臨床生化干擾實驗批準指南介紹ep7-A

臨床生化干擾試驗批準指南介紹

(EP7-A)前言NCCLS:（美國）國家臨床實驗室標準化委員會（Nationalcommitteeforclinicallaboratory）。NCCLS是一個國際性的、各學科間的、非盈利性的標準制定組織。NCCLS已經(jīng)得到全球廣泛的認可。NCCLS現(xiàn)已更名為CLSI：臨床實驗室標準化協(xié)會（ClinicalandLaboratoryStandardsInstitute

）

前言NCCLS文件以標準、指南或委員會報告的形式發(fā)表

標準：通過一致化過程形成的文件，并對材料、方法、或?qū)嵺`以不能修改方式明確規(guī)定其特定的基本要求。

指南：通過一致化過程形成的文件，描述某個一般性操作慣例、程序或材料的標準，供用戶自愿使用。使用指南時，可由用戶根據(jù)其特定需要草擬或進行修改。

報告：未經(jīng)過一致化審定過程的文件，由理事會發(fā)布。

迄今為止，NCCLS為臨床實驗室已提供超過160份標準和指南，涉及到當今檢驗醫(yī)學發(fā)展的方方面面。干擾物是臨床實驗室檢測誤差的一個很重要的來源，它們在某種程度上對病人來說是一種危害。常規(guī)工作中精密度通過室內(nèi)質(zhì)控監(jiān)控，準確性通過與參考物質(zhì)作比較進行驗證，但實驗室不能很容易的檢測干擾物質(zhì)引起的誤差。因此，IVD廠商在試驗設計階段就應考慮到潛在的干擾物。目的

為臨床生化檢驗結(jié)果中研究、鑒別和確定干擾物質(zhì)效應提供背景信息、指導和實驗程序。

專門為廠商和臨床實驗室制訂

作用

對廠商來說，通過EP7程序可以篩選潛在干擾物質(zhì)，量化干擾效應，證實病人樣本中的干擾，確認分析方法對干擾物質(zhì)的敏感性，評估潛在的風險，并將有意義的干擾聲明提供給用戶。對于臨床實驗室來說，通過EP7的調(diào)查策略，規(guī)定數(shù)據(jù)收集和分析要求，確認干擾聲明，研究明確的干擾物質(zhì)帶來的結(jié)果差異，確保分析方法符合臨床要求。主要內(nèi)容適用范圍干擾的影響及機理干擾實驗的判斷標準干擾分析前的質(zhì)量保證干擾的評估用病人標本評價干擾

建立、確認和驗證干擾聲明調(diào)查分析與臨床不一致的病人結(jié)果總結(jié)適用范圍1.分析方法

任何分析方法，不論定性或是定量，都受干擾物的影響。本指南適用大部分分析方法和儀器，特殊方法可能需要必要的調(diào)整，如分離技術(shù)和免疫學分析方法在附錄A中討論。2.樣本類型血清、血漿、全血、腦脊液、尿和其它大多數(shù)體液等標本類型都可用本指南評估。3.干擾物質(zhì)

潛在的干擾物質(zhì)可能由內(nèi)在或外在的引起。病理情況下的代謝物，如膽紅素、脂肪、蛋白質(zhì)、血紅蛋白等；病人治療期間引入的物質(zhì)，如藥物、腸外營養(yǎng)、血漿代用品、抗凝劑等；病人吸收的物質(zhì)，如藥品濫用、營養(yǎng)補充等；標本準備引入的物質(zhì)，如抗凝劑、防腐劑等；標本處理過程中引入的污染物，如手霜、滑石粉、促凝劑等；標本自身的基質(zhì)效應，其理化性質(zhì)跟理想的新鮮標本不同。適用范圍干擾對不準確度的影響

不準確度（總分析誤差）包括不精密度、方法特異性偏倚和樣本特異性偏倚（干擾）。方法評估常常只評估前兩種。干擾物質(zhì)的敏感性可以引起系統(tǒng)誤差和隨機誤差，在統(tǒng)計學上這兩者都被看作是不準確度的組成成分（總分析誤差）。對于給定的病人群體，干擾物在樣本中的平均濃度可能引起系統(tǒng)偏倚，這個偏倚將會被包括在估計的方法偏倚之內(nèi)。對于個別病人，干擾物引起的偏倚取決于病人樣本中的干擾物濃度，當干擾物濃度改變這個偏倚也隨著改變。例如，由于干擾物質(zhì)在體內(nèi)的清除和代謝，結(jié)果的改變可能會被認為病人情況的改變。干擾的機理

1．物理作用干擾物具有的物理性質(zhì)，使它和分析物一樣被檢測和測定出來。如它的顏色、光散射（光吸收）、洗脫位置、電極響應等。干擾物可能會改變標本的物理特性：如表面張力、粘度、濁度、離子強度等，干擾檢測結(jié)果。

2．化學作用干擾物可能會影響酶活力，例如：阻止金屬激活劑結(jié)合到活性中心上去，氧化必須的巰基等；干擾物也可破壞或阻止反應，例如：破壞試劑或抑止指示反應。干擾物也可改變分析物的形式，例如：形成復合物或沉淀。干擾的機理

