分子診斷學(xué)：第七章 重組DNA技術(shù)試題

第七章重組DNA技術(shù)試題一、選擇題1、下列有關(guān)重組DNA技術(shù)的敘述，正確的是（）A．重組DNA技術(shù)所用的工具酶是限制酶、連接酶和運(yùn)載體B．所有的限制酶都只能識(shí)別一種特定的核苷酸序列C．選細(xì)菌作為重組質(zhì)粒的受體細(xì)胞是因?yàn)榧?xì)菌繁殖快D．只要目的基因進(jìn)入了受體細(xì)胞就能成功實(shí)現(xiàn)表達(dá)2、下列不屬于獲取目的基因的方法是（）A．“鳥(niǎo)槍法”B．轉(zhuǎn)錄法C．反轉(zhuǎn)錄法D．根據(jù)已知氨基酸序列合成法3、作為基因的運(yùn)輸工具-運(yùn)載體，必須具備的條件之一及理由是（）A．能夠在宿主細(xì)胞中穩(wěn)定地保存下來(lái)并大量復(fù)制，以便提供大量的目的基因B．具有多個(gè)限制酶切點(diǎn)，以便于目的基因的表達(dá)C．具有某些標(biāo)記基因，以便為目的基因的表達(dá)提供條件D．能夠在宿主細(xì)胞中復(fù)制并穩(wěn)定保存，以便于進(jìn)行篩選4、基因治療是把健康的外源基因?qū)耄ǎ〢．有基因缺陷的DNA分子中B．有基因缺陷的染色體中C．有基因缺陷的細(xì)胞器中D．有基因缺陷的細(xì)胞中5、應(yīng)用重組DNA技術(shù)診斷疾病的過(guò)程中必須使用基因探針才能達(dá)到檢測(cè)疾病的目的。這里的基因探針是指（）A．用于檢測(cè)疾病的醫(yī)療器械B．用放射性同位素或熒光分子等標(biāo)記的DNA分子C．合成β-球蛋白的DNAD．合成苯丙羥化酶的DNA片段6、基因工程的操作步驟：①使目的基因與運(yùn)載體結(jié)合②將目的基因?qū)胧荏w細(xì)胞③檢測(cè)目的基因的表達(dá)④提取目的基因。正確的順序是（）A．③②④①B．②④①③C．④①②③D．③④①②二、名詞解釋限制性核酸內(nèi)切酶2、載體3、黏粒4、轉(zhuǎn)化5、轉(zhuǎn)染6、轉(zhuǎn)導(dǎo)三、問(wèn)答題簡(jiǎn)述質(zhì)粒的概念和特性，常用的質(zhì)粒載體有哪幾種？簡(jiǎn)述重組DNA技術(shù)的原理及技術(shù)。簡(jiǎn)述黏性末端DNA重組體的構(gòu)建過(guò)程。舉例說(shuō)出重組DNA技術(shù)在醫(yī)藥領(lǐng)域的應(yīng)用。答案一、選擇題1．B2．B3．A4．A5．B6．C二、名詞解釋1、限制性核酸內(nèi)切酶簡(jiǎn)稱限制酶，是一類能識(shí)別雙鏈DNA分子中某特定的核苷酸序列，并在識(shí)別序列內(nèi)或附近切割DNA雙鏈結(jié)構(gòu)的核酸內(nèi)切酶。它是一類專一性很強(qiáng)的核酸內(nèi)切酶，在基因的分離、DNA結(jié)構(gòu)的分析、載體的改造以及體外重組中均有重要作用。2、是指能攜帶目的基因進(jìn)入宿主細(xì)胞進(jìn)行擴(kuò)增和表達(dá)的一類DNA分子。載體按照基本組成元件的來(lái)源不同，可分為質(zhì)粒載體、噬菌體載體、噬菌粒載體、粘粒載體、人工染色體載體等。按功能可分為克隆載體和表達(dá)載體。3、黏粒又稱柯斯質(zhì)粒，是一種λ噬菌體以為基礎(chǔ)，專門為克隆大片段而設(shè)計(jì)并和質(zhì)粒共同構(gòu)建的雜合載體。