食品衛(wèi)生指標(biāo)菌的檢測(cè)-食品中大腸菌群計(jì)數(shù)

食品中大腸菌群計(jì)數(shù)——第二法檢測(cè)程序步驟檢測(cè)設(shè)備的準(zhǔn)備一二三四五目錄頁(yè)檢測(cè)藥品的配制樣品的稀釋平板培養(yǎng)平板菌落數(shù)的選擇六驗(yàn)證試驗(yàn)過渡頁(yè)檢測(cè)設(shè)備的準(zhǔn)備一名稱條件恒溫培養(yǎng)箱36℃±1℃冰箱2℃~5℃恒溫水浴箱46℃±1℃天平感量0.1g均質(zhì)器無(wú)特殊要求振蕩器無(wú)特殊要求無(wú)菌吸管1mL(具0.01mL刻度)、10mL(具0.1mL刻度)或微量移液器及吸頭無(wú)菌錐形瓶500mL無(wú)菌培養(yǎng)皿直徑90mmpH計(jì)或pH比色管或精密pH試紙無(wú)特殊要求菌落計(jì)數(shù)器無(wú)特殊要求設(shè)備及條件過渡頁(yè)檢測(cè)藥品的配制二培養(yǎng)基和試劑名稱物料名稱用量配制說明結(jié)晶紫中性紅膽鹽瓊脂(VRBA)蛋白胨7.0g將上述成分溶于蒸餾水中,靜置幾分鐘,充分?jǐn)嚢?調(diào)節(jié)pH至7.4±0.1。煮沸2min,將培養(yǎng)基融化并恒溫至45℃~50℃傾注平板。使用前臨時(shí)制備,不得超過3h。酵母膏3.0g乳糖10.0g氯化鈉5.0g膽鹽或3號(hào)膽鹽1.5g

中性紅0.03g結(jié)晶紫0.002g瓊脂15g~18g蒸餾水1000mL培養(yǎng)基和試劑名稱物料名稱用量配制說明煌綠乳糖膽鹽(BGLB)肉湯蛋白胨10.0g將蛋白胨、乳糖溶于約500mL蒸餾水中,加入牛膽粉溶液200mL(將20.0g脫水牛膽粉溶于200mL蒸餾水中,調(diào)節(jié)pH至7.0~7.5),用蒸餾水稀釋到975mL,調(diào)節(jié)pH至7.2±0.1,再加入0.1%煌綠水溶液13.3mL,用蒸餾水補(bǔ)足到1000mL,用棉花過濾后,分裝到有玻璃小倒管的試管中,每管10mL。121℃高壓滅菌15min。乳糖牛膽粉溶液200mL0.1%煌綠水溶液13.3mL蒸餾水800mL培養(yǎng)基和試劑名稱物料名稱用量配制說明磷酸鹽緩沖液磷酸二氫鉀34.0g貯存液:稱取34.0g的磷酸二氫鉀溶于500mL蒸餾水中,用大約175mL的1mol/L氫氧化鈉溶液調(diào)節(jié)pH至7.2±0.2,用蒸餾水稀釋至1000mL后貯存于冰箱。稀釋液:取貯存液1.25mL,用蒸餾水稀釋至1000mL,分裝于適宜容器中,121℃高壓滅菌15min。蒸餾水500mL無(wú)菌生理鹽水氯化鈉8.5g稱取8.5g氯化鈉溶于1000mL蒸餾水中,121℃高壓滅菌15min。蒸餾水1000mL1mol/LNaOH溶液NaOH40.0g稱取40g氫氧化鈉溶于1000mL無(wú)菌蒸餾水中。蒸餾水1000mL1mol/LHCl溶液HCl90mL移取濃鹽酸90mL,用無(wú)菌蒸餾水稀釋至1000mL。

