氣相色譜質(zhì)譜-氣相色譜法測(cè)定姜、白術(shù)揮發(fā)油及包合物中天然冬蟲夏草的含量

氣相色譜質(zhì)譜-氣相色譜法測(cè)定姜、白術(shù)揮發(fā)油及包合物中天然冬蟲夏草的含量

柴油又稱油油或芳香油，通常存在于植物的油腺和皮脂腺中，一些溶解在樹脂中，并充滿于植物體的空腔中。揮發(fā)油常由各種不同的天然化學(xué)物質(zhì)組成,如萜類、芳香類和脂肪酸類等,具有抗菌、抗病毒、提高機(jī)體免疫功能等作用,主要存在于唇形科、蕓香科、桃金娘科、姜科、菊科、樟科、傘科等植物中。干姜為姜科植物ZingiberofficinaleRosc.的根莖,氣香,味辛辣,性熱。能溫中散寒,回陽(yáng)通脈,燥濕消痰。其揮發(fā)油的主要成分為莰烯、β-水芹烯和桉葉素等。白術(shù)為菊科植物白術(shù)AtractylodesmacrocephalaKoidz.的干燥根莖,性溫,味苦、甘。健脾益氣,燥濕利水。其揮發(fā)油的主要成分為蒼術(shù)酮等。筆者將附子理中丸研制成中藥緩釋片劑,該方中干姜和白術(shù)揮發(fā)油按前文報(bào)道的工藝提取,通過天然冰片的含量測(cè)定對(duì)揮發(fā)油的質(zhì)量進(jìn)行控制。1氣質(zhì)聯(lián)用儀、差示量熱儀器干姜和白術(shù)購(gòu)自沈陽(yáng)市天益堂藥店,符合《中華人民共和國(guó)藥典》2000年版的要求。GCMS-QP5050A氣質(zhì)聯(lián)用儀、GC-17A氣相色譜儀和DSC-60型差示量熱掃描儀均為日本島津生產(chǎn);冰片(云南三木有限公司思茅香料廠),β-環(huán)糊精(天津市化學(xué)試劑公司)為實(shí)驗(yàn)所需,其它試劑均為分析純。2方法和結(jié)果2.1從術(shù)中提取揮發(fā)油根據(jù)2000年版《中華人民共和國(guó)藥典》(一部)中附子理中丸項(xiàng)下干姜和白術(shù)的處方量,稱取白術(shù)1000g,干姜667g,適當(dāng)粉碎后,混勻,加水淹沒過,浸泡1h,倒入10000ml的長(zhǎng)頸圓底燒瓶?jī)?nèi),再加6倍量的水,裝上冷凝裝置,電熱套加熱進(jìn)行回流提取揮發(fā)油,時(shí)間為沸騰后提取6h,最后得到淡黃色的干姜和白術(shù)揮發(fā)油。2.2峰面積歸一化法計(jì)算的各個(gè)環(huán)節(jié)根據(jù)文獻(xiàn)報(bào)道,混合揮發(fā)油經(jīng)氣相色譜-質(zhì)譜(GC-MS)測(cè)試和圖譜驗(yàn)證,選定峰面積大、清晰度高的13個(gè)峰,鑒定了峰面積歸一化法計(jì)算出的相對(duì)百分含量居前的前6個(gè)成分,依次為β-水芹烯(β-phellandrene)、桉葉素(eucalyptol)、蒼術(shù)酮(atractylon)、冰片(borneol)、姜烯(zingiberene)和牛兒醛(geranial),見圖1、圖2。冰片為第6號(hào)離子峰。2.3天然婆羅洲的含量在燃燒過程中2.3.1peg-20m因揮發(fā)油中含有天然冰片,所以采用氣相色譜測(cè)定冰片的含量。具體條件如下:柱為10%PEG-20M,Φ2.6mm×2.0m;柱溫150℃,氣化室溫度200℃,FID檢測(cè)器溫度200℃,載氣為氮?dú)?氮?dú)鈮?.0kg/cm2,流速53ml/min。2.3.2標(biāo)準(zhǔn)曲線的制作精密稱取冰片標(biāo)準(zhǔn)品0.25g,用無水乙醇溶于25ml的容量瓶中,再分別吸取0.5、1.5、2.5、3.5、5.0ml,用無水乙醇溶于5ml的容量瓶中,配制成濃度為1.0、3.0、5.0、7.0、10.0mg/ml的標(biāo)準(zhǔn)溶液,進(jìn)樣1μl,按氣相色譜條件進(jìn)行操作。