它由λ噬菌體DNA的cos位點(diǎn)序列和質(zhì)粒的復(fù)制子構(gòu)建而成。把帶有目的基因的重組質(zhì)粒DNA引入受體細(xì)胞的過(guò)程成為轉(zhuǎn)化。將重組噬菌體DNA直接引入受體細(xì)胞的過(guò)程則稱為轉(zhuǎn)染。若重組噬菌體DNA被包裝到噬菌體頭部成為有感染力的噬菌體顆粒，再以此噬菌體為運(yùn)載體，將頭部重組DNA導(dǎo)入受體細(xì)胞中，這一過(guò)程成為轉(zhuǎn)導(dǎo)，通常成為感染。三、問(wèn)答題1、質(zhì)粒為細(xì)菌染色體外一些雙鏈、共價(jià)閉合環(huán)狀DNA分子，是能夠進(jìn)行獨(dú)立復(fù)制并保持穩(wěn)定遺傳的復(fù)制子。質(zhì)粒具有復(fù)制和控制機(jī)構(gòu)，能夠在細(xì)胞質(zhì)中獨(dú)立自主的進(jìn)行自身復(fù)制，并使子代細(xì)胞保持它們恒定的拷貝數(shù)。質(zhì)粒一般具有以下特性：①自主復(fù)制性，它能獨(dú)立于宿主細(xì)胞的染色體DNA而自主復(fù)制；②質(zhì)粒不相容性；③可擴(kuò)增性；④可轉(zhuǎn)移性。理想質(zhì)粒載體應(yīng)具備①具有松弛型復(fù)制子；②在復(fù)制子外存在幾個(gè)單一的酶切位點(diǎn)；③具有插入失活的篩選標(biāo)記；④分子量相對(duì)較小，有較高的拷貝數(shù)。常見(jiàn)的質(zhì)粒載體有：pBR322質(zhì)粒、pUC質(zhì)粒載體、pGEM系列載體等。2、重組DNA是在體外利用限制性內(nèi)切酶，將不同來(lái)源的DNA分子進(jìn)行特異的切割，獲得的目的基因或DNA片段與載體連接，從而組成一個(gè)新的DNA分子。重組的DNA分子能夠通過(guò)一定的方式進(jìn)入相應(yīng)的宿主細(xì)胞，并在宿主細(xì)胞中進(jìn)行無(wú)性繁殖，獲得大量的目的基因或DNA片段。經(jīng)重組的DNA分子能在宿主細(xì)胞中進(jìn)行表達(dá)，獲得相應(yīng)的蛋白質(zhì)。大致步驟包括：=1\*GB3①目的基因的獲取；=2\*GB3②載體的選擇；=3\*GB3③目的基因與運(yùn)載體連接成重組DNA；=4\*GB3④重組DNA導(dǎo)入受種細(xì)胞；=5\*GB3⑤重組體的篩選。3、目的基因和載體可由同一種限制酶切割后產(chǎn)生，或由不同的限制酶切割形成互補(bǔ)黏性末端，經(jīng)退火，彼此間很容易按堿基配對(duì)原則形成氫鍵。然后由DNA連接酶催化連接接頭處的缺口，形成重組質(zhì)粒。載體DNA在限制酶切割后，用堿性磷酸酶處理，除去5’端磷酸基，以避免載體DNA自身環(huán)化。4、可以利用重組DNA技術(shù)探明致病基因的結(jié)構(gòu)和功能，了解其致病機(jī)制；開(kāi)發(fā)基因工程藥物和疫苗用于臨床；建立基因診斷、治療技術(shù)，為疾病的預(yù)防、治療提供新方法、新技術(shù)。具體可用于基因診斷：基因診斷是從基因水平上檢測(cè)人類遺傳性疾病的基因缺陷；基因治療：是指將人的正常基因或有治療作用的基因通過(guò)載體導(dǎo)入人體靶細(xì)胞取代靶細(xì)胞中的缺陷基因，從而達(dá)到治療疾病目的的方