jié)扎左冠狀動脈前降支制備心衰模型;假手術(shù)模型組只穿線不結(jié)扎。HF組和Sham組再隨機分為APO治療組和人工腦脊液(aCSF)組。每組術(shù)中均監(jiān)測標(biāo)準(zhǔn)Ⅱ?qū)碾妶D,出現(xiàn)ST段和/或T波抬高或降低,心臟局部顏色變白等變化作為結(jié)扎成功的標(biāo)志。大鼠自主呼吸恢復(fù)后,固定于腦立體定位儀上進行側(cè)腦室插管術(shù),并用硅膠管與埋置于頸背部皮下的微型滲透壓泵連接。微型滲透壓泵內(nèi)注入APO(DMSO稀釋,10μg/hr)或aCSF。術(shù)后即刻肌肉注射青霉素(5×104U)和丁丙諾啡(0.01mg/kg)。待大鼠蘇醒后入籠飼養(yǎng)。1.4腦立體定位及牙鉆固定大鼠經(jīng)10%水合氯醛(400mg/kg)腹腔麻醉冠脈結(jié)扎手術(shù)完畢,待自主呼吸恢復(fù)后,拔掉氣管插管,頭部固定于腦立體定位儀上,手術(shù)暴露顱骨,按照腦立體定位圖譜以前囟為基點,側(cè)腦室插管位置為:前囟后1.0mm、旁開1.5mm、深3.5mm。用牙科車鉆在顱骨相應(yīng)位置鉆孔,將連接滲透壓泵的無菌不銹鋼管(外徑0.5mm、內(nèi)徑0.26mm)插至坐標(biāo)位置,用502膠水和牙脫粉外固定。然后將滲透壓泵埋置于頸背部皮下。1.5大血管稱重剪開胸壁暴露心臟,立即剪取心臟放入冷肝素生理鹽水中以沖洗血液,將心臟在濾紙上瀝干,用眼科剪去除大血管稱重,與體重相除計算全心/體重比(Heart/BW)。肺組織完整取下后用濾紙吸干表面血液并稱重,與體重相除計算肺/體重比(Lung/BW)。1.6酶聯(lián)免疫吸附試驗elisa采用通用型大鼠IL-1βELISA試劑盒(美國R&D公司)檢測大鼠PVN區(qū)和血漿IL-1β的含量。檢測按照試劑盒說明書操作。1.7流動相的強化流動相由83%0.1mol/L枸櫞酸鹽-醋酸鹽緩沖液(pH3.9),17%的甲醇,140mg/L的辛烷磺酸鹽,5mg/L乙二胺四乙酸(EDTA)-2Na組成。用Lachrom系統(tǒng)將流動相以230μl/min的速度進行抽吸,用Eicom-pakSC-5ODS進行離析。電子化學(xué)探測器(GasketGS-25)是由750mV下玻璃碳Ag/AgCl電極組成,用eDAQPowerchrom280軟件來進行信號記錄。1.8統(tǒng)計處理數(shù)據(jù)以均數(shù)±標(biāo)準(zhǔn)差表示,組間比較采用方差分析,應(yīng)用SPSS13.0統(tǒng)計軟件進行分析處理。P<0.05示差異有統(tǒng)計學(xué)意義。2結(jié)果2.1對肺/體重、ham+acsf的模型評價心力衰竭模型組(HF+aCSF組或HF+APO組)與假手術(shù)組(Sham+aCSF組或Sham+aCSF組)相比,全心/體重比(WH/BW)和肺/體重比(LW/BW)明顯增加(P<0.05),模型給藥組(HF+APO)與模型對照組(HF+aCSF)相比,WH/BW和LW/BW降低(P<0.05)。2.2室旁核il-1含量模型組(HF+aCSF組或HF+APO組)與假手術(shù)組(Sham+aCSF組或Sham+aCSF組)相比,室旁核IL-1β含量明顯增加(P<0.05);模型給藥組(HF+APO)與模型對照組(HF+aCSF)相比,室旁核IL-1β含量不具有統(tǒng)計學(xué)意義。2.3不同acsf組血漿il-1含量情況模型組(HF+aCSF組或HF+APO組)與假手術(shù)組(Sham+aCSF組或Sham+aCSF組)相比,血漿IL-1β含量明顯增加(P<0.05);模型給藥組(HF+APO)與模型對照組(HF+aCSF)相比,血漿IL-1β含量有所降低(P<0.05)。2.4各組血漿n的水平比較模型組(HF+aCSF組或HF+APO組)與假手術(shù)組(Sham+aCSF組或Sham+aCSF組)相比,血漿NE水平明顯增加(P<0.05);模型給藥組(HF+APO)與模型對照組(HF+aCSF)相比,血漿NE含量有所降低(P<0.05)。3apo對室旁核活性細胞因子的影響本實驗發(fā)現(xiàn)心衰大鼠下丘腦室旁核和外周血IL-1β蛋白表達增多,外周血去甲腎上腺素增加,伴有交感神經(jīng)活動增強;大鼠側(cè)腦室長期給予NADPH氧化酶抑制劑APO后可降低外周血IL-1β蛋白的表達和去甲腎上腺素的含量,交感神經(jīng)活動減弱;這一結(jié)果說明室旁核活性氧簇與心衰時交感神經(jīng)的過度興奮有關(guān),對心血管功能具有重要的調(diào)節(jié)作用。心衰時室旁核內(nèi)活性氧簇激活是心衰時交感神經(jīng)激活的重要因素。中樞神經(jīng)系統(tǒng)在心衰發(fā)病過程中起到了重要作用,心衰時炎性細胞因子(主要包括TNF-α、IL-1β和IL-6)不但在外周組織中水平升高,其在中樞的含量也明顯增加。炎性細胞因子的過量表達,也可作用于心血管中樞,使交感活動增強。我們前期研究結(jié)果表明側(cè)腦室給予炎性細胞因子合成抑制劑(己酮可可堿)后,可抑制心肌梗死,降低下丘腦室旁核、心肌組織、血漿中炎性細胞因子水平、活性氧簇及交感神經(jīng)興奮性。但本實驗結(jié)果表明給予APO后對室