牛黃解毒片的綜合質(zhì)量檢測(cè)（中藥制劑檢測(cè)課件）

牛黃解毒片的綜合質(zhì)量檢測(cè)【實(shí)訓(xùn)目的】1.能依據(jù)《中國(guó)藥典》對(duì)六味地黃丸進(jìn)行全面檢驗(yàn)。2.能判斷六味地黃丸的質(zhì)量狀況，能正確填寫相關(guān)檢驗(yàn)原始記錄及檢驗(yàn)報(bào)告單?！緦?shí)訓(xùn)內(nèi)容】（一）實(shí)訓(xùn)用品1.儀器：高效液相色譜儀（紫外檢測(cè)器）、超聲波提取器、C18色譜柱、微量注射器（10μl）、電子天平、水浴鍋、分液漏斗、蒸發(fā)皿、乳缽、硅膠G薄層板、展開缸、古蔡法測(cè)砷裝置等。試劑：標(biāo)準(zhǔn)砷試液（lμgAs/ml）、碘化鉀試液、酸性氯化亞錫試液、醋酸鉛棉花、鋅粒、溴化滎試紙、正己烷、乙酸乙酯、甲醇、醋酸、1%香草醛硫酸、三氯甲烷、乙醇、10%硫酸乙醇、乙醚、石油醚、甲酸乙酯、甲酸丁酮、甲酸、甲醇（色譜純）、磷酸等。3.材料：牛黃解毒片、膽酸對(duì)照品、大黃對(duì)照藥材、黃芩苷對(duì)照品、大黃素對(duì)照品。（二）實(shí)訓(xùn)方法牛黃解毒片由人工牛黃、雄黃、石膏、大黃、黃芩、桔梗、冰片、甘草八味中藥制成的素片、糖衣片或薄膜衣片。本實(shí)訓(xùn)依據(jù)《中國(guó)藥典》利用顯微鑒別方法觀察大黃、雄黃的顯微特征；利用冰片的升華特性進(jìn)行鑒別；使用膽酸對(duì)照品、大黃對(duì)照藥材、大黃素對(duì)照品、黃芩苷對(duì)照品進(jìn)行薄層色譜鑒別；牛黃解毒片中含有雄黃，主要成分As2S2，為保證制劑的安全性，要對(duì)制劑進(jìn)行砷鹽檢。依據(jù)制劑通則中有關(guān)片劑項(xiàng)下的規(guī)定，進(jìn)行重量差異、崩解時(shí)限等檢查；利用高效液相色譜法測(cè)定黃芩苷的含量。（三）實(shí)訓(xùn)步驟1.查閱資料，設(shè)計(jì)方案查閱《中國(guó)藥典》正文566-567頁(yè)及相應(yīng)附錄部分，設(shè)計(jì)檢驗(yàn)方案。2.取樣按檢驗(yàn)要求取樣，并記錄品名、批號(hào)、規(guī)格、數(shù)量、來(lái)源等內(nèi)容。然后根據(jù)需要進(jìn)行適宜處理。一般片劑成品取樣量200片，未成片前可取已制成的顆粒100g。3.性狀素片或除去包衣后的包衣片顯棕黃色；有冰片香氣，味微苦、辛。4.鑒別（1）顯微鑒別：取本品2~3片，刮去包衣，置乳缽中研細(xì)；或用刀片直接從藥片斷面刮取少量粉末，按粉末制片法裝片觀察，應(yīng)有以下特征：草酸鈣簇晶大，直徑60~140μm（檢大黃）。不規(guī)則碎塊金黃色或橙黃色，有光澤（檢雄黃）。（2）冰片的升華鑒別：取本品1片，研細(xì)，進(jìn)行微量升華，所得的白色升華物，加新配制的1%香草醛硫酸溶液1~2滴，液滴邊緣漸顯玫瑰紅色。（2）牡丹皮中丹皮酚的TLC鑒別：①供試品溶液的制備：取本品水蜜丸6g，研細(xì)；或取小蜜丸或大蜜丸9g，剪碎，加硅藻土4g，研。加乙醚40ml，回流1小時(shí)，濾過，濾液揮去乙醚，殘?jiān)颖?ml使溶解，即得。②對(duì)照品溶液的制備：取丹皮酚對(duì)照品，加丙酮制成每1ml含lmg的溶液，即得。③薄層色譜：吸取上述兩種溶液各10μ1，分別點(diǎn)于同一硅膠G薄層板上，以環(huán)己烷-乙酸乙酯（3：1）為展開劑，展開，取出，晾干，噴以鹽酸酸性5%三氯化鐵乙醇溶液，加熱至斑點(diǎn)顯色清晰。