白組培快繁技術(shù)體系的建立

白組培快繁技術(shù)體系的建立

白牙，蘭科白牙，又名小白牙、蓮草、甘草、白根、紫蘭（根）等。生于海拔1300～1800m的半山區(qū)。有較高的觀賞價值和藥用價值,白芨為傳統(tǒng)止血藥,具有止血收斂、消腫生肌之作用。作者從云南保山地區(qū)昌寧縣境內(nèi)采得野生白芨,與文獻報道不同的是本研究利用莖尖和側(cè)芽進行組培誘導(dǎo)獲得成功,并進行快繁和生根研究,建立了快繁技術(shù)體系,并生產(chǎn)出了批量組培苗,為這類植物的組培快繁和商品化生產(chǎn)奠定了技術(shù)基礎(chǔ)。1材料和方法1.1試驗材料植株采自云南省保山市昌寧縣境內(nèi)半山區(qū),后在昆明云南農(nóng)業(yè)大學(xué)溫室栽培馴化1a,使其萌發(fā)側(cè)芽。1.2測試方法1.2.1外植體預(yù)處理采取外植體植株,剪去過長的葉片,清洗干凈,切取側(cè)芽和莖尖,飽和漂白粉溶液中浸泡3～5min,并不斷攪動,流水沖洗干凈。1.2.2增殖配方的篩選在超凈工作臺上,用無菌水沖洗外植體1次,75%乙醇溶液浸泡40s,然后轉(zhuǎn)入0.1%的升汞中進行表面消毒8～12min,再用無菌水沖洗3～4次,切取1cm大小的莖尖,接入到已配制好的誘導(dǎo)培養(yǎng)基上。90d后將誘導(dǎo)出的不定芽轉(zhuǎn)入不同激素濃度配比的增殖培養(yǎng)基中進行培養(yǎng)40d后,通過以增殖率為主導(dǎo)因子,篩選出最佳的增殖配方。待苗長到2.5～3.5cm高時,剪去根以及剝?nèi)セ咳~鞘,轉(zhuǎn)入到不同NAA濃度的培養(yǎng)基中,誘導(dǎo)生根,30d后將植株從瓶中取出,清洗干凈基部的瓊脂,進行煉苗移栽。1.2.3培養(yǎng)基和培養(yǎng)方法培養(yǎng)條件為:溫度25±2℃,光照1800～2500Lx,每天光照12h;誘導(dǎo)和增殖培養(yǎng)采用MS,生根采用1/2MS培養(yǎng)基,蔗糖2.5%,pH6.0～6.5;瓊脂0.7%。2結(jié)果與分析2.1外植體誘導(dǎo)培養(yǎng)植物生長調(diào)節(jié)劑是誘導(dǎo)蘭科植物成苗以及一些品種的種子發(fā)芽所必需的。用Ms+6-BA1.0～3.0mg/L+NAA0.2mg/L作外植體誘導(dǎo)培養(yǎng)基,經(jīng)過3～6個月后,都能不同程度地直接誘導(dǎo)出增殖芽。但前期增殖芽較少,以后隨細(xì)胞分裂素的增加而逐漸增多。2.2附加kt時、ba對白的增殖效果影響誘導(dǎo)培養(yǎng)90d后,將高約0.8～1.0cm的不定芽單個切下,去處基部附有的瓊脂以及葉鞘,轉(zhuǎn)入不同激素和濃度組合的培養(yǎng)基對其進行培養(yǎng),40d后觀察實驗結(jié)果見表1,2,3。為了探索出更好的白芨增殖培養(yǎng)基,本實驗采用了不同激素和濃度組合的培養(yǎng)基對其進行培養(yǎng)。結(jié)果表明6-BA和KT對白芨的增殖有促進作用;不同濃度的組合的增殖效果表現(xiàn)出明顯差異性。MS培養(yǎng)基中都加入了濃度為0.2mg/L的NAA,其他的2種激素每0.5mg/L為1個濃度梯度,結(jié)果表明使用不同的激素都不同程度的對白芨增殖起了促進作用。在附加KT0.5～4.0mg/L情況下,KT濃度不同,對白芨的增殖效果影響不同,當(dāng)濃度為4.0mg/L時的增殖效果最佳為450%,濃度為2.5mg/L和1.5mg/L的增殖率都為250%;附加6-BA0.5～4.0mg/L時,不同濃度對白芨的增殖效果不同,隨著BA的濃度逐漸增大,其增殖率有逐漸增大趨勢,但植株長勢相對較矮,其中以濃度4.0mg/L的增殖效果最明顯,增殖率為370%,濃度為1.0mg/L和2.0mg/L的增殖率相同;附加KT+BA時增殖效果隨著濃度為2.5,1.0,1.5,0.5,2.0mg/L表現(xiàn)出逐漸減少的趨勢。