魚中結(jié)晶紫的檢測(cè)方案

魚中結(jié)晶紫的檢測(cè)方案工分專122張啟陽、尹彬竹、向乾元、魏俊前言

結(jié)晶紫屬于三苯甲烷類染料，化學(xué)性質(zhì)，暗綠色閃光粉末或粒子。溶于冷水和熱水，呈紫色，極易溶于乙醇。于濃硫酸中呈紅黃色，稀釋后呈暗綠光黃色，然后轉(zhuǎn)變成藍(lán)和紫色，結(jié)晶紫這種化合物對(duì)魚類的水霉病、寄生蟲病等有很好的療效，長期以來許多國家曾將其作為水產(chǎn)養(yǎng)殖業(yè)的殺菌劑。它們?cè)隰~體內(nèi)可分別代謝為和無色結(jié)晶紫，由于其母體化合物和代謝物均具有潛在的致癌、致畸、致突變等副作用，20世紀(jì)90年代以來許多國家都將其列為水產(chǎn)養(yǎng)殖的禁用藥物。但是由于其抗菌效果好、價(jià)格便宜，不少業(yè)戶仍在違規(guī)使用，因此結(jié)晶紫殘留監(jiān)控就顯得格外重要。

實(shí)驗(yàn)材料與方法試驗(yàn)結(jié)果結(jié)果討論結(jié)晶紫的檢測(cè)方案123樣品的提取的保存試劑和溶液

鱸魚，從超市里購買鱸魚活樣品，取其肌肉，各自用均質(zhì)機(jī)混均，每個(gè)樣品各400g，于-20℃冰箱保存?zhèn)溆谩?/p>

樣品與方法

結(jié)晶紫標(biāo)準(zhǔn)品：純度93.9%；結(jié)晶紫快速檢測(cè)前處理試劑盒，由中國檢驗(yàn)檢疫科學(xué)研究院北京陸橋商檢新技術(shù)公司生產(chǎn)。酸性氧化鋁固相萃取柱（500mg，3mL），PRS固相萃取柱（500mg，3mL），乙腈為色譜純，無水乙酸銨、冰乙酸、對(duì)-甲苯磺酸、乙酸鈉、硼氫化鉀均為分析純，實(shí)驗(yàn)用水為去離子水?？兹甘G乙腈溶液;結(jié)晶紫標(biāo)準(zhǔn)儲(chǔ)備液：100μg/mL結(jié)晶紫乙腈溶液;、結(jié)晶紫混合標(biāo)準(zhǔn)中間溶液：10μg/mL;乙酸鈉緩沖液：0.06mol/L乙酸鈉+0.005mol/L對(duì)甲苯磺酸，pH4.5;乙酸銨緩沖溶液：0.125mol/L，pH4.5;硼氫化鉀溶液：0.07mol/L，現(xiàn)配現(xiàn)用;洗脫液：乙酸乙酯∶甲醇∶氨水體積比10∶9∶1樣品預(yù)處理提?。簻?zhǔn)確稱取5.00g已攪碎的樣品于50mL離心管中，加入結(jié)晶紫快速檢測(cè)前處理試劑盒中提取劑1（20mL，由有機(jī)化學(xué)試劑組成的混合液體試劑）和提取劑2（由無機(jī)化學(xué)組成的混合粉末試劑），8000r/min的速度均質(zhì)30s，振蕩2min，4500r/min離心5min，取上清液10.0mL于雞心瓶中，45℃水浴旋轉(zhuǎn)蒸發(fā)至近干，用2.5mL乙腈溶解殘?jiān)?。凈?將PRS柱安裝在固相萃取裝置上，上端串聯(lián)酸性氧化鋁柱，用5mL乙腈活化，轉(zhuǎn)移提取液到柱上，再用2.5mL乙腈洗滌瓶一次，過柱，重復(fù)操作一次，去掉酸性氧化鋁柱，用5mL乙腈清洗PRS柱，氮吹PRS柱至近干，在不抽真空清況下，加入5mL洗脫液洗脫，收集全部洗脫液，氮?dú)獯抵两?，?.4mL硼氫化鉀溶液，還原，靜置20min，用乙腈定溶至1.0mL，經(jīng)聚四氟乙烯膜過濾后上機(jī)分析

