細(xì)菌的生長(zhǎng)和遺傳變異2

考試61.X、γ射線(xiàn)的殺菌機(jī)理是什么？2.氧化劑的殺菌機(jī)理是什么？3.福爾馬林的主要成分是什么？4.乙醇?xì)⒕鷻C(jī)理是什么？其最佳殺菌濃度是多少？5.青霉素的抗菌機(jī)理是什么？6.直接計(jì)數(shù)法的特點(diǎn)是什么？有哪些具體方法？4．比濁計(jì)數(shù)法濁——細(xì)菌懸浮液的濁度細(xì)菌不完全透光，一定范圍內(nèi)菌溶液的混濁度與菌數(shù)量成正比

（1）制標(biāo)準(zhǔn)曲線(xiàn)（OD~No）（2）測(cè)菌液濁度，查圖表得出細(xì)菌數(shù)量濁度儀或721分光光度儀（二）間接計(jì)數(shù)法(活菌計(jì)數(shù)法)提問(wèn)：前述方法中計(jì)數(shù)的不都是活菌，如何分辨菌死活？繁殖提問(wèn)：細(xì)菌繁殖的可見(jiàn)現(xiàn)象是什么？產(chǎn)生菌落（固體培養(yǎng)基培養(yǎng)）、菌液混濁（液體培養(yǎng)基培養(yǎng)）計(jì)數(shù)原理：一個(gè)細(xì)菌可繁殖成一個(gè)菌落或一群細(xì)菌.缺點(diǎn)：慢

分固體培養(yǎng)法和液體培養(yǎng)法無(wú)菌水1.

稀釋平板計(jì)數(shù)法—固體培養(yǎng)法第一步：菌樣巧妙稀釋得到不同稀釋度（10-x）菌液菌樣被無(wú)菌水不同稀釋倍率后平板培養(yǎng)圖

10-210-3

10-410-5

各取1ml，均勻涂布于冷固體培養(yǎng)基平板上或與溫?zé)嵋簯B(tài)固體培養(yǎng)基混合冷卻。第三步：培養(yǎng)稀釋度過(guò)低，菌落密集無(wú)法計(jì)數(shù)可以計(jì)數(shù)，但數(shù)量過(guò)多，費(fèi)時(shí)費(fèi)力數(shù)量合適，統(tǒng)計(jì)計(jì)算，作為結(jié)果數(shù)量太少，誤差因素太大，不做計(jì)數(shù)第二步：接種平板每一個(gè)細(xì)菌會(huì)生成一個(gè)菌落一般計(jì)數(shù)平板的細(xì)菌生長(zhǎng)菌落數(shù)以30~300個(gè)為宜。第四步：計(jì)數(shù)細(xì)菌數(shù)量=？細(xì)菌數(shù)量=數(shù)出的菌落數(shù)/稀釋度例如：10-5稀釋度時(shí)菌落數(shù)為125個(gè)細(xì)菌數(shù)量=125/10-5=1.25×107個(gè)/mL

平板計(jì)數(shù)法是采用最廣的一種活菌計(jì)數(shù)法如國(guó)標(biāo)法水中細(xì)菌總數(shù)的測(cè)定。注意：作空白及取平行樣（2～3組）均值減小誤差平均2.稀釋液體計(jì)數(shù)法特點(diǎn)：液體培養(yǎng)、統(tǒng)計(jì)學(xué)查表計(jì)數(shù)又稱(chēng)MPN法（或最可能數(shù)法）MostProbableNumber例如測(cè)定SRB（硫酸鹽還原菌，厭氧）的數(shù)量提問(wèn)：能用稀釋平板法計(jì)數(shù)嗎？為什么？一般不能，厭氧菌暴露在空氣中不能生長(zhǎng)（除非厭氧培養(yǎng)箱）對(duì)這類(lèi)菌可以利用它們生長(zhǎng)時(shí)產(chǎn)生的硫化亞鐵黑色特征進(jìn)行深層隔氧液體培養(yǎng)，按MPN法進(jìn)行計(jì)數(shù)。

332010-4

10-5

10-63

10-

10-210-3

10-410-5（1）稀釋?zhuān)?）稀釋接種樣品在液體表面加一層無(wú)菌液體石蠟隔絕氧氣，恒溫37℃培養(yǎng)14天記錄變黑的試管情況（3）培養(yǎng)1ml+9ml培養(yǎng)基提問(wèn)：為什么有些試管變黑有些沒(méi)有？稀釋程度、取樣概率(4)統(tǒng)計(jì)－查表－計(jì)算

