野生短葶飛蓬中總黃酮含量測(cè)定

野生短葶飛蓬中總黃酮含量測(cè)定

短枝飛蓬（花卉和竹子）也被稱為小慈堿和細(xì)慈堿。它的干燥是菊花科的一種常見(jiàn)草本植物。主要產(chǎn)于云南、四川、貴州、湖南、廣西、西藏等省區(qū)。短葶飛蓬中含有野黃芩苷、黃酮等活性成分,具有散寒解表、祛風(fēng)除濕、活血舒筋、消食積、止痛和擴(kuò)張血管等功效,對(duì)各種腦血管意外導(dǎo)致的癱瘓及腦炎后遺癥等有顯著的治療效果?？傸S酮能舒張15-MPG2α所致的離體冠狀動(dòng)脈收縮,進(jìn)一步舒張離體豬冠狀動(dòng)脈段;此外,黃酮類化合物還具有抗炎、抗菌、抗病毒、雄性激素等作用。研究表明,短葶飛蓬中總黃酮含量隨季節(jié)變化、個(gè)體差異、器官分別及生長(zhǎng)發(fā)育期等變化有一定的差異,但對(duì)不同地點(diǎn)的短葶飛蓬中總黃酮含量的比較分析鮮見(jiàn)報(bào)道。為此,筆者采用紫外分光光度法對(duì)不同產(chǎn)地的短葶飛蓬中總黃酮含量進(jìn)行測(cè)定,并進(jìn)行分析,旨在為中藥短葶飛蓬的良種選育和GAP種植提供依據(jù)。1材料和方法1.1材料表面1.1.1研究的對(duì)象于2009年5月收集9個(gè)不同產(chǎn)地的野生短葶飛蓬資源,并移栽至云南省農(nóng)業(yè)科學(xué)院藥用植物研究所種植資源圃中。1.1.2主要試劑蘆丁對(duì)照品,由中國(guó)藥品生物制品檢定所提供;無(wú)水乙醇,市售分析純;水為重蒸水。1.1.3超聲儀器設(shè)備UV2550雙通道紫外可見(jiàn)分光光度儀,由島津公司生產(chǎn)型超聲波清洗機(jī)由上海聲源超聲儀器設(shè)備有限公司生產(chǎn);0.45μm過(guò)濾膜,由天津Aulomaticscience公司生產(chǎn);AR1140型萬(wàn)分之一分析天平,由美國(guó)NJ公司生產(chǎn);DFT100型中藥粉碎機(jī),由浙江溫嶺市林大機(jī)械有限公司生產(chǎn)。1.2方法1.2.1樣品前處理隨機(jī)取采自不同地點(diǎn)的短葶飛蓬各30株,洗凈,干燥后單株粉碎,過(guò)80目篩,準(zhǔn)確稱取1.0g樣品,加水煮2次,每次1.5h,合并煎液,經(jīng)0.45μm過(guò)濾膜過(guò)濾、濃縮,加無(wú)水乙醇使水醇比為20∶80,冷藏48h,過(guò)濾,收集濾液,用分光光度計(jì)比色測(cè)定,每個(gè)樣品重復(fù)3次。1.2.2c4分析測(cè)定方法參考文獻(xiàn)資料。計(jì)算蘆丁標(biāo)準(zhǔn)品的回歸方程為A=0.4458C-0.0178,R2=0.9994。精密吸取提取濾液1.0ml,置于25ml容量瓶中,用濃度為65%的乙醇定容,測(cè)定吸光度,代入標(biāo)準(zhǔn)回歸方程,計(jì)算總黃酮含量1.3處理數(shù)據(jù)2結(jié)果與分析2.1不同產(chǎn)地間短冒充聚酰胺含量的差異性分析不同產(chǎn)地短葶飛蓬中總黃酮含量測(cè)定結(jié)果見(jiàn)表1。