連錢草總多酚的提取及其抗氧化性研究

連錢草總多酚的提取及其抗氧化性研究

連金草又名金錢草和血府草，是嘴唇科的一種多年生草本植物。味辛、微苦、性微寒。主要用于利小便,治療膀胱結(jié)石、腎結(jié)石、輸尿管結(jié)石、腎炎水腫、濕熱黃疸等病癥。有關(guān)研究表明,連錢草有降糖作用。植物多酚具有降血脂和降血糖的雙重作用。目前,對于連錢草的研究主要以化學成分、揮發(fā)油成分居多,有關(guān)連錢草多酚提取的系統(tǒng)性研究尚未見報道。本試驗用乙醇浸取法對連錢草的多酚進行提取并對其抗氧化性進行研究,以期為連錢草的進一步開發(fā)利用提供參考依據(jù)。1材料和方法1.1化學試劑及試劑供試材料:連錢草(購于泉州藥店)。藥劑:無水乙醇(恒隆化工服份有限公司),七水合硫酸亞鐵、焦性沒食子酸(國藥集團化學試劑有限公司),酒石酸鉀鈉(天津基準化學試劑有限公司),磷酸二氫鉀(廣東汕頭西隴化工公司),磷酸氫二鉀(汕頭市西隴化工有限公司)。儀器:電子天平(上海舜宇恒平科學儀器有限公司),循環(huán)水真空泵(河南省予華儀器有限公司),離心機(上海安亭科學儀器廠制造),料理機(山東九陽家電有限公司)。1.2焦性沒食子酸標準液吸光度的測定根據(jù)Folin-Ciocalten法,以焦性沒食子酸為標準品,采用可見分光光度法測定連錢草的多酚含量。取0.25mg/mL焦性沒食子酸標準液0、1.0、2.0、3.0、4.0、5.0mL,分別置于25mL的容量瓶中,加去離子水5mL,酒石酸鐵溶液5mL,用pH7.5的磷酸鹽緩沖溶液定容。振蕩混勻靜置后,在波長為540nm下測其吸光度。以焦性沒食子酸標準液濃度為橫坐標,以吸光度為縱坐標,繪制標準曲線。1.3料液比及時間將連錢草清洗干凈,60℃烘干,烘干后粉碎過40目篩。稱取1.000g連錢草粉末,放入小燒杯中,控制單因素條件浸提總多酚。(1)乙醇體積分數(shù)。分別用不同體積分數(shù)(30%、40%、50%、60%、70%)的乙醇為提取劑,料液比1∶25,在60℃下提取2h;(2)料液比。分別用不同的料液比(連錢草∶乙醇)(1∶15、1∶20、1∶25、1∶30、1∶35)(g∶mL,下同),乙醇體積分數(shù)60%,溫度60℃提取2h;(3)時間。乙醇體積分數(shù)60%,料液比1∶30,在60℃下不同時間(1.0、1.5、2.0、2.5、3.0h)下提取;(4)溫度。乙醇體積分數(shù)60%,料液比1∶30,分別用不同的溫度(40、50、60、70、80℃),提取2h。將提取液趁熱抽濾,并將其轉(zhuǎn)移至50mL容量瓶中,用同體積分數(shù)乙醇溶劑定容。從中量取1mL置于10mL的容量瓶中,加入1mL酒石酸亞鐵溶液,用pH7.5的磷酸鹽緩沖溶液定容,混勻、靜置、離心后在540nm波長下測定其吸光度,參照標準曲線計算出連錢草中多酚的含量。1.4確定浸提連錢草總多酚最佳條件的正交試驗在單因素試驗的基礎(chǔ)上,以乙醇體積分數(shù)、溫度、時間和料液比4個因素進行L9(34)正交試驗,確定浸提連錢草中總多酚的最佳條件。正交試驗因素和水平如表1所示。1.5浸提液用量的確定依次取9mmol/LFeSO4、8.82mmol/L雙氧水、9mmol/L水楊酸溶液各2.0mL于25mL容量瓶中,向反應體系中分別加入1.0、1.5、2.0、2.5、3.0mL浸提液,用去離子水定容,搖勻,恒溫37℃下,在波長510nm處測其吸光度值(AX),按此方法不加浸提液測定吸光度值(A0)。按照公式:清除率=(A0-AX)/A0×100%,計算連錢草中總多酚的抗氧化性。2結(jié)果與分析2.1標準曲線的繪制以焦性沒食子酸標準液濃度為橫坐標,以吸光度值為縱坐標繪制標準曲線,得到的標準曲線如圖1所示?；貧w線方程為Y=-0.01186+16.47429×X。2.2上升趨勢分析從圖2可以看出,隨著乙醇體積分數(shù)的升高,連錢草總多酚含量呈上升趨勢。當乙醇體積分數(shù)為60%時,連錢草總多酚含量達到最高,含量為2.515mg/g,而后隨著乙醇體積分數(shù)的升高,連錢草總多酚含量開始下降。因此,選擇乙醇體積分數(shù)為60%為宜。2.3溶劑用量的影響由圖3可知,在溶劑用量較小時,連錢草總多酚含量較低,加大溶劑用量,總多酚溶出率增大。當料液比為1∶30時,連錢草總多酚含量最高。如果繼續(xù)加大溶劑量,連錢草總多酚含量反而下降。因此,選擇料液比1∶30為宜。2.3浸提時間的確定由圖4可知,時間較短時,浸提得到的連錢草總多酚含量較低,隨著時間的延長,其總多酚不斷溶出,當浸提時間為2.0h時,溶出達到平衡,連錢草總多酚含量達到峰值。再繼續(xù)延長時間,提取效果呈下降趨勢。因此,選擇2.0h為浸提時間。2.5溫度對連錢草總多酚含量的影響由圖5可知,隨浸提溫度的升高,連錢草總多酚含量呈上升趨勢,當溫度達到70℃時,浸提效果最好,連錢草總多酚含量最高。溫度繼續(xù)升高,浸提效果明顯下降。因此,選擇溫度為70℃浸提連錢草中總多酚。2.6浸提連錢草總多酚最佳條件的確定由表2結(jié)果可知,4個因素對連錢草總多酚浸提效果影響最大的是浸提溫度,其次是時間,影響最小的是料液比。浸提連錢草中總多酚的最佳條件組合為A1B3C2D1,即50%乙醇、溫度80℃,時間2.0h、料液比1∶25(g∶mL)。在此條件下進行浸提,連錢草總多酚含量為4.275mg/g。2.7去除氨基酸自由基由圖6可知,連錢草浸提液中總多酚對羥基自由基有一定的清除作用,且清除率與浸提液的濃度呈線性相關(guān)。3酚提取條件的確定通過單因素試驗與正交試驗確定了連錢草總多酚浸提的最佳工藝。結(jié)果表明,影響連錢草總