蒸餾水1000mL過渡頁(yè)樣品的稀釋三樣品稀釋樣品類型稀釋方式1:101:100其他稀釋度注意事項(xiàng)固體和半固體樣品稱取25g樣品,放入盛有225mL磷酸鹽緩沖液或生理鹽水的無(wú)菌均質(zhì)杯內(nèi),8000r/min~10000r/min均質(zhì)1min~2min,或放入盛有225mL磷酸鹽緩沖液或生理鹽水的無(wú)菌均質(zhì)袋中,用拍擊式均質(zhì)器拍打1min~2min,制成1∶10的樣品勻液。用1mL無(wú)菌吸管或微量移液器吸取1∶10樣品勻液1mL,沿管壁緩緩注入9mL磷酸鹽緩沖液或生理鹽水的無(wú)菌試管中(注意吸管或吸頭尖端不要觸及稀釋液面),振搖試管或換用1支1mL無(wú)菌吸管反復(fù)吹打,使其混合均勻,制成1∶100的樣品勻液。根據(jù)對(duì)樣品污染狀況的估計(jì),按上述操作,依次制成十倍遞增系列稀釋樣品勻液。每遞增稀釋1次,換用1支1mL無(wú)菌吸管或吸頭。1.從制備樣品勻液至樣品接種完畢,全過程不得超過15min。2.1:10的樣品勻液的pH應(yīng)在6.5~7.5之間,必要時(shí)分別用1mol/LNaOH或1mol/LHCl調(diào)節(jié)。液體樣品以無(wú)菌吸管吸取25mL樣品置盛有225mL磷酸鹽緩沖液或生理鹽水的無(wú)菌錐形瓶(瓶?jī)?nèi)預(yù)置適當(dāng)數(shù)量的無(wú)菌玻璃珠)或其他無(wú)菌容器中充分振搖或置于機(jī)械振蕩器中振搖,充分混勻,制成1∶10的樣品勻液。樣品稀釋25g或25ml檢樣盛有225mL磷酸鹽緩沖液或生理鹽水的無(wú)菌均質(zhì)杯內(nèi)均質(zhì)、振蕩均勻1：10樣品勻液1mL1：100樣品勻液1：100樣品勻液磷酸鹽緩沖液或生理鹽水的無(wú)菌試管9mL1mL1：1000樣品勻液磷酸鹽緩沖液或生理鹽水的無(wú)菌試管9mL磷酸鹽緩沖液或生理鹽水的無(wú)菌試管1mL過渡頁(yè)平板培養(yǎng)四1.選取2個(gè)～3個(gè)適宜的連續(xù)稀釋度,每個(gè)稀釋度接種2個(gè)無(wú)菌平皿，每皿1mL。同時(shí)取1mL生理鹽水加入無(wú)菌平皿作空白對(duì)照。2.及時(shí)將15mL～20mL冷至46℃的結(jié)晶紫中性紅膽鹽瓊脂（VRBA）約傾注于每個(gè)平皿中。小心旋轉(zhuǎn)平皿，將培養(yǎng)基與樣液充分混勻，待瓊脂凝固后，再加3mL～4mLVRBA覆蓋平板表層。翻轉(zhuǎn)平板，置于36℃±1℃培養(yǎng)18h～24h。平板培養(yǎng)選取2個(gè)～3個(gè)適宜的連續(xù)稀釋度1mL每個(gè)稀釋度接種2個(gè)無(wú)菌平皿，每皿1mL1mL無(wú)菌生理鹽水空白對(duì)照結(jié)晶紫中性紅膽鹽瓊脂（VRBA）15mL～20mL冷至46℃待瓊脂凝固后培養(yǎng)基與樣液充分混勻加3mL～4mLVRBA覆蓋平板表層36℃±1℃培養(yǎng)18h～24h15mL～20mL冷至46℃待瓊脂凝固后空白對(duì)照加3mL～4mLVRBA覆蓋平板表層36℃±1℃培養(yǎng)18h～24h過渡頁(yè)平板菌落數(shù)的選擇五選取菌落數(shù)在15～150cfu之間的平板，分別計(jì)數(shù)平板上出現(xiàn)的典型和可疑大腸菌群菌落（如菌落直徑較典型菌落小）。典型菌落為紫紅色，菌落周圍有紅色的膽鹽沉淀環(huán)，菌落直徑為0.5mm或更大，最低稀釋度平板低于15CFU的記錄具體菌落數(shù)。平板菌落數(shù)的選擇過渡頁(yè)證實(shí)試驗(yàn)六從VRBA平板上挑取10個(gè)不同類型的典型和可疑菌落，分別移種于BGLB肉湯管內(nèi)，36℃±1℃培養(yǎng)24h～48h，觀察產(chǎn)氣情況。凡BGLB肉湯管產(chǎn)氣，即可報(bào)告為大腸菌群陽(yáng)性。證實(shí)試驗(yàn)食品中大腸菌群計(jì)數(shù)——第二法菌落計(jì)數(shù)及報(bào)告一二目錄頁(yè)大腸菌群平板計(jì)數(shù)的報(bào)告大腸菌群平板計(jì)數(shù)報(bào)告單填寫過渡頁(yè)大腸菌群平板計(jì)數(shù)的報(bào)告一稀釋度0.10.010.001報(bào)告方式CFU/g（mL）平板編號(hào)及菌落數(shù)12121236029312300用于驗(yàn)證試驗(yàn)的菌落數(shù)10陽(yáng)性管數(shù)6從VRBA平板上挑取10個(gè)不同類型的典型和可疑菌落，少于10個(gè)菌落的挑取全部典型和可疑菌落進(jìn)行證實(shí)試驗(yàn)。經(jīng)最后證實(shí)為大腸菌群陽(yáng)性的試管比例乘以典型和可疑大腸菌群菌落總數(shù)，再乘以稀釋倍數(shù)，即為每g（mL）樣品中大腸菌群數(shù)。報(bào)告方式若所有稀釋度（包括液體樣品原液）平板均無(wú)菌落生長(zhǎng)，則以小于1乘以最低稀釋倍數(shù)計(jì)算。固體樣品以cfu/g，液體以cfu/mL為單位過渡頁(yè)