由表1可知,昆明小哨、昆明筇竹寺、文山丘北縣、昭通巧家藥山、昆明雙龍鎮(zhèn)、祿勸縣轉(zhuǎn)龍鎮(zhèn)、祿勸縣雪山鄉(xiāng)、騰沖芒棒鄉(xiāng)2和騰沖芒棒鄉(xiāng)19個(gè)產(chǎn)地的短葶飛蓬中總黃酮總體平均含量為12.620%,總體平均變異系數(shù)(CV)為25.6%。各產(chǎn)地中騰沖芒棒鄉(xiāng)1產(chǎn)短葶飛蓬中總黃酮平均含量最高,為15.760%,單株最大含量達(dá)18.54%,單株最小含量為10.794%;祿勸縣雪山鄉(xiāng)產(chǎn)短葶飛蓬中總黃酮平均含量最低,為8.850%,單株最大含量為14.660%,單株最小含量為3.650%。其他產(chǎn)地總黃酮含量大小為:昆明雙龍鎮(zhèn)>祿勸縣轉(zhuǎn)龍鎮(zhèn)>騰沖芒棒鄉(xiāng)2>昆明小哨>文山丘北縣>昭通巧家藥山>昆明筇竹寺。由表1還可知,同一產(chǎn)地不同短葶飛蓬植株間總黃酮含量變異系數(shù)不同,祿勸縣雪山鄉(xiāng)樣品間變異系數(shù)最高,昆明雙龍鎮(zhèn)樣品間變異系數(shù)最小。表明祿勸縣雪山鄉(xiāng)樣品間總黃酮含量差異較大,昆明雙龍鎮(zhèn)樣品間總黃酮含量較為平均。以總黃酮含量為考察指標(biāo)可知,騰沖芒棒鄉(xiāng)1產(chǎn)的短葶飛蓬適于中藥材的采集;但從含量株間變異系數(shù)及平均含量綜合考慮,昆明雙龍鎮(zhèn)的短葶飛蓬適于育種藥材的采收。2.2不同產(chǎn)地間短葶飛蓬中總黃酮含量差異性分析方差分析表明,各產(chǎn)地短葶飛蓬中總黃酮含量差異極顯著(F=19.467,P<0.01)。LSD最小顯著差數(shù)多重比較結(jié)果可知,昆明小哨與昆明筇竹寺、祿勸縣雪山鄉(xiāng)、騰沖芒棒鄉(xiāng)1(F=19.467,P<0.01)之間總黃酮含量均數(shù)差分別為3.9133、4.2851和2.6266,差異極顯著;與昆明雙龍鎮(zhèn)、祿勸縣轉(zhuǎn)龍鎮(zhèn)之間均數(shù)差分別為2.0686、1.8578,差異顯著。昆明筇竹寺產(chǎn)短葶飛蓬中總黃酮含量與昆明小哨、文山丘北縣、昆明雙龍鎮(zhèn)、祿勸縣轉(zhuǎn)龍鎮(zhèn)、騰沖芒棒鄉(xiāng)2、騰沖芒棒鄉(xiāng)1之間均數(shù)差分別為3.9133、3.7915、5.9819、5.7711、4.8727、6.5399,差異極顯著;與昭通巧家藥山之間均數(shù)差為2.2546,差異顯著。文山丘北縣產(chǎn)短葶飛蓬中總黃酮含量與昆明筇竹寺、祿勸縣雪山鄉(xiāng)、騰沖芒棒鄉(xiāng)1之間均數(shù)差分別為3.7915、4.1633、2.7484差異極顯著與昆明雙龍鎮(zhèn)祿勸縣轉(zhuǎn)龍鎮(zhèn)之間均數(shù)差為2.1904、1.9796,差異顯著。昭通巧家藥山產(chǎn)短葶飛蓬中總黃酮含量與昆明雙龍鎮(zhèn)、祿勸縣轉(zhuǎn)龍鎮(zhèn)、祿勸縣雪山鄉(xiāng)、騰沖芒棒鄉(xiāng)2、騰沖芒棒鄉(xiāng)1之間均數(shù)差分別為3.7274、3.5166、2.6263、2.6181、4.2854,差異極顯著;與昆明筇竹寺之間均數(shù)差為2.2546,差異顯著。