Ⅰ型糖尿病自身抗體檢測

Ⅰ型糖尿病自身抗體檢測

糖尿病的分型診斷的進(jìn)展1979年WHO提出了原發(fā)性臨床糖尿病分為胰島素依賴型和非胰島素依賴型，依賴型與非依賴型的區(qū)別主要依據(jù)胰島素β細(xì)胞功能受損的程度，臨床上是否依賴胰島素而言，并不反映其發(fā)病本質(zhì)1997年WHO建議取消依賴型與非依賴型，改為1、2型。1、2型的區(qū)別要看病因是否由胰島β細(xì)胞自身免疫破壞造成，1型與2型是完全不同的兩類疾病，但2型非依賴型可發(fā)展成1型胰島素依賴型，成人緩慢進(jìn)展型就經(jīng)歷了這個(gè)過程。WHO（1997年）建議的糖尿病

分型方案

1型糖尿?。═1DM）胰島β細(xì)胞破壞導(dǎo)致胰島素絕對缺乏：A.免疫型；B.特發(fā)型2型糖尿病（T2DM）胰島素抵抗為主體的胰島素相對缺乏，或胰島素分泌受損為主體的胰島素抵抗其他特殊類型糖尿病妊娠期糖尿病

1型糖尿病的流行病學(xué)主要見于15歲以前的兒童和未成年人；亞洲及我國發(fā)病率相對較低（我國兒童中的發(fā)病率為0.59/10萬每年，全國T1DM的總數(shù)至少200-400萬）各國的1型糖尿病較以前有逐年增加趨勢；不少地區(qū)的1型糖尿病的發(fā)病率與季節(jié)有關(guān)1型糖尿病的發(fā)病機(jī)制

遺傳易感性環(huán)境因素感染、飲食、地理、氣候

β細(xì)胞自身免疫損傷

β細(xì)胞破壞、功能損害胰島素分泌缺乏

1型糖尿病的病程β細(xì)胞量1型糖尿病的病程遺傳易感性環(huán)境因素胰島素正常自身抗體陽性血糖正常胰島素↓血糖正常應(yīng)激血糖↑胰島素↓↓血糖↑80%β細(xì)胞破壞胰島素缺乏臨床糖尿病1型糖尿病和2型糖尿病的比較

T1DMT2DM

起病急進(jìn)行性內(nèi)源性Ins低或缺乏正常，升高或降低酮癥常見少見發(fā)病年齡各年齡段絕大多數(shù)為成人體重通常非肥胖肥胖或非肥胖治療Ins飲食，口服降糖藥，Ins

家族史10-15%30%

孿生子發(fā)病一致率30-50%70-90%HLA相關(guān)HLA-DR,HLA-DQ無關(guān)自身抗體多見（>85%)少見1型糖尿病和2型糖尿病的區(qū)分一般<30歲，起病急，中到重度癥狀明顯體重下降，消瘦，尿酮或DKA空腹或餐后C肽低下免疫標(biāo)記物(GADA,ICA,IA-2)

是否

T1DM

T2DM免疫介導(dǎo)型1型糖尿病亞型的特征急性發(fā)病型緩慢發(fā)病型（LADA)患病率（%）約80%約20%性別男女相近男略多于女起病年齡多為兒童青少年多為成年人，一般>30歲起病方式急，有者以酮癥酸中毒（DKA）發(fā)病酷似非肥胖T2DM，多在病后3年內(nèi)發(fā)生DKA糖耐量減低發(fā)病時(shí)嚴(yán)重?cái)?shù)年后顯著或嚴(yán)重伴其他自身免疫病常無可有（Addison，惡性貧血，重癥肌無力等）依賴Ins治療發(fā)病后即依賴初期對飲食和/或口服降糖藥有效隨后依賴胰島β細(xì)胞功能發(fā)病后即嚴(yán)重受損，血中C肽水平低或側(cè)不出發(fā)病時(shí)尚有殘存功能，數(shù)年后同急性型β細(xì)胞自身抗體起病時(shí)急劇升高，發(fā)病后下降，數(shù)年后可陰轉(zhuǎn)低水平持續(xù)陽性，有人超越10年抗胰島細(xì)胞抗體(ICA)

