漁藥及其使用技術(shù)-藥敏試驗(yàn)

項(xiàng)目二漁藥及其使用技術(shù)任務(wù)十藥敏試驗(yàn)supermansuperbacteria（超級(jí)細(xì)菌）一、耐藥性耐藥性：病原體與藥物多次接觸后，對(duì)藥物的敏感性下降甚至消失，致使藥物對(duì)該病原體的療效降低或無效。（視頻1截1分43秒至2分40秒，聲音保留）耐藥機(jī)制細(xì)菌是如何產(chǎn)生耐藥性的呢？1.細(xì)菌對(duì)抗菌藥物的外排泵出作用（視頻1截5分10秒至6分01秒，聲音保留）2.抗菌藥作用靶位結(jié)構(gòu)改變（視頻1截3分28秒至4分17秒，聲音保留）3.產(chǎn)生滅活抗菌藥物的酶（視頻1截4分35秒20至5分01秒，聲音保留）（視頻1截6分05秒至9分09秒，聲音保留）合理選用有效的抗菌藥，輪換用藥。項(xiàng)目二漁藥及其使用技術(shù)任務(wù)十藥敏試驗(yàn)二、藥敏試驗(yàn)最常用的藥敏試驗(yàn)紙片擴(kuò)散法細(xì)菌對(duì)抗菌藥物的敏感試驗(yàn)，簡(jiǎn)稱藥敏試驗(yàn)。藥敏試驗(yàn)是指在體外測(cè)定藥物抑制或殺死細(xì)菌的能力。紙片擴(kuò)散法的操作步驟1.制備牛肉膏蛋白胨培養(yǎng)基2.病原菌的分離培養(yǎng)3.制備菌懸液4.制備藥敏片5.藥物敏感試驗(yàn)6.篩選敏感藥物制備牛肉膏蛋白胨培養(yǎng)基稱量：營(yíng)養(yǎng)瓊脂33g，水1000ml。牛肉膏蛋白胨培養(yǎng)基的配方牛肉膏3.0g蛋白胨10.0gNaCl5.0g水1000mlPH7.4——7.6瓊脂15g溶解：在燒杯或電磁爐鍋中加入各成分，加熱溶解。分裝：將配制的培養(yǎng)基分裝于三角瓶，用封口膜包扎。滅菌：將培養(yǎng)基以121℃，滅菌20min。倒平板：分裝平板病原菌的分離培養(yǎng)用75%酒精棉消毒病魚體表，無菌采集肝、脾、腎臟或體表潰爛等部位，在平板上進(jìn)行劃線接種。做好標(biāo)記后將平板倒置放入37℃培養(yǎng)箱中培養(yǎng)。從培養(yǎng)18-24小時(shí)的平板上挑取5-8個(gè)菌落于1ml滅菌生理鹽水中制成菌懸液。校正濃度至0.5麥?zhǔn)蠘?biāo)準(zhǔn)制備藥敏片用打孔機(jī)將定性濾紙打成直徑6mm的圓片，每100片放入一小瓶中，高壓滅菌后60℃烘干。將治療濃度的待測(cè)抗菌藥物溶液1ml加入100片紙片中，浸泡1-2小時(shí)。烘干后，將藥敏片裝入無菌瓶中，低溫保存?zhèn)溆谩Ｋ幟粼囼?yàn)用已滅菌的棉拭子蘸取已制備的菌懸液均勻涂布于平板表面。劃動(dòng)三次，每次劃動(dòng)時(shí)，平皿轉(zhuǎn)60度，最后繞平皿一周，在室溫中干燥數(shù)分鐘。用無菌鑷子將藥敏片貼于含菌平板上，每個(gè)平板貼4-6片，紙片要貼均勻，各紙片中心相距不小于24mm，紙片距平板邊緣不小于15mm,各紙片間距相等。將平板倒置在37℃培養(yǎng)箱中培養(yǎng)16-18小時(shí)后觀察結(jié)果。