根據(jù)不同稀釋度變黑試管①統(tǒng)計(jì)出數(shù)量指標(biāo)三位數(shù)及其中最低稀釋度（取變黑的管數(shù)最多、稀釋度又最低的生長(zhǎng)管數(shù)，為第一位數(shù)字，后面兩個(gè)稀釋度的生長(zhǎng)管數(shù)后兩位數(shù)）提問(wèn)：上例情況而言統(tǒng)計(jì)數(shù)量是幾？②查表表——MPN表32010-4MPN三管法測(cè)數(shù)統(tǒng)計(jì)表水中大腸菌群、鐵細(xì)菌、硝化菌、亞硝化菌也用這種方法進(jìn)行數(shù)量統(tǒng)計(jì)。個(gè)菌/毫升細(xì)菌最可能數(shù)——通過(guò)其他精確的計(jì)數(shù)法，確定的各種數(shù)量指標(biāo)時(shí)細(xì)菌數(shù)量的最可能值上面例子中數(shù)量指標(biāo)“320”對(duì)應(yīng)的細(xì)菌最可能數(shù)為9.5個(gè)菌/毫升，最低稀釋度為10-4，折算出樣品中菌濃度為

？個(gè)菌/毫升。3.薄膜計(jì)數(shù)法薄膜——微孔濾膜（φ0.45um）（2）濾膜培養(yǎng)膜有菌面沖上原理——膜抽濾（細(xì)菌濃縮）+膜平板培養(yǎng)

+

計(jì)數(shù)（1）抽濾（濾器及膜事先滅菌）（3）統(tǒng)計(jì)計(jì)數(shù)提問(wèn)：假如測(cè)出250個(gè)菌落，抽濾了50ml自來(lái)水，自來(lái)水中菌濃度是多少呢？

250÷50ml=5個(gè)/ml自來(lái)水樣品中的細(xì)菌數(shù)量=菌落數(shù)÷抽濾樣品的體積數(shù)要求——樣品潔凈如空氣或飲用水。？堵孔、菌太多難以分散提問(wèn)：如何用活菌計(jì)數(shù)法測(cè)定較臟的水樣？減少濾液體積、無(wú)菌水稀釋(三)重量法提問(wèn)：已知什么條件通過(guò)測(cè)定細(xì)菌群體重量知道其數(shù)量？已知單個(gè)細(xì)菌的平均重量除法計(jì)算細(xì)菌的濕重量＝10-15~10-11g/個(gè)細(xì)胞干重約為濕重的10％~20％。1.干重法方法：含菌水樣在105～110℃下進(jìn)行干燥恒重（本質(zhì)測(cè)水中懸浮物重量MLSS或MLVSS）。懸浮物＝無(wú)機(jī)物+有機(jī)物（包括細(xì)菌）提問(wèn)：如何確定懸浮物中有機(jī)物與無(wú)機(jī)物的量？高溫(550℃)灼燒

無(wú)機(jī)物化學(xué)性質(zhì)穩(wěn)定，高溫下不會(huì)分解提問(wèn)：什么情況下可以直接用懸浮物的重量表示細(xì)菌的重量？懸浮物中絕大多數(shù)是細(xì)菌。（1）懸浮物中絕大多數(shù)為細(xì)菌時(shí)細(xì)胞數(shù)目=MLSS÷個(gè)體細(xì)菌的平均干重量離心沉淀濾膜過(guò)濾計(jì)算105~110℃下進(jìn)行干燥恒重稱(chēng)重或MLSS懸浮物（2）除細(xì)菌外還有大量無(wú)機(jī)懸浮物時(shí)

W無(wú)MLVSS揮發(fā)性懸浮物＝MLSS

－W無(wú)

=細(xì)菌群體的干重量細(xì)胞數(shù)目=

MLVSS÷個(gè)體細(xì)菌的平均干重量

550℃下灼燒2h稱(chēng)重105~110℃下進(jìn)行干燥恒重稱(chēng)重MLSS（3）有大量非細(xì)菌有機(jī)懸浮物時(shí)提問(wèn)：如何測(cè)定呢？不能用重量法，應(yīng)改用其他方法?？傮w來(lái)說(shuō)重量法方法誤差較大，