3.非特異性干擾物可能和分析物以同樣的方式參與反應，例如：苦味酸肌酐方法中酮酸干擾，重氮膽紅素方法中吲哚酚硫酸鹽的干擾。在免疫化學方法中干擾物可能和抗體發(fā)生交叉反應。例如：茶堿方法中咖啡因的干擾。干擾物可能催化某一反應，反應結(jié)果中和了底物。例如：腺苷激酶可在CK反應中消耗底物ADP。4.基質(zhì)效應干擾物可改變樣品基質(zhì)的物理特性，如粘度、表面張力、濁度或離子強度等，從而改變被測量濃度。干擾的機理

5.水取代作用非水物質(zhì)（蛋白、脂質(zhì)），由于取代了血漿中部分水體積，影響了一些分析物的測定。這些作用考慮或不考慮為干擾作用，取決于要求的結(jié)果是以總體積的濃度表示，還是以血漿水的濃度來表示。臨床要求較之分析原理更重要，須確定是否考慮取代作用是一個干擾，例如：用火焰光度法或間接電位法作Na+測定時，高脂血癥被考慮為是一種干擾。因為Na+在血漿水中的濃度在臨床上有重要意義。

6.酶抑制作用干擾物可與金屬激活因子形成螯合物、與催化位點結(jié)合、氧化必需巰基基團而改變被測量或試劑中酶的活性。干擾實驗的判斷標準

為保證客觀性，可接受標準必須在評價實驗操作之前就確定。建立可接受標準時，必須考慮臨床意義和統(tǒng)計學意義兩者之間的差別。1.臨床可接受標準基于生理變異的標準源于臨床經(jīng)驗的標準基于被分析物變異的標準2.統(tǒng)計學意義和檢驗效能在確定一個物質(zhì)是否存在干擾前，首先確定所得到的結(jié)果是否有統(tǒng)計學意義。3.分析物檢測濃度干擾應該在兩種醫(yī)學決定濃度被評估，如果在一種濃度上進行測試，要注意有可能漏過在其他分析物濃度水平上有臨床意義的干擾。干擾實驗的判斷標準

4.干擾物檢測濃度決定一種物質(zhì)在“最壞情況”的條件下是否會產(chǎn)生干擾，干擾篩選應該在實驗室期望觀察到的最高濃度水平的病人樣本中進行。5.潛在的干擾物質(zhì)基于分析方法的預期用途，考慮可能出現(xiàn)在患者標本中的潛在干擾物質(zhì)。干擾實驗的判斷標準

干擾分析前的質(zhì)量保證在進行一個干擾實驗之前，必須進行：熟悉儀器設備和測量程序精密度確認--EP5《臨床生化設備性能的精密度評價》準確度確認--EP9《利用病人樣本進行方法學比較和偏倚評估》攜帶污染評價質(zhì)量控制--C24《內(nèi)部質(zhì)量控制實驗：原理和定義》標準化防范—M29《實驗室工作人員避免職業(yè)感染》安全性和廢物處置--參照廠商的標簽和材料安全數(shù)據(jù)表（MSDS）干擾的評估兩種評估干擾物質(zhì)的基本方法：1.加樣回收法：評價潛在的干擾物添加到樣本后的干擾效應（干擾篩選）2.真實標本法：評價個別有代表性的病人結(jié)果與高特異性的比較方法的結(jié)果偏倚（用病人標本評價干擾）干擾篩選

把一個潛在的干擾物質(zhì)添加到樣本中，然后評價相對于未加干擾物的對照樣本部分的偏差，即為“雙份差異性試驗”，相對高濃度的潛在干擾物可以引起“最大的濃度偏差”，這種評價多種干擾物質(zhì)的方法稱為干擾篩選。如果引起的偏差沒有臨床意義，即便干擾物質(zhì)引起的偏差存在，也不用進行更進一步的實驗。

能引起有臨床意義的偏差的物質(zhì)叫做干擾物，這些物質(zhì)需要進一步評價，目的是測定干擾物濃度和干擾程度兩者之間的關(guān)系。干擾篩選的局限性

1.在臨床標本中的真實干擾物可能不是原來的藥物，而是代謝產(chǎn)物。2.測試樣本的基質(zhì)可能不能代表典型的病理學標本，可能引起基質(zhì)效應3.由于蛋白結(jié)合、金屬絡合、沉淀或分析物異質(zhì)化，添加進入的干擾物與臨床標本中的干擾物不相同4.干擾可能出現(xiàn)在分析物或干擾物的其他濃度，而不是測試時的濃度用病人樣本評價干擾

由于干擾篩查存在明顯的局限性，不管篩查實驗如何廣泛，在病人的標本中可能遇到意想不到的干擾。為了最大程度的減少這種情況的發(fā)生，應該分析來自病人的真實標本以評價內(nèi)在的不同血清標本間的變異性。如果某個標本中出現(xiàn)一個可重復的“離群值”，則說明該標本中有未知的干