實(shí)驗(yàn)方法的選擇

目前結(jié)晶紫檢測(cè)方法主要有高效液相色譜法[1-3]和液質(zhì)聯(lián)用法[4-5]。我國于2006年發(fā)布有關(guān)的水產(chǎn)行業(yè)標(biāo)準(zhǔn)（SN/T1768-2006）[6]及國家標(biāo)準(zhǔn)（GB/T20361-2006）[7]。行業(yè)標(biāo)準(zhǔn)SN/T1768-2006前處理簡(jiǎn)單，但是滿足不了檢測(cè)限0.5μg/kg的要求。其他方法的前處理均需多次萃取，多次離心，操作煩瑣，前處理時(shí)間長，有機(jī)溶劑用量大，實(shí)際檢測(cè)工作中存在困難。本文綜合各個(gè)方法標(biāo)準(zhǔn)中快速和靈敏的優(yōu)點(diǎn)，建立了同時(shí)檢測(cè)，結(jié)晶紫以及代謝物無色結(jié)晶紫總量的高效液相色譜法。儀器：Agilent1200型高效液相色譜儀、均質(zhì)機(jī)、離心機(jī)、振蕩器、旋轉(zhuǎn)蒸發(fā)器、固相萃取裝置、氮吹儀。色譜條件：色譜柱，Eclipse-C18250mm×4.6mm，粒度5μm；流動(dòng)相，乙腈+乙酸銨緩沖液（pH4.5）=80+20；流速1.5mL/min；柱溫35℃；激發(fā)波長265nm,發(fā)射波長360nm；進(jìn)樣量20μL儀器與色譜條件

在臨用前準(zhǔn)確吸取一定量的混合標(biāo)準(zhǔn)中間溶液，加入0.4mL硼氫化鉀溶液，用乙腈準(zhǔn)確稀釋至2.0mL，配制適當(dāng)濃度的混合標(biāo)準(zhǔn)工作液。在上述色譜條件下，分別測(cè)定結(jié)晶紫混合標(biāo)準(zhǔn)工作溶液及樣品提取溶液中的結(jié)晶紫，外標(biāo)法定量。

樣品測(cè)定

準(zhǔn)確度和精密度實(shí)驗(yàn)

以本底無結(jié)晶紫、隱性結(jié)晶紫的鱸魚為樣品，平行稱取3份樣品，按5μg/kg、10μg/kg、20μg/kg三個(gè)加標(biāo)濃度進(jìn)行加標(biāo)，按上述步驟進(jìn)行前處理和色譜測(cè)定，分別測(cè)定各次的峰面積，計(jì)算樣品中結(jié)晶紫的含量，計(jì)算回收率。另取6個(gè)平行樣品，采用添加法分別添加等量結(jié)晶紫混合標(biāo)準(zhǔn)溶液，按上述步驟進(jìn)行前處理和色譜測(cè)定，分別測(cè)定各次的峰面積,計(jì)算樣品中結(jié)晶紫的含量，計(jì)算相對(duì)標(biāo)準(zhǔn)偏差。計(jì)算

以標(biāo)準(zhǔn)工作液峰面積和濃度作工作曲線，根據(jù)樣品提取液的峰面積，從工作曲線計(jì)算樣品提取液中結(jié)晶紫的殘留量，按式⑴計(jì)算樣品中結(jié)晶紫殘留量。計(jì)算結(jié)果需扣除空白值。

X=(CxVx2)/m

式中：X—試樣中的結(jié)晶紫的殘留量，μg/kg；

C—樣品提取液中結(jié)晶紫的殘留量，ng/mL；

V—最終定容體積，mL；