制備色譜技術(shù)資料

有些搞分析色譜的朋友，對(duì)制備色譜這個(gè)名詞比較陌生。其實(shí)，在化學(xué)化工醫(yī)藥等廣泛采用的層析法以及薄層色譜就是最為典型的制備色譜。下面對(duì)制備色譜與分析色譜不同之處，作一些比較。制備色譜的目的制備色譜的目的，是以較低的成本從混合物中得到純凈物。制備色譜要爭(zhēng)取少用填料，少用溶劑，盡可能多的拿到產(chǎn)品。而分析色譜的目的，是對(duì)樣品進(jìn)行定性或含量。因而，制備色譜的進(jìn)樣里比較大，柱子的分離負(fù)荷的加大。而為了保證組分完全分離，增加制備色譜的柱子直徑和柱子長(zhǎng)度也就是必然。樣品的前處理：因?yàn)樯V填料的價(jià)格相對(duì)來(lái)說(shuō)，比較貴。由于不可逆吸附等原因，制備色譜柱子由于處理的樣品多，壽命較短。在工藝的安排上，要盡量把色譜分離操作放到后面;在色譜柱之前，要加預(yù)柱以延長(zhǎng)色譜填料的壽命。制備色譜柱的材質(zhì)以前因?yàn)闂l件限制，用玻璃柱子做層析。玻璃除了易碎外，當(dāng)壓力增大的時(shí)候，密封就是較大的問題。有機(jī)玻璃的柱子在密封和抗壓方面有優(yōu)勢(shì)，但是有機(jī)玻璃應(yīng)對(duì)有機(jī)溶劑時(shí)，穩(wěn)定性不是很好。不銹鋼柱子具有良好的耐腐蝕、抗壓力性能，雖然價(jià)格稍微貴點(diǎn)，但越來(lái)越受歡迎。當(dāng)然，玻璃和有機(jī)玻璃的有機(jī)玻璃柱子也能抗壓力耐腐蝕，相對(duì)不銹鋼柱子而言，它是半透明的，可以看到液體的運(yùn)行狀態(tài)，對(duì)有色的物質(zhì)其特點(diǎn)就更為突出，但現(xiàn)在多數(shù)的化學(xué)物質(zhì)往往是無(wú)色的。固定相的選擇硅膠、鍵合固定相(如C18)、離子交換樹脂、聚酰胺、氧化鋁、凝膠等都可以作為色譜柱的填料。對(duì)于同一種固定相來(lái)說(shuō)，粒徑和孔徑是最為重要的參數(shù)。粒徑越小，價(jià)格越高。一般制備色譜，高精度的分離推薦的填料為10um,低精度的分離可以采用20-45um的填料。加樣的方法進(jìn)樣方式有多種，①注射器+螺口針頭+定量管②注射器+高壓旋轉(zhuǎn)閥③通過(guò)主泵或輔泵進(jìn)樣④固體上樣。方案①最省，實(shí)驗(yàn)室多采用;而工廠用泵進(jìn)料為多。泵的選用根據(jù)流量、脈沖大小、能承受的最大壓力、精度、是否需要梯度、售后服務(wù)等因素來(lái)選擇泵。泵的價(jià)格可以從1-2千到10萬(wàn)，甚至幾十萬(wàn)一臺(tái)，價(jià)格差異很大。對(duì)于制備色譜，不建議選擇耐壓40MPa的泵，因?yàn)檫@種泵價(jià)格很高，采用這種類型的泵有所浪費(fèi)。檢測(cè)器的選用一般的紫外檢測(cè)器是分析型，最大允許流量為10mL/min。而制備池的型號(hào)有0-10ml/min，10ml-100ml/min，100ml-1000l/min等多個(gè)型號(hào)。如果原有分析池，不想使用制備池，可以采用通過(guò)分流的辦法可以解決的，雖然精度有少量下降。如果是單波長(zhǎng)或三波長(zhǎng)紫外檢測(cè)器價(jià)格十分便宜，而多波長(zhǎng)的價(jià)格則比較貴。如有特殊需要，也可以配二極管陣列或者蒸發(fā)光散射儀器。線性色譜的放大用分析柱子在同等色譜條件下(同樣的固定相和流動(dòng)相)測(cè)定保留時(shí)間后，按照單一組分的線流速(不是體積流速)一定，通過(guò)計(jì)算可以知道組分的大致保留時(shí)間區(qū)域。為了避免浪費(fèi)樣品和溶劑，一般先采用低濃度進(jìn)樣以試探色譜條件。產(chǎn)品的收集手工餾分收集費(fèi)時(shí)費(fèi)力，尤其是半制備色譜，建議采用自動(dòng)餾分收集器。濃度超載和體積加載在制備色譜中，因?yàn)闆]有必要達(dá)到分析色譜那樣的分離度，可以在一定范圍內(nèi)加大進(jìn)樣濃度和進(jìn)樣體積。一般優(yōu)先考慮接近飽和濃度的濃度進(jìn)樣。靜態(tài)軸向壓縮柱或動(dòng)態(tài)軸向壓縮柱當(dāng)色譜譜柱直徑大于5cm的時(shí)候，建議采用軸向壓縮柱。國(guó)產(chǎn)的軸向壓縮柱價(jià)格較低，也能滿足生產(chǎn)的需要，建議采用。柱接頭或柱轉(zhuǎn)換技術(shù)通過(guò)接頭或者閥門，實(shí)現(xiàn)柱子的簡(jiǎn)單延長(zhǎng)或者多臺(tái)泵的串連，或者比較方便地實(shí)現(xiàn)對(duì)其中一個(gè)(或幾個(gè))組分的精制，或者多維色譜。(15)邊緣切割、中心切割、多次切割制備色譜不需要象分析色譜那樣，峰型要非常好。因此，可以通過(guò)邊緣切割、中心切割、多次切割等手段拿到需要的產(chǎn)品。(16)模擬移動(dòng)床色譜技術(shù)模擬移動(dòng)床在減少溶劑消耗、減少溶劑回收量、提高填料利用率等方面的優(yōu)勢(shì)，已經(jīng)得到了認(rèn)同。二組分甚至三組分分離采用模擬移動(dòng)床分離，是以后的發(fā)展趨勢(shì)。如手性拆分可以采用模擬移動(dòng)床是眾所周知。對(duì)于多組分分離，低壓條件下的模擬移動(dòng)床已經(jīng)有100-200臺(tái)在國(guó)內(nèi)運(yùn)行。而高壓的多組分分離，國(guó)內(nèi)也有不少成套設(shè)備。裝柱方法的選擇一般來(lái)說(shuō)，采用濕法裝填的效果較好。所謂“敲擊-裝填”技術(shù)只適合于粒徑大于25um的固定相。一般推薦由專業(yè)的色譜商代為濕法裝填，以保證分離效果。在柱子填完后，應(yīng)有柱效的測(cè)量，對(duì)柱效低的柱子應(yīng)該重填。流動(dòng)相的選擇一般來(lái)說(shuō)，制備色譜的溶劑要回收。①盡量不采用高毒性溶劑(如乙月青)，而采用乙醇、甲醇。對(duì)多元溶劑要盡可能的少用。比如說(shuō)乙醇、水、乙腈三元溶液，回收會(huì)變得復(fù)雜而困難。盡量不要加入鹽等不揮發(fā)組分，比如說(shuō)，一般用氨水而不用氫氧化鈉。用醋酸而不用鹽酸。④在制備中，為了降低成本，往往用分析純