國家開放大學(xué)-《動物檢疫技術(shù)》形成性考核實驗報告

動物檢疫技術(shù)實驗報告，任選兩個實驗，按實驗的具體要求，提交實驗報告《動物檢疫技術(shù)》實驗報告（一）實驗名稱實驗實習(xí)一細菌標(biāo)本片的制備及染色實驗?zāi)康恼莆占毦ㄆ?、觸片的制備及革蘭氏染色等染色方法；能夠識別革蘭氏陽性菌和革蘭氏陰性菌的染色特征。實驗現(xiàn)象或過程.載玻片的準備取清潔載玻片，用紗布或吸水紙擦干凈，如有油跡或污垢，用少量酒精擦拭干凈。根據(jù)所檢材料多少，可在載玻片背面用記號筆畫出方格或圓圈作為記號。.抹片、觸片的制備（1）接種棒的使用。點燃酒精燈，右手持接種棒（握鋼筆方式）。先將接種棒直立使接種環(huán)在酒精燈火焰上燒紅后，再橫向持棒燒金屬柄部分，通過火焰3?4次，即火焰滅菌。每次使用前均需進行火焰滅菌。（2）固體培養(yǎng)物（平板、斜面）或膿汁、糞便等抹片的制備。用接種環(huán)取生理鹽水1滴，置于準備好的載玻片上，再用滅菌接種環(huán)取培養(yǎng)物少許混合于水滴中，混勻涂成薄膜，使其呈極輕微的乳濁為度，多余材料在火焰上滅菌。（3）液體培養(yǎng)物或血液、尿液、滲出液、乳汁等抹片的制備。直接用滅菌接種環(huán)取1環(huán)或數(shù)環(huán)待檢材料，置于載玻片上制成涂片。（4）組織、臟器材料觸片的制備。取病料組織一小塊，以其切面在載玻片表面輕輕接觸幾次，注意不宜重觸、過厚，任其自然干燥，即成組織觸片（或稱印片）。也可用其切面輕輕接觸載玻片表面并移動組織塊制成抹片，自然干燥。（5）干燥固定。抹片（或觸片）于室溫自然干燥后，將涂抹面朝上，以其背面在酒精燈火焰上通過數(shù)次，略做加熱（但不能太熱，以不燙手為度）進行固定。血液、組織、臟器等抹片（尤其做吉姆薩染色）常用甲醇固定，可將已干燥的抹片浸入含有甲醇的染色缸內(nèi)，然后取出晾干，或在抹片上滴加數(shù)滴甲醇使其作用3?5分鐘，然后自然干燥。固定的目的：①殺死細菌。②使菌體蛋白凝固附著在載玻片上，以防被水沖洗掉。③改變細菌對染料的通透性。活細菌一般不允許染料進入菌體。.染色固定好的抹片即可進行染色。常規(guī)染色法有革蘭氏染色法、亞甲藍染色法、瑞氏染色法、吉姆薩染色法等。染色片應(yīng)貼標(biāo)簽，注明菌名、材料、染色法和日期等，封存。 (1)革蘭氏染色法?；具^程為染色→媒染→脫色→復(fù)染→干燥→鏡檢。①染色：在已干燥固定好的抹片上滴加草酸銨結(jié)晶紫溶液，染色2?3分鐘，水洗。②媒染：滴加革蘭氏碘液作用2?3分鐘，水洗。③脫色：滴加95%酒精于抹片上，脫色時間應(yīng)根據(jù)涂抹面的厚度靈活掌握，多在20?60秒，水洗。④復(fù)染：加稀釋石炭酸復(fù)紅溶液或沙黃水溶液數(shù)滴，染色1?2秒，水洗。⑤干燥：吸干或自然干燥。⑥鏡檢：革蘭氏陽性菌呈藍紫色，革蘭氏陰性菌呈紅色。(2)亞甲藍染色法。①將堿性亞甲藍染色液滴加于已干燥、固定好的抹片上，使其覆滿整個涂抹面，經(jīng)2?3分鐘，用水緩緩沖洗，至沖下的水無色為止。②甩去水分，用吸水紙吸干或自然干燥。③鏡檢：莢膜呈紅色，菌體呈藍色，異染顆粒呈淡紫色。(3)瑞氏染色法。用此法染色的抹片，事先不用固定。