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人臍靜脈內(nèi)皮細(xì)胞（HUVEC）分離培養(yǎng)儀器試劑和操作

步驟溶液以及器材：1、 用RPMI-1640配I型膠原酶0.1g/100ml2、 配三抗:青霉素：100ku/L鏈霉素：100ku/L慶大霉素：100ku/L3、 培養(yǎng)液（M199+ECGS[3ug/ml]+15%胎牛血清）有EGF可以適當(dāng)加點(diǎn)10ng/ml4、 大瓶生理鹽水5、 廣口瓶（臍帶數(shù)+1）6、 止血鉗（臍帶數(shù)X2+2）7、 大針頭數(shù)個(gè)（用于吸取生理鹽水，膠原酶）8、手術(shù)剪刀數(shù)把使用前器械高溫蒸氣滅菌。實(shí)驗(yàn)步驟：1、 去婦產(chǎn)科取當(dāng)天新鮮臍帶（廣口瓶；生理鹽水），試驗(yàn)前放入4度冰箱。2、 辨別臍帶靜脈（粗大的那根），順著靜脈瓣插入大針頭，注入生理鹽水，充分沖洗臍靜脈，至流出液體中無(wú)可見血液。3、 夾住臍帶下端，從上端灌注0.1%的膠原酶，鉗住臍靜脈上端，37度孵育15分鐘（已經(jīng)足夠）；如果消化液中出現(xiàn)絮狀物，說(shuō)明消化時(shí)間過(guò)長(zhǎng)。4、 收集消化液，并用含小牛血清的RPMI-1640沖洗臍靜脈，沖洗液并入消化液中。1000-1500轉(zhuǎn)離心10分鐘。5、 將細(xì)胞懸浮于培養(yǎng)液中（一根臍帶一般可以一個(gè)培養(yǎng)瓶，如果細(xì)胞少就六孔板一個(gè)孔），細(xì)胞不能太稀疏，否則生長(zhǎng)緩慢。6、 正常情況下三天長(zhǎng)滿傳代，正常的內(nèi)皮細(xì)胞長(zhǎng)滿后如同卵石狀，見下圖?！咀⒁馐马?xiàng)】大家在用藥的時(shí)候，藥物說(shuō)明書里面有三種標(biāo)識(shí)，一般要注意一下：第一種就是禁用，就是絕對(duì)禁止使用。第二種就是慎用，就是藥物可以使用，但是要密切關(guān)注患者口服藥以后的情況，一旦有不良反應(yīng)發(fā)生，需要馬上停止使用。第三種就是忌用，就是說(shuō)明藥物在此類人群中有明確的不良反應(yīng)，應(yīng)該是由醫(yī)生根據(jù)病情給出用藥建議。如果一定需要這種藥物，就可以聯(lián)合其他的能減輕不良反留意注意事項(xiàng)，應(yīng)的藥物一起服用。大家以后在服用藥物的

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