篩選敏感藥物抑菌圈直徑（毫米）敏感度20以上極敏15——20高敏10——14中敏10以下低敏0不敏根據(jù)藥敏紙片周圍抑菌圈直徑的大小，判定細(xì)菌對(duì)藥物的敏感程度。在治療過程中，發(fā)現(xiàn)以前用過的藥，現(xiàn)在療效弱或無療效。項(xiàng)目二漁藥及其使用技術(shù)任務(wù)十藥敏試驗(yàn)supermansuperbacteria（超級(jí)細(xì)菌）一、耐藥性耐藥性：病原體與藥物多次接觸后，對(duì)藥物的敏感性下降甚至消失，致使藥物對(duì)該病原體的療效降低或無效。（視頻1截1分44秒至2分35秒，聲音保留）耐藥機(jī)制細(xì)菌是如何產(chǎn)生耐藥性的呢？1.細(xì)菌對(duì)抗菌藥物的外排泵出作用（視頻1截5分12秒至5分47秒，聲音保留）2.抗菌藥作用靶位結(jié)構(gòu)改變（視頻1截3分28秒至4分17秒，聲音保留）3.產(chǎn)生滅活抗菌藥物的酶（視頻1截4分36秒至4分58秒，聲音保留）合理選用有效的抗菌藥，輪換用藥。二、藥敏試驗(yàn)最常用的藥敏試驗(yàn)紙片擴(kuò)散法細(xì)菌對(duì)抗菌藥物的敏感試驗(yàn)，簡(jiǎn)稱藥敏試驗(yàn)。藥敏試驗(yàn)是指在體外測(cè)定藥物抑制或殺死細(xì)菌的能力。紙片擴(kuò)散法的操作步驟1.制備牛肉膏蛋白胨培養(yǎng)基2.病原菌的分離培養(yǎng)3.制備菌懸液4.制備藥敏片5.藥物敏感試驗(yàn)6.篩選敏感藥物制備牛肉膏蛋白胨培養(yǎng)基稱量：營(yíng)養(yǎng)瓊脂33g，水1000ml。牛肉膏蛋白胨培養(yǎng)基的配方牛肉膏3.0g蛋白胨10.0gNaCl5.0g水1000mlPH7.4——7.6瓊脂15g溶解：在燒杯或電磁爐鍋中加入各成分，加熱溶解。分裝：將配制的培養(yǎng)基分裝于三角瓶，用封口膜包扎。滅菌：將培養(yǎng)基以121℃，滅菌20min。倒平板：分裝平板病原菌的分離培養(yǎng)用75%酒精棉消毒病魚體表，無菌采集肝、脾、腎臟或體表潰爛等部位，在平板上進(jìn)行劃線接種。做好標(biāo)記后將平板倒置放入37℃培養(yǎng)箱中培養(yǎng)。從培養(yǎng)18-24小時(shí)的平板上挑取5-8個(gè)菌落于1ml滅菌生理鹽水中制成菌懸液。校正濃度至0.5麥?zhǔn)蠘?biāo)準(zhǔn)制備藥敏片用打孔機(jī)將定性濾紙打成直徑6mm的圓片，每100片放入一小瓶中，高壓滅菌后60℃烘干。將治療濃度的待測(cè)抗菌藥物溶液1ml加入100片紙片中，浸泡1-2小時(shí)。烘干后，將藥敏片裝入無菌瓶中，低溫保存?zhèn)溆?。藥敏試?yàn)用已滅菌的棉拭子蘸取已制備的菌懸液均勻涂布于平板表面。劃動(dòng)三次，每次劃動(dòng)時(shí)，平皿轉(zhuǎn)60度，最后繞平皿一周，在室溫中干燥數(shù)分鐘。用無菌鑷子將藥敏片貼于含菌平板上，每個(gè)平板貼4-6片，紙片要貼均勻，各紙片中心相距不小于24mm，紙片距平板邊緣不小于15mm,各紙片間距相等。將平板倒置在37℃培養(yǎng)箱中培養(yǎng)16-18小時(shí)后觀察結(jié)果。篩選敏感藥物