以上的分析表明,在這3種組合中白芨的增殖對KT濃度較為敏感,增殖率變化范圍450%～210%,且平均株高在2.95cm以上;使用BA對白芨的增殖作用較為平緩,增殖率變化范圍370%～250%,平均株高在3.0cm以下,1.5cm以上;KT+BA對白芨的增殖率為320%～230%,增殖效果與平均株高都處于KT,BA之間。本實驗得出以MS+KT4.0mg/L+NAA0.2mg/L的培養(yǎng)基的增殖效果最好,增殖系數(shù)為4.5,它既可以在較短的時間內(nèi)保持較高的增殖系數(shù),同時也可獲得較高的植株。2.3不同濃度naa對白生根效果的影響將高約2.5～3.5cm的苗體從瓶中取出,剪去根,剝?nèi)ト~鞘,轉(zhuǎn)入不同濃度的NAA培養(yǎng)基中進行培養(yǎng),30d觀察結(jié)果如下:從表4中可以看出:基本培養(yǎng)基都為1/2MS,不同濃度的NAA對白芨的生根效果表現(xiàn)出明顯的差異性。NAA濃度為0.5mg/L和2.0mg/L時,平均生長根數(shù)都為22.3,但是NAA濃度為2.0mg/L時植株基部葉片偶有黃化;NAA濃度為0.5mg/L時平均根長較長于NAA濃度為2.0mg/L的2.35cm,植株濃綠,是4組配方中唯一植株葉片無黃化的。NAA濃度為1.0mg/L時,平均根數(shù)最多但根長最短;NAA濃度為1.5mg/L時,生根效果最差。以上分析得出NAA濃度為0.5mg/L對白芨的生根效果明顯且植株濃綠。2.4葉面施肥,要求栽植在造林把已生根苗的培養(yǎng)瓶從培養(yǎng)室取出,置于室內(nèi)或95%遮光率的大棚內(nèi)放置3～5d,取出瓶苗洗凈,用800～1000倍百菌清或多菌靈液浸泡1min,晾干后栽于煉苗大棚。栽培基質(zhì)用60%腐葉土+30%珍珠巖+10%素紅土,蒸汽消毒后使用。栽苗后注意遮光和提高空氣濕度,1個月后用0.1%尿素或磷酸二氫鉀液進行葉面施肥。經(jīng)過精心管理,成活率可達90%以上。3討論3.1濃度對白增殖的影響當(dāng)KT與BA的濃度都為4.0mg/L時,對白芨的增殖效果KT較BA敏感,但從2種激素分別單獨使用來看,BA的總體增殖效果較KT好;當(dāng)2種激素同時使用,濃度從0.5～2.5mg/L時,也說明了在這個濃度范圍內(nèi)BA起著主導(dǎo)的增殖效應(yīng)。以上可以得出:在白芨的增殖過程中,BA的增殖效果隨著濃度0.5～4.0mg/L呈逐漸上升的趨勢;而KT的增殖效果隨濃度0.5～4.0mg/L沒成一定的規(guī)律性,但濃度為4.0mg/L時增殖率達到450%,說明KT的增殖率在濃度達到一定的量時,才有可能呈一定的規(guī)律性,此結(jié)論有待進一步研究。在NAA濃度為0.2mg/L的增殖培養(yǎng)過程中,都不同程度的促進了生根,在生根試驗中發(fā)現(xiàn),使用最低濃度的NAA,生根效果最好,表明白芨生根較容易。3.2基質(zhì)對煉苗的影響在實驗中,曾用腐葉土、素紅土、珍珠巖、腐葉土+珍珠巖等基質(zhì)配方進行了煉苗效果的對比試驗,并從成活率、成苗質(zhì)量、生長狀況等方面進行測試與觀察,發(fā)現(xiàn)以上基質(zhì)對煉苗的效果都不太理想,而60%腐葉土+30%珍珠巖+10%素紅土的配比組合效果最好,煉苗成活率高,幼苗更健壯。為什么在腐葉土+珍珠巖基質(zhì)中加入素紅土的煉