大腸菌群平板計(jì)數(shù)報(bào)告單填寫二

大腸桿菌平板菌落計(jì)數(shù)結(jié)果與報(bào)告單

樣品名稱：生產(chǎn)日期：生產(chǎn)批次：檢驗(yàn)日期：檢驗(yàn)人員：審核人員：環(huán)境溫度：

℃相對(duì)濕度：%樣品狀態(tài)：檢驗(yàn)依據(jù)：GB4789.3-2016（第二法）1．主要設(shè)備：恒溫培養(yǎng)箱、高壓蒸汽滅菌鍋、高溫干燥箱、恒溫水浴鍋、超凈工作臺(tái)、無(wú)菌均質(zhì)器2．檢驗(yàn)過程：

（略）3.檢驗(yàn)結(jié)果：平板編號(hào)及菌落數(shù)0.010.001報(bào)告方式CFU/g食品中大腸菌群計(jì)數(shù)——第一法檢測(cè)程序步驟檢測(cè)設(shè)備的準(zhǔn)備一二三四

五目錄頁(yè)檢測(cè)藥品的配制

樣品的稀釋初發(fā)酵試驗(yàn)復(fù)發(fā)酵試驗(yàn)過渡頁(yè)檢測(cè)設(shè)備的準(zhǔn)備一名稱條件恒溫培養(yǎng)箱36℃±1℃冰箱2℃~5℃恒溫水浴箱46℃±1℃天平感量0.1g均質(zhì)器無(wú)特殊要求振蕩器無(wú)特殊要求無(wú)菌吸管1mL(具0.01mL刻度)、10mL(具0.1mL刻度)或微量移液器及吸頭無(wú)菌錐形瓶500mLpH計(jì)或pH比色管或精密pH試紙無(wú)特殊要求設(shè)備及條件過渡頁(yè)檢測(cè)藥品的配制二培養(yǎng)基和試劑名稱物料名稱用量配制說明月桂基硫酸鹽胰蛋白胨(LST)肉湯胰蛋白胨或胰酪胨20.0g將上述成分溶解于蒸餾水中,調(diào)節(jié)pH至6.8±0.2。分裝到有玻璃小倒管的試管中,每管10mL。121℃高壓滅菌15min。氯化鈉5.0g乳糖5.0g磷酸氫二鉀2.75g磷酸二氫鉀2.75g月桂基硫酸鈉0.1g蒸餾水1000mL煌綠乳糖膽鹽(BGLB)肉湯蛋白胨10.0g將蛋白胨、乳糖溶于約500mL蒸餾水中,加入牛膽粉溶液200mL(將20.0g脫水牛膽粉溶于200mL蒸餾水中,調(diào)節(jié)pH至7.0~7.5),用蒸餾水稀釋到975mL,調(diào)節(jié)pH至7.2±0.1,再加入0.1%煌綠水溶液13.3mL,用蒸餾水補(bǔ)足到1000mL,用棉花過濾后,分裝到有玻璃小倒管的試管中,每管10mL。121℃高壓滅菌15min。