以冰片的濃度(C)為橫坐標(biāo),龍腦和異龍腦的總峰高(△H)為縱坐標(biāo)進(jìn)行線性回歸,回歸方程為:H=111463C+17306r=0.9997在1.0～10.0mg/ml的范圍內(nèi),濃度與總峰高呈良好的線性關(guān)系。2.3.3揮發(fā)油含量的測(cè)定精密稱取3批揮發(fā)油樣品0.25g,用無水乙醇溶于5ml的容量瓶中,配制成濃度為50mg/ml,進(jìn)樣1μl,按氣相色譜條件進(jìn)行操作,將所得的總峰高帶入標(biāo)準(zhǔn)曲線,由求得的濃度得出3批揮發(fā)油中天然冰片的含量分別為6.3%、11.6%和12.6%。冰片標(biāo)準(zhǔn)品與揮發(fā)油樣品中天然冰片的色譜圖見圖3、圖4。2.4油包裝材料的制備2.4.1最佳工藝的確定根據(jù)文獻(xiàn),通過對(duì)飽和溶液法和研磨法的優(yōu)化篩選,結(jié)合工業(yè)上的特點(diǎn),選擇最佳工藝為75%的乙醇混合β-CD((2∶1,V/W),滴入用無水乙醇稀釋的揮發(fā)油溶液(1∶1,V/V),β-CD與揮發(fā)油配比為6∶1(W/V),邊滴邊研磨,滴完后,再研磨30min,40℃下干燥,即可。2.4.2回汁添加量為5.將揮發(fā)油β-CD包合物通過做DSC圖譜與淀粉、β-CD及其混合物的DSC圖譜比較,結(jié)果見圖5。從圖5可知,β-環(huán)糊精和淀粉的DSC圖(a與e)不同,但它們二者與揮發(fā)油混合物的DSC圖(c與d)在大于120℃處都有一個(gè)尖峰出現(xiàn),說明此尖峰是揮發(fā)油自身的DSC圖譜峰,當(dāng)形成包合物后,尖峰消失(見b),確證β-環(huán)糊精與揮發(fā)油的包合物已經(jīng)產(chǎn)生。2.4.3揮發(fā)油-cd包合物所含天然晶片的制備稱取3份揮發(fā)油各0.18g,制得3批揮發(fā)油β-CD包合物后,采取水蒸氣蒸餾方法獲得的揮發(fā)油分別收集于3個(gè)10ml容量瓶?jī)?nèi),無水乙醇定容,按上述氣相條件操作,由標(biāo)準(zhǔn)曲線得揮發(fā)油β-CD包合物所含天然冰片分別為5.8、5.7、5.0mg。2.4.4揮發(fā)油-cd包合物含量的測(cè)定稱取2.4.3項(xiàng)下的3份揮發(fā)油,按上述氣相色譜條件測(cè)出其中所含的天然冰片的含量,則揮發(fā)油β-CD包合物所含天然冰片的含量于揮發(fā)油中所含天然冰片含量的比,即為β-CD包含物中揮發(fā)油的包合率,結(jié)果平均包合率為93.4%。3貯藏過程監(jiān)控問題3.1因?yàn)樘烊槐升埬X和異龍腦組成,所以本文天然冰片的含量測(cè)定以龍腦與異龍腦的總和進(jìn)行計(jì)算。從上述揮發(fā)油中的天然冰片所測(cè)的含量可知,干姜和白術(shù)揮發(fā)油中天然冰片含量較高,但每一批冰片所含的量差別較大,這主要與藥材的采收時(shí)間、產(chǎn)地、貯存時(shí)間、保留水分的多少等有關(guān)。隨著GAP標(biāo)準(zhǔn)的廣泛執(zhí)行和藥材質(zhì)量的進(jìn)一步監(jiān)控,這些問題最終將會(huì)得到很好的解決。3.2冰片的標(biāo)準(zhǔn)曲線采用龍腦與異龍腦的總高度作為縱坐標(biāo),是因?yàn)辇埬X與異龍腦的峰面積值太大,所得的標(biāo)準(zhǔn)曲線誤差會(huì)大些。而龍腦與異龍腦的總高度數(shù)值相對(duì)較小,其與藥物濃度所得的標(biāo)準(zhǔn)曲線準(zhǔn)確度則會(huì)相應(yīng)提高。3.3揮發(fā)油的包合使得揮發(fā)油從液態(tài)轉(zhuǎn)為固態(tài),提高了揮