細菌自然干燥后，滴加配制好的瑞氏染色液原液于抹片上就可對標(biāo)本進行固定，1?2分鐘后再滴加與染色液等量的磷酸鹽緩沖液(KH2PO46.63g,Na2HPO42.56g,蒸餾水1000ml)或中性蒸餾水于載玻片上，輕輕搖晃，使其與染色液混合均勻，染色2?3分鐘后，用蒸餾水沖洗30?60秒，干燥，鏡檢。菌體呈深藍色。(4)吉姆薩染色法。①快速染色法：適用于血片、組織觸片等的染色。抹片用甲醇固定1?3分鐘，自然干燥后用吉姆薩原液1份和蒸餾水20份的混合液染色30?60分鐘，用蒸餾水沖洗30秒左右，干燥，鏡檢。菌體呈藍色。②緩慢染色法：適用于不易著色的微生物如螺旋體、支原體、立克次體等的染色。抹片用甲醇固定3分鐘或用無水乙醇固定15分鐘，然后放于盛有染色液的染色缸內(nèi)染色一夜(這樣染色不會有顆粒沉于抹片)，取出抹片，用蒸餾水充分沖洗，干燥，鏡檢。菌體被染成藍色。(四)常用染色液的配制.革蘭氏染色液(1)草酸銨結(jié)晶紫染色液。甲液：結(jié)晶紫2g,95%酒精20ml。乙液：草酸銨0.8g，蒸餾水80ml。將結(jié)晶紫放入研缽中，加95%酒精研磨均勻，制成甲液，然后將完全溶解的乙液與甲液混合即成。(2)革蘭氏碘液。碘片1g,碘化鉀2g,蒸餾水300ml。將碘化鉀放入研缽中，加入少量蒸餾水使其溶解，再放入磨碎的碘片，徐徐加水，充分混合，待碘片完全溶解后，把余下的蒸餾水倒入，再裝入瓶中。(3)稀釋石炭酸復(fù)紅溶液(復(fù)染液)。取堿性復(fù)紅酒精飽和溶液(堿性復(fù)紅10g溶于95%酒精100ml中)1ml和5%石炭酸水溶液9ml混合，即石炭酸復(fù)紅原液。再取碳酸復(fù)紅原液10ml和90ml蒸餾水混合，即成稀釋石炭酸復(fù)紅溶液。.堿性亞甲藍染色液(1)甲液：亞甲藍0.3g,95%酒精30ml。(2)乙液：0.01%氫氧化鉀溶液100ml。將亞甲藍放入研缽中，徐徐加入95%酒精研磨均勻，制成甲液。將甲、乙兩液混合，過夜后用濾紙過濾即成。新配制的堿性亞甲藍染色液染色效果不良，陳舊的染色效果較好。.瑞氏染色液(1)瑞氏染料粉末的制備。純亞甲藍0.9?1.0g,0.5%碳酸鈉水溶液100ml,1:500黃色伊紅500ml。將純亞甲藍用0.5%碳酸鈉水溶液溶解，100℃水浴加熱1小時，冷卻過濾，濾液邊攪拌邊緩緩加入黃色伊紅，使其產(chǎn)生微小的黑色沉淀。過濾，將沉淀放入60℃的干燥箱中烘干，即成瑞氏染料粉末。(2)瑞氏染色液的制備。瑞氏染料粉末0.1g,純中性甘油1ml,純甲醇60ml。將瑞氏染料粉末和純中性甘油在研缽中混合研磨，再加入純甲醇使其溶解，盛于棕色瓶中，保存于暗處，用時過濾。該染色液保存越久，染色效果越好。.吉姆薩染色液(1)吉姆薩染料粉末的制備。伊紅1.5g,天青∏0.4g,純甘油125ml,純甲醇125ml。將甘油和甲醇分別水浴加熱至60℃,把伊紅和天青∏加入甘油中溶解，然后加入甲醇，放置，過夜后過濾，即可在濾紙上獲得吉姆薩染料晶體，干燥后即成吉姆薩染料粉末。(2)吉姆薩染色原液的配制。吉姆薩染料粉末0.6g,甘油50ml,甲醇50ml。將吉姆薩染料粉末加入甘油中，于55?60℃水浴中加熱1.5?2小時，再將甲醇加入，放置數(shù)天后過濾，濾液即吉姆薩染色原液。實驗結(jié)果分析fc≡??≡圖一金黃色