乳糖牛膽粉溶液200mL0.1%煌綠水溶液13.3mL蒸餾水800mL培養(yǎng)基和試劑名稱物料名稱用量配制說明磷酸鹽緩沖液磷酸二氫鉀34.0g貯存液:稱取34.0g的磷酸二氫鉀溶于500mL蒸餾水中,用大約175mL的1mol/L氫氧化鈉溶液調(diào)節(jié)pH至7.2±0.2,用蒸餾水稀釋至1000mL后貯存于冰箱。稀釋液:取貯存液1.25mL,用蒸餾水稀釋至1000mL,分裝于適宜容器中,121℃高壓滅菌15min。蒸餾水500mL無(wú)菌生理鹽水氯化鈉8.5g稱取8.5g氯化鈉溶于1000mL蒸餾水中,121℃高壓滅菌15min。蒸餾水1000mL1mol/LNaOH溶液NaOH40.0g稱取40g氫氧化鈉溶于1000mL無(wú)菌蒸餾水中。蒸餾水1000mL1mol/LHCl溶液HCl90mL移取濃鹽酸90mL,用無(wú)菌蒸餾水稀釋至1000mL。

蒸餾水1000mL過渡頁(yè)樣品的稀釋三樣品稀釋樣品類型稀釋方式1:101:100其他稀釋度注意事項(xiàng)固體和半固體樣品稱取25g樣品,放入盛有225mL磷酸鹽緩沖液或生理鹽水的無(wú)菌均質(zhì)杯內(nèi),8000r/min~10000r/min均質(zhì)1min~2min,或放入盛有225mL磷酸鹽緩沖液或生理鹽水的無(wú)菌均質(zhì)袋中,用拍擊式均質(zhì)器拍打1min~2min,制成1∶10的樣品勻液。用1mL無(wú)菌吸管或微量移液器吸取1∶10樣品勻液1mL,沿管壁緩緩注入9mL磷酸鹽緩沖液或生理鹽水的無(wú)菌試管中(注意吸管或吸頭尖端不要觸及稀釋液面),振搖試管或換用1支1mL無(wú)菌吸管反復(fù)吹打,使其混合均勻,制成1∶100的樣品勻液。根據(jù)對(duì)樣品污染狀況的估計(jì),按上述操作,依次制成十倍遞增系列稀釋樣品勻液。每遞增稀釋1次,換用1支1mL無(wú)菌吸管或吸頭。1.從制備樣品勻液至樣品接種完畢,全過程不得超過15min。2.1:10的樣品勻液的pH應(yīng)在6.5~7.5之間,必要時(shí)分別用1mol/LNaOH或1mol/LHCl調(diào)節(jié)。液體樣品以無(wú)菌吸管吸取25mL樣品置盛有225mL磷酸鹽緩沖液或生理鹽水的無(wú)菌錐形瓶(瓶?jī)?nèi)預(yù)置適當(dāng)數(shù)量的無(wú)菌玻璃珠)或其他無(wú)菌容器中充分振搖或置于機(jī)械振蕩器中振搖,充分混勻,制成1∶10的樣品勻液。過渡頁(yè)初發(fā)酵試驗(yàn)四每個(gè)樣品，選擇3個(gè)適宜的連續(xù)稀釋度的樣品勻液（