昆明雙龍鎮(zhèn)產(chǎn)短葶飛蓬中總黃酮含量與昆明筇竹寺、昭通巧家藥山、祿勸縣雪山鄉(xiāng)之間均數(shù)差5.9819、3.7274、6.3537,差異極顯著;與昆明小哨、文山丘北縣之間均數(shù)差為2.0686、2.1904,差異顯著。祿勸縣轉(zhuǎn)龍鎮(zhèn)產(chǎn)短葶飛蓬中總黃酮含量與昆明筇竹寺、昭通巧家藥山、祿勸縣雪山鄉(xiāng)產(chǎn)短葶飛蓬中總黃酮含量之間均數(shù)差分別為5.7711、3.5166、6.1429,差異極顯著;與昆明小哨、文山丘北縣之間均數(shù)差為1.8578、1.9796,差異顯著。祿勸縣雪山鄉(xiāng)產(chǎn)短葶飛蓬中總黃酮含量與昆明小哨、文山丘北縣、昭通巧家藥山、昆明雙龍鎮(zhèn)、祿勸縣轉(zhuǎn)龍鎮(zhèn)、騰沖芒棒鄉(xiāng)2、騰沖芒棒鄉(xiāng)1之間均數(shù)差分別為4.2851、4.1633、2.6263、6.3537、6.1429、5.2445、6.9117,差異極顯著。騰沖芒棒鄉(xiāng)2產(chǎn)短葶飛蓬中總黃酮含量與昆明筇竹寺、昭通巧家藥山、祿勸縣雪山鄉(xiāng)之間均數(shù)差分別為4.8727、2.6181、5.2445,差異極顯著。騰沖芒棒鄉(xiāng)產(chǎn)1短葶飛蓬中總黃酮含量與昆明小哨、昆明筇竹寺、文山丘北縣、昭通巧家藥山、祿勸縣雪山鄉(xiāng)之間均數(shù)差分別為2.2666、6.5399、2.7484、4.2854、6.9117,差異極顯著。差異顯著性分析結(jié)果表明,不同產(chǎn)地間短葶飛蓬中總黃酮差異顯著,昆明雙龍鎮(zhèn)與騰沖芒棒鄉(xiāng)1之間差異性不顯著。以總黃酮含量為考察指標(biāo),綜合考慮樣品間總黃酮差異性與平均含量,昆明雙龍鎮(zhèn)與騰沖芒棒鄉(xiāng)1兩地短葶飛蓬樣品適于中藥材采收。3植株間變異系數(shù)對(duì)植株總黃酮含量的影響試驗(yàn)結(jié)果表明,不同植株、不同產(chǎn)地的短葶飛蓬中總黃酮含量均有一定差異,不同采集地點(diǎn)的短葶飛蓬中總黃酮平均含量依次為騰沖芒棒鄉(xiāng)1>昆明雙龍鎮(zhèn)>祿勸縣轉(zhuǎn)龍鎮(zhèn)>騰沖芒棒鄉(xiāng)2>昆明小哨>文山丘北縣>昭通巧家藥山>昆明筇竹寺>祿勸縣雪山鄉(xiāng)。植株間變異系數(shù)大小依次為祿勸縣雪山鄉(xiāng)>昆明筇竹寺>祿勸縣轉(zhuǎn)龍鎮(zhèn)>昭通巧家藥山>騰沖芒棒鄉(xiāng)1>騰沖芒棒鄉(xiāng)2>文山丘北縣>昆明小哨>昆明雙龍鎮(zhèn)。同一產(chǎn)地植株間變異系數(shù)越小,表明植株中總黃酮含量越穩(wěn)定;含量平均值越大表明總黃酮含量越高。綜合考慮總黃酮平均含量與變異系數(shù),騰沖芒棒鄉(xiāng)1樣品適于中藥材采集,昆明雙龍鎮(zhèn)所產(chǎn)樣品適于中藥育種