淺談清潔級(jí)小鼠的飼養(yǎng)管理

淺談清潔級(jí)小鼠的飼養(yǎng)管理

由于老鼠繁殖迅速，飼養(yǎng)成本低，在控制微生物、寄生蟲和動(dòng)物遺傳方面制定了明確的質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)。因此，它是科學(xué)研究中使用最廣泛的實(shí)驗(yàn)動(dòng)物，在人類疾病研究中的應(yīng)用在各個(gè)領(lǐng)域都得到了廣泛應(yīng)用。隨著科學(xué)技術(shù)的飛速發(fā)展,雖然各種近交系小鼠、基因突變小鼠、轉(zhuǎn)基因小鼠等不斷出現(xiàn),但是,應(yīng)用數(shù)量最多的還是封閉群小鼠及部分常用近交系小鼠。清潔級(jí)小鼠是屏障環(huán)境飼養(yǎng)的實(shí)驗(yàn)動(dòng)物,由于其不攜帶人畜共患疾病、嚴(yán)重干擾實(shí)驗(yàn)和主要潛在感染病原體,能達(dá)到一般科研和檢驗(yàn)基本要求,所以成為目前國(guó)內(nèi)主要推廣使用的實(shí)驗(yàn)動(dòng)物級(jí)別。筆者近年來,先后從事KM小鼠和BALB/c小鼠飼養(yǎng)管理,結(jié)合本單位實(shí)際情況,在人員培訓(xùn)、制度完善、設(shè)施管理、質(zhì)量控制等方面,積累了一些經(jīng)驗(yàn)?，F(xiàn)將這兩種小鼠的生產(chǎn)繁殖和質(zhì)量控制經(jīng)驗(yàn)總結(jié)如下。1加強(qiáng)從業(yè)人員的職業(yè)道德教育技術(shù)人員及飼養(yǎng)人員的定期培訓(xùn)是動(dòng)物質(zhì)量保證的前提。培訓(xùn)內(nèi)容包括業(yè)務(wù)學(xué)習(xí)和職業(yè)道德教育。我們的技術(shù)人員及飼養(yǎng)人員在上崗前都要先進(jìn)行崗前培訓(xùn),培訓(xùn)一般分為從業(yè)人員崗位培訓(xùn)和單位定期的內(nèi)部技術(shù)培訓(xùn)。所有飼養(yǎng)管理人員均經(jīng)過本省實(shí)驗(yàn)動(dòng)物管理委員會(huì)實(shí)驗(yàn)動(dòng)物從業(yè)人員崗位資格培訓(xùn),考試合格取得崗位證書。內(nèi)部培訓(xùn)按照單位飼養(yǎng)技術(shù)人員培訓(xùn)計(jì)劃,每季度進(jìn)行一次集中培訓(xùn),并進(jìn)行相應(yīng)考試考核,培訓(xùn)經(jīng)歷和考核成績(jī)進(jìn)入本人業(yè)務(wù)檔案。對(duì)于飼養(yǎng)人員不僅要掌握實(shí)驗(yàn)動(dòng)物的生物特征、生活習(xí)性,還要掌握基本的遺傳學(xué)和微生物學(xué)知識(shí)。這樣才有助于掌握實(shí)驗(yàn)動(dòng)物的生產(chǎn)、繁育、隔離、消毒等專業(yè)技術(shù),不斷總結(jié)交流,提高專業(yè)技術(shù)能力。職業(yè)道德的教育不僅要培養(yǎng)飼養(yǎng)人員高度的責(zé)任心,還要教育他們有愛心。因?yàn)槿祟惤】导案＠难芯侩x不開實(shí)驗(yàn)動(dòng)物,它們是人類的“替難者”,實(shí)驗(yàn)動(dòng)物為人類所做出的貢獻(xiàn)是無法用語(yǔ)言來衡量的。我們應(yīng)當(dāng)尊重和愛護(hù)它們。同時(shí),只有克服種種不利因素,確保滿足動(dòng)物的生理和福利需求,才能保證動(dòng)物本身的質(zhì)量。2保證實(shí)驗(yàn)動(dòng)物的生長(zhǎng)環(huán)境清潔動(dòng)物與SPF(無特定病原體)動(dòng)物一樣,飼養(yǎng)在屏障環(huán)境設(shè)施內(nèi)。