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內(nèi)吞抑制劑阻止PAMAMDendrimer內(nèi)化和滲透進Caco-2細胞內(nèi)KellyM.Kitchens,RohitB.Kolhatkar,PeterW.Swaan,andHamidrezaGhandehari*MOLECULARPHARMACEUTICSVOL.5,NO.2,364–369背景介紹治療劑和診斷用藥固定藥物，酶，靶向制劑和其他有生物活性的制劑顯影劑最初的機制研究證明陽離子PAMAMdendrimers是通過細胞旁路和吸附胞飲的作用進行運輸。我們實驗室隨后的研究證明了，在Caco-2中陽離子和陰離子的PAMAMdendrimers與標記的內(nèi)體和溶酶體共區(qū)域化，從初級內(nèi)體到次級內(nèi)體和溶酶體的細胞內(nèi)交換有依賴時間和表面電荷依賴性。PAMAMDendrimer實驗部分---材料G4NH2溶液TritonX-100(聚乙二醇辛基苯基醚一種非離子型表面活性劑（或稱去污劑）hank’s平衡鹽溶液（HBSS）肝素鈉[3H]-醋酸酐[3H]-核黃素Caco-2細胞細胞培養(yǎng)試劑WST-1細胞增殖試劑BCA蛋白檢測試劑盒實驗部分---放射性G4NH2的制備在有過量三乙胺的情況下，G4NH2與[3H]標記的無水乙酸(5mCi/mmolofthepolymer)反應(yīng)。G4NH2（0.100g,0.03mmol）用純甲醇（10ml）溶解，然后添加[3H]-醋酸酐(5mCi/mmol)(0.062g,0.61mmol)和三乙胺(0.12g,1.2mmol)。溶解室溫攪拌12h，然后揮發(fā)掉甲醇獲得粗乙?；腉4NH2。粗產(chǎn)物再溶解于水中，用1000截留分子量的透析膜對蒸餾水透析。使用PD-10柱排阻色譜小分子量雜質(zhì)不能被檢測到。被標記的G4NH2的放射性比率在2-3毫居里/毫摩爾。實驗部分---Caco-2細胞培養(yǎng)

25μg/ml的兩性霉素DMEM10%的胎牛血清1%的非必需氨基酸10000單位/ml的青霉素10000μg/ml的鏈霉素37℃5%CO2濕度95%每兩天換液長到70-90%用0.25%的胰蛋白酶-EDTA溶液傳代轉(zhuǎn)運介質(zhì)由HBSS輔以10mM的HEPES緩沖液（pH值7.4）實驗部分---PAMAMDendrimer對增殖期細胞的毒性

30000cells/well→96孔板→細胞培養(yǎng)條件48h54321細胞用轉(zhuǎn)運介質(zhì)HBSS洗兩次用100μL(1-10μM)的G4NH2進行培養(yǎng)細胞用HBSS洗三次移去G4NH2，并用100μL的HBSS替換每個小孔添加10μL細胞增殖試劑WT

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