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實(shí)驗(yàn)二細(xì)菌的特殊染色技術(shù)一、目的要求學(xué)習(xí)并掌握芽孢染色法。初步了解芽孢桿菌的形態(tài)特征。學(xué)習(xí)并掌握莢膜染色法。二、基本原理用著色力強(qiáng)的染色劑孔雀綠，在加熱條件下染色，使染料不僅進(jìn)入菌體也可進(jìn)入芽孢內(nèi)，進(jìn)入菌體的染料經(jīng)水洗后被脫色，而芽孢一經(jīng)著色難以被水洗脫，再用對(duì)比度大的復(fù)染劑染色后，芽孢仍保留初染劑的顏色，而菌體和芽孢囊被染成復(fù)染劑的顏色，使芽孢和菌體更易于區(qū)分。莢膜是包圍在細(xì)菌胞外的一層粘液狀或膠質(zhì)裝物質(zhì)，其成分為多糖、糖蛋白或多肽。由于莢膜與染料的親和力弱、不易著色；而且可溶于水，易在用水沖洗時(shí)被除去。所以通常用襯托染色法染色，使菌體和背景著色，而莢膜不著色，在菌體周圍形成一透明圈。由于莢膜含水量高，制片時(shí)通常不用熱固定，以免變形影響觀察。三、器材菌種枯草芽孢桿菌約2d營(yíng)養(yǎng)瓊脂斜面培養(yǎng)物；褐球固氮菌約2d無氮培養(yǎng)基瓊脂斜面培養(yǎng)物。

染色劑5%孔雀綠水溶液，0.5%番紅水溶液，繪圖墨水。

儀器和其他用具小試管，滴管，燒杯，試管架，載玻片，蓋玻片，濾紙，木夾子，顯微鏡等。四、操作步驟(1)Schaeffer—Fulton氏芽孢染色法

制片常規(guī)涂片、干燥、固定。

染色加數(shù)滴孔雀綠染液于涂片上，用木夾夾住載玻片一端，在微火上加熱至染料冒蒸汽并開始計(jì)時(shí)，維持5min。水洗待玻片冷卻后，用緩流自來水沖洗，直至流出的水無色為止。復(fù)染用番紅染液復(fù)染2min。水洗用緩流水沖洗后，吸干。鏡檢

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