1974年Bottazzo采用間接免疫熒光法在胰島素依賴性糖尿病患者血清中首次檢測到抗胰島細(xì)胞抗體（isletcellautoantibodies,ICA）。ICA是針對胰島細(xì)胞內(nèi)多種抗原的一組抗體,其靶抗原至今尚未完全闡明。與糖尿病相關(guān)的自身抗原不僅在β細(xì)胞表達(dá)，這些抗原的組織分布可分為：

(1)β細(xì)胞特異的，如胰島素；

(2)胰島細(xì)胞特異的；

(3)神經(jīng)內(nèi)分泌特異的，如分子量為65kD的谷氨酸脫羧酶（GAD65kD）、ICA512、神經(jīng)節(jié)苷脂（ganglioside）、腦硫脂（sulfatides）等；

(4)較廣泛的分布，如HSP62等。目前所知的ICA主要抗原的是谷氨酸脫羧酶（GAD）和酪氨酸磷酸酶（IA2）檢測方法：間接免疫熒光法組織化學(xué)染色法免疫沉淀化學(xué)法

ELISA法

目前ICA的檢測方法主要是以猴胰腺為基質(zhì)的間接免疫熒光法，但易受組織的固定方法的影響?？挂葝u細(xì)胞抗體與胰腺的內(nèi)分泌部位反應(yīng)，可見所有胰島細(xì)胞胞漿呈現(xiàn)均質(zhì)到顆粒型熒光。檢測方法的標(biāo)化：

1983年瑞典的Ludvigsson為一名1型糖尿病新發(fā)病者做了血漿置換,這份血漿在青少年糖尿病基金會(FDA)組織的ICAs定標(biāo)實(shí)驗(yàn)中,在參加這項(xiàng)工作的所有實(shí)驗(yàn)室檢測時(shí)均為ICAs陽性,于是用這份血樣定出了ICAs的JDF單位,并逐漸成為國際上較為通用的單位。敏感度81%(44%～100%)，特異度96%(64%～100%)特異度較GADA和IA2A差I(lǐng)CA可作為早期預(yù)測指標(biāo)能早于T1DM發(fā)病8年前被檢測出高滴度的ICA（大于20-40JDF單位）預(yù)示疾病進(jìn)展的高危險(xiǎn)性。大部分T1DM病人的ICAs在發(fā)病2年后消失，ICA持續(xù)陽性超過2~3年者，僅占T1DM的10%。ICA滴度的持續(xù)高水平通常與β細(xì)胞的損傷有關(guān)，ICA的水平與C肽水平呈負(fù)相關(guān)。ICA和其他胰島自身抗體（如GAD或IAA）同時(shí)陽性對疾病更有診斷價(jià)值，這類病人發(fā)生T1DM的危險(xiǎn)性是僅ICA陽性的病人的3-5倍。ICA在不同人群中的陽性率

ICA的檢測對1型糖尿病有很好的預(yù)測價(jià)值

人群陽性率（%）健康對照組0.1-0.2T1DM患者直系親屬2-5新近診斷的T1DM患者60-80T2DM患者5-7谷氨酸脫羧酶抗體(GAD-Ab)谷氨酸脫羧酶γ氨基丁酸（GABA）的合成酶表達(dá)于人腦及胰島中均有，主要位于細(xì)胞漿中具有抑制生長抑素和胰高糖素分泌的作用，并可調(diào)節(jié)胰島素的分泌和胰島素原的合成1990年，Beakkeskov首次證明GAD是1型糖尿病的自身抗原GAD分子存在65kD和67kD兩種形式，兩者在氨基酸水平上有65%的同源性和80%的相似性，免疫源性也基本相同，目前認(rèn)為T1DM中抗GAD65抗體更常見檢測方法：免疫沉淀酶活性法放射免疫法