如果管理不嚴(yán),環(huán)境受到病原生物的污染,就會(huì)直接影響動(dòng)物,造成不可挽回的損失。為了保證實(shí)驗(yàn)動(dòng)物生長(zhǎng)繁育的環(huán)境需求,依據(jù)相關(guān)國(guó)家標(biāo)準(zhǔn)的規(guī)定,清潔級(jí)小鼠必須飼養(yǎng)在相對(duì)無菌的屏障環(huán)境。因此,必須加強(qiáng)屏障設(shè)施的管理。2.1動(dòng)物照明及加強(qiáng)責(zé)任管理空氣潔凈級(jí)別達(dá)到7級(jí)、溫度20～26℃,濕度40%～70%,壓力差20～50Pa,動(dòng)物照明15-20Lx,氨濃度指標(biāo)控制在14mg/m3以下。根據(jù)飼養(yǎng)規(guī)程,要求每日清理衛(wèi)生,清理干凈后,用消毒液擦地。必要時(shí),同時(shí)用同一種消毒液噴霧消毒。2.2定期灑水、消毒屏障環(huán)境外圍的衛(wèi)生同樣重要。因?yàn)樗c屏障環(huán)境緊密相連,如果外環(huán)境衛(wèi)生較差,存在野鼠、蟑螂、蚊蠅等,則很容易累及內(nèi)環(huán)境。所以,每天用消毒液擦拭走廊及出入口的窗臺(tái)、地面,每周徹底清掃、消毒一次,做到窗明幾凈不留死角。夏天最好使用有氣味的消毒液,可使昆蟲遠(yuǎn)離。2.3空氣過濾器每周更換初效空氣過濾介質(zhì)兩次,每月更換中效空氣過濾介質(zhì)一次,大風(fēng)或揚(yáng)塵天氣增加更換次數(shù)。高效空氣過濾器每年更換一次?？照{(diào)、高壓鍋、送排風(fēng)機(jī)等設(shè)備定期檢修、保養(yǎng),詳細(xì)記錄,確保其正常運(yùn)行。3消毒、干燥、超濾、除灰3.1飼養(yǎng)員嚴(yán)禁進(jìn)入其它飼養(yǎng)區(qū),以防交叉感染。非飼養(yǎng)人員嚴(yán)禁進(jìn)入飼養(yǎng)設(shè)施,認(rèn)真填寫人員飼進(jìn)出養(yǎng)樓記錄。3.2人員的進(jìn)出工作人員在進(jìn)入飼養(yǎng)樓即更換拖鞋,工作服。在進(jìn)入屏障環(huán)境前先檢查水電壓力差,一切正常后,用肥皂流動(dòng)水洗手三遍,進(jìn)入屏障環(huán)境。二次更換隔離衣、潔凈拖鞋、戴無菌口罩、手套,進(jìn)入清潔走廊。進(jìn)入屏障環(huán)境后應(yīng)遵循清潔走廊-飼養(yǎng)室-污物走廊單向流動(dòng)的原則。出屏障環(huán)境后再次檢查水電、壓力差正常后方可離開。3.3物品的進(jìn)出原則是能耐高溫的用高壓蒸汽消毒,不能耐高溫的根據(jù)實(shí)際情況消毒液浸泡、紫外線照射或經(jīng)消毒液渡槽進(jìn)入屏障環(huán)境。物品的存放時(shí)間不超過一周。3.4動(dòng)物的進(jìn)出新引進(jìn)的動(dòng)物先入觀察室,待檢疫合格后移入屏障環(huán)境。發(fā)出的動(dòng)物,無菌包裝后,經(jīng)過待發(fā)室專用傳遞窗傳出。3.5飼養(yǎng)人員每天詳細(xì)記錄飼養(yǎng)室溫度、濕度、壓力差等環(huán)境參數(shù),以確保動(dòng)物的最適宜環(huán)境。在3月中旬和11月的上旬是氣溫變化最大的時(shí)期,在這個(gè)時(shí)期要特別注意氣溫的變化及時(shí)調(diào)節(jié)飼養(yǎng)室溫度和濕度。曾經(jīng)因?yàn)楹雎粤丝諝鉂穸?而造成小鼠卷尾,乳母咬仔,導(dǎo)致繁殖性能降低。