ELISA法間接免疫熒光法化學(xué)發(fā)光法最常用的GAD-Ab的檢測方法是ELISA法和放免法。放免法由于存在放射性污染目前已逐漸被ELISA法替代ELISA法采用親和素和生物素?cái)U(kuò)大級聯(lián)反應(yīng)增強(qiáng)了檢測的敏感性GAD檢測方法的評價(jià)GAD自身抗體:41個(gè)實(shí)驗(yàn)室測定了血清GADab,其中多數(shù)運(yùn)用重組人GAD的RIA法,其調(diào)整敏感性是0～91%(平均81%)。ELISA法與RIAs法比較,有較好效果,其調(diào)整敏感性77%,雙管測定的陽性或陰性一致性為100%。在125例血清RIA法的陽性率為22.4%，ELISA的陽性率為26.4%，兩者的顯著相關(guān)（P=0.025)。均與ICA顯著相關(guān)P值分別為0和0.01。說明ELISA法可以替代RIA法做為1型糖尿病自身抗體篩選的有效手段。（RIA試劑——?dú)W蒙公司；ELISA試劑——美國BLOMERICA公司）GAD在T1DM發(fā)病機(jī)理中的作用

分子模擬(molecularmimicry)機(jī)制致病學(xué)說：病毒蛋白如柯薩奇B病毒p2C蛋白肽段,胰島β細(xì)胞抗原分子谷氨酸脫羧酶(GAD)的部分肽段序列相似,前者(外源性蛋白多肽)在誘導(dǎo)機(jī)體產(chǎn)生免疫的同時(shí),亦可能誘發(fā)針對自身胰島β細(xì)胞的攻擊，導(dǎo)致β細(xì)胞的損傷。GAD-Ab具有與β細(xì)胞緩慢損傷相關(guān)性好、出現(xiàn)早、持續(xù)時(shí)間長、年齡跨度大、陽性率高、檢測易標(biāo)準(zhǔn)化等特點(diǎn)，是目前公認(rèn)的診斷LADA及預(yù)測胰島功能的免疫學(xué)指標(biāo)GAD-Ab可于發(fā)病前10年測出，且在此期間呈高低度持續(xù)存在，約80%新發(fā)患者血清中GAD陽性且水平較穩(wěn)定，病程10年以上仍存在高滴度GAD抗體。GAD的臨床應(yīng)用GAD抗體在大多數(shù)T1DM患者中陽性，且陽性率不隨病程延長而下降。

實(shí)驗(yàn)顯示新診斷的患兒中GAD抗體陽性率為74%，長病程者為67%，而他們的ICA陽性率分別為64%和14%。如在初發(fā)T1DM患者中查到GAD抗體有助于排除T2DM，以助于DM診斷分型并指導(dǎo)治療。在T1DM一級親屬（高危人群），33.3%的GADA陽性者可能患TIDM。

TIDM一級親屬中GAD抗體陽性率為15%左右，其中1/3在6~18個(gè)月后發(fā)展為T1DM。GADA在僵人綜合征（SMS）中的陽性率為100%,此外還見于與T1DM相關(guān)的多腺體自身免疫綜合征。GAD在不同人群中的陽性率

人群陽性率（%）

健康對照組0.3-0.6T1DM患者直系親屬3-4

其他的自身免疫性內(nèi)分泌疾病患者1-2

新近診斷的T1DM患者55-85T2DM患者10-15

妊娠糖尿病10抗酪氨酸磷酸酶抗體(ICA512/IA2ab)ICA512/IA2是利用1型糖尿病患者或其前期病人的血清免疫篩選胰島細(xì)胞的cDNA文庫得到的一個(gè)新的β細(xì)胞自身抗原。其氨基酸序列與T淋巴細(xì)胞蛋白酪氨酸磷酸酶(PTP)CD45相似，而堿基序列與人胰島素瘤克隆的cDNA(IA2)相近。Northern印跡示ICA512/IA2在胰島、腦和垂體中均有表達(dá)。Rabi