因此,環(huán)境的控制是保證動(dòng)物健康生長(zhǎng)的重要條件之一。3.6飼料原糧的質(zhì)量是保證實(shí)驗(yàn)動(dòng)物正常生長(zhǎng)繁殖的重要環(huán)節(jié)。原糧要有良好的衛(wèi)生質(zhì)量,經(jīng)測(cè)試無毒害后方可加工使用。2001年9月本單位曾經(jīng)由于飼喂含有三聚氫胺魚粉的飼料而發(fā)生動(dòng)物中毒,鼠群中尤以繁殖種鼠中毒癥狀嚴(yán)重。導(dǎo)致少量動(dòng)物死亡,產(chǎn)仔率降低。因此,飼料原料采購(gòu)每批應(yīng)做安全性試驗(yàn)。由于BALB/c小鼠對(duì)營(yíng)養(yǎng)的要求很高,所以我們?cè)陲暳现屑尤肓诉m量的雞蛋和豬油。飼料經(jīng)132℃,4min高壓蒸汽滅菌干燥5min后使用。3.7飲水自來水經(jīng)超濾處理后配制成PH=2.5～3.0的酸化水。超濾后的水檢測(cè)完全符合無菌標(biāo)準(zhǔn),但是,考慮到水流經(jīng)的管道容易污染,因此采用酸化水,雙重保險(xiǎn)。酸化水靜置24h后使用。3.8墊料首選玉米秸稈,其次選擇無毒、無異味、吸濕性好、無油脂、粉塵少的非松木刨花。墊料在使用之前先過篩,將粉塵和粗大玉米秸稈、刨花去掉。再經(jīng)132℃,5min高壓蒸汽滅菌干燥4min后使用。4動(dòng)物清理、消毒和飼養(yǎng)4.1繁殖鼠盒和育成鼠盒每周更換墊料兩次,換上經(jīng)洗刷消毒過的鼠盒和墊料。換出的廢墊料,袋裝后經(jīng)污物走廊及時(shí)傳出,以免產(chǎn)生臭味。4.2清理的過程中,每更換6～7個(gè)鼠盒在消毒液里清洗一下手套,以防止交叉污染。4.3換窩過程中仔細(xì)觀察小鼠,如果發(fā)現(xiàn)可疑傷病動(dòng)物,立即將其移出飼養(yǎng)室,待查原因。清理?yè)Q窩過程中,如果有動(dòng)物掉到地上,不再放回鼠盒,隨污物傳出室外,淘汰處理。4.4檢查添加飼料,不可一次添得過多,一般繁殖盒吃2～3d,群養(yǎng)盒1天。以保持飼料的新鮮和避免浪費(fèi)。掉到地上的飼料不可再用,清掃收集傳出室外。4.5每周給繁殖盒的動(dòng)物添加1～2次經(jīng)高壓消毒的葵花籽。4.6每天檢查水瓶有無漏水,漏水鼠盒及時(shí)更換墊料。飲水瓶?jī)?nèi)水用完后,及時(shí)換上新瓶,舊瓶收集后清洗消毒備用,避免在飲水瓶中反復(fù)添加飲水使用。4.7對(duì)繁殖種鼠詳細(xì)做好記錄,包括雌雄號(hào)、配種時(shí)間、配種比例、胎次、仔鼠出生時(shí)間、出生數(shù)、離乳日期等。近交系還應(yīng)記錄繁殖代數(shù)、親本編號(hào)、仔鼠的雌雄個(gè)數(shù)。離乳仔鼠盒記錄出生時(shí)間、離乳日期、性別、數(shù)量。4.8動(dòng)物發(fā)出時(shí)嚴(yán)格按實(shí)驗(yàn)者的要求,選擇性別、體重、數(shù)量指標(biāo)相符的小鼠。供應(yīng)小鼠一經(jīng)拿出飼養(yǎng)區(qū),嚴(yán)禁返回。4.9工作完畢經(jīng)污染走廊出屏障環(huán)境。清除的墊料隨即移出屏障環(huán)境,不延期存放。5根據(jù)需求提前制定周密計(jì)劃根據(jù)用戶使用計(jì)劃,動(dòng)物生產(chǎn)計(jì)劃的制定在需求量的基礎(chǔ)上要有一定的剩余。動(dòng)物數(shù)量隨計(jì)劃而及時(shí)調(diào)整。如果動(dòng)物的生產(chǎn)一程不變,過少會(huì)造成動(dòng)物的短缺影響用動(dòng)物單位的正常使用,而生產(chǎn)過量不僅會(huì)增加飼養(yǎng)員的工作量,使工作程序不夠細(xì)致更會(huì)造成動(dòng)物成本的提高,導(dǎo)致經(jīng)濟(jì)損失,所以實(shí)驗(yàn)動(dòng)物的生產(chǎn)量要根據(jù)需求量提前制定周密計(jì)劃。保證需求避免造成浪費(fèi)。6生產(chǎn)和繁殖6.1選擇方法種鼠的選擇標(biāo)準(zhǔn)是:胎次間隔短、仔鼠成活率高,外觀健康活潑,體質(zhì)強(qiáng)壯,生殖器正常,軀干均勻的小鼠。6.1.1喪失種群的檢測(cè)近交系動(dòng)物保種繁殖如果不完善,會(huì)造成近交系遺傳組成發(fā)生變化,失去原有的遺傳特征和應(yīng)用價(jià)值,還會(huì)導(dǎo)致我們喪失種群。BALB/c小鼠的每對(duì)種鼠都必須是全同胞兄妹,都要有自己的繁殖卡片、譜系圖和譜系記錄本,使選擇兄妹交配準(zhǔn)確無誤。在擴(kuò)大群和生產(chǎn)群選種時(shí)必需嚴(yán)格限制繁殖代數(shù),確保品系的遺傳質(zhì)量不發(fā)生偏移。否則供應(yīng)給研究者的實(shí)驗(yàn)動(dòng)物在遺傳質(zhì)量上會(huì)出現(xiàn)差異,影響科研人員的研究結(jié)果。6.1.2選擇1000kg大鼠的原則是隨機(jī)混合，避免混合附近的移植大群飼養(yǎng)繁殖選種采用每個(gè)繁殖籠架留雌不留雄,留雄不留雌的原則。6.2鼠的放養(yǎng)與繁殖6.2.1BALB/c小鼠的繁殖采用基礎(chǔ)群→血緣擴(kuò)大群→生產(chǎn)群(四代繁殖法)。6.2.2KM小鼠采用隨機(jī)交配繁殖法,每盒采用1∶1(♂∶♀)交配。6.2.3一般小鼠產(chǎn)仔能力較強(qiáng),一般每胎均會(huì)超過10只以上。飼養(yǎng)人員及時(shí)檢查,每窩最多留8只仔鼠讓母鼠哺乳。以保證仔鼠發(fā)育良好,體重均一。6.2.4根據(jù)動(dòng)物使用計(jì)劃,飼育人員淘汰仔鼠時(shí),首先判斷其性別,保留使用計(jì)劃中所需要的動(dòng)物性別。7清潔級(jí)實(shí)驗(yàn)動(dòng)物的生產(chǎn)和質(zhì)量控制隨著我國(guó)科技和社會(huì)經(jīng)濟(jì)的不斷發(fā)展,對(duì)實(shí)驗(yàn)動(dòng)物需求的數(shù)量和質(zhì)量不斷提高。實(shí)驗(yàn)動(dòng)物的生產(chǎn)供應(yīng)必然朝著專業(yè)化、社會(huì)商品化和標(biāo)準(zhǔn)化方向發(fā)展。作為實(shí)驗(yàn)動(dòng)物的管理人員和飼養(yǎng)人員,我們不僅需要高度的責(zé)任心,保證動(dòng)物的數(shù)量和質(zhì)量。同時(shí)更需要科學(xué)管理措施和嚴(yán)格的規(guī)章制度。本單位自1997年開始生產(chǎn)清潔級(jí)小鼠,經(jīng)過長(zhǎng)期實(shí)踐,已經(jīng)在人員培訓(xùn)、科學(xué)管理、嚴(yán)格制定操作細(xì)則和定期總結(jié)提高等方面積累了一些經(jīng)驗(yàn)。每年生產(chǎn)供應(yīng)清潔級(jí)實(shí)驗(yàn)小鼠10余萬只,每季對(duì)實(shí)驗(yàn)動(dòng)物微生物、寄生蟲進(jìn)行常規(guī)檢測(cè),全部符合清潔級(jí)實(shí)驗(yàn)小鼠微生物、寄生蟲學(xué)等級(jí)標(biāo)準(zhǔn)要求。未發(fā)生過動(dòng)物病原體感染和重大事故。同時(shí)培養(yǎng)了一個(gè)熱愛本職工作,有團(tuán)結(jié)協(xié)作和奉獻(xiàn)精神的工作團(tuán)隊(duì)。200