④結(jié)果判斷：供試品色譜中，在與對(duì)照品色譜相應(yīng)的位置上，顯相同的藍(lán)褐色斑點(diǎn)。5.常規(guī)檢查（1）水分：取六味地黃丸25g，破碎成碎片，平鋪于干燥至恒重的扁形稱量瓶中，厚度不超過5mm，精密稱定，打開瓶蓋在100~105℃干燥5小時(shí)，將瓶蓋蓋好，移置于干燥器中，冷卻30分鐘，精密稱定，再在上述溫度干燥1小時(shí)，冷卻，稱重，至連續(xù)兩次稱重的差異不超過5mg為止。根據(jù)減失的重量，計(jì)算六味地黃丸中含水量（％），不得過12.0%（水蜜丸）或15.0%（小蜜丸或大蜜丸）。（2）重量差異：①大蜜丸：以本品1丸為1份，取供試品10份，分別稱定重量，再與標(biāo)示重量相比較（9g），超出±6%的不得多于2份，并不得有1份超出±12%。②水蜜丸或小蜜丸：以本品10丸為1份，取10份，分別稱定重量，再與每份標(biāo)示重量相比較，超出±6%不得多于2份，并不得有1份超出±12%。（3）裝量：取六味地黃丸5個(gè)完整包裝，除去外蓋和標(biāo)簽，容器外壁用適宜的方法清潔并干燥，分別稱定重量，除去內(nèi)容物，容器用適宜的溶劑洗凈并干燥，再分別稱定空容器的重量，求出每個(gè)容器內(nèi)容物的裝量與平均裝量。平均裝量不得少于標(biāo)示裝量，且每個(gè)容器裝量不得少于標(biāo)示裝量的97%。如有1個(gè)容器裝量不符合規(guī)定，則另取3個(gè)復(fù)試，均應(yīng)符合規(guī)定。（4）溶散時(shí)限：取六味地黃丸6丸，分別置于升降崩解儀吊籃的玻璃管中，加擋板，啟動(dòng)崩解儀進(jìn)行檢，應(yīng)在1小時(shí)內(nèi)全部溶散且通過篩網(wǎng)。如有1丸不能完全溶散，應(yīng)另取6丸復(fù)試，均應(yīng)符合規(guī)定。如果供試品黏附擋板，應(yīng)另取6丸，不加擋板按上述方法檢，應(yīng)符合規(guī)定。（5）微生物限度：按微生物限度檢法依法檢查，應(yīng)符合下列規(guī)定：①細(xì)菌數(shù)：每lg不得過30000cfu。②霉菌和酵母菌數(shù)：每lg不得過100cfu。③大腸埃希菌：每lg不得檢出。④大腸菌群：每lg應(yīng)小于100個(gè)。⑤霉變、長(zhǎng)螨者以不合格論。6.含量測(cè)定按高效液相色譜法測(cè)定。（1）山茱萸1）色譜條件與系統(tǒng)適用性試驗(yàn)：以十八烷基硅烷鍵合硅膠為填充劑；以四氫呋喃-乙腈-甲醇-0.05%磷酸溶液（1：8：4：87）為流動(dòng)相；檢測(cè)波長(zhǎng)為236nm；柱溫40℃。理論板數(shù)按馬錢苷峰計(jì)算應(yīng)不低于4000

2）對(duì)照品溶液的制備：取馬錢苷對(duì)照品適量，精密稱定，加50%甲醇制成每1ml含20μg的溶液，即得。（3）雄黃的TLC鑒別：①供試品溶液的制備：取本品2片，研細(xì)，加三氯甲烷10ml研細(xì)，濾過，濾液蒸干，加乙醇0.5ml使溶解。②對(duì)照品溶液的制備：取膽酸對(duì)照品，加乙醇制成每1ml含lmg的溶液。③薄層色譜：吸取上述二種溶液各5μl，分別點(diǎn)于同一硅膠G薄層板上，以正己烷-乙酸乙酯-甲醇-醋酸（20：25：3：2）的上層溶液為展開劑，展開，取出，晾干，噴以10%硫酸乙醇溶液，在105℃加熱約10分鐘，置紫外光燈（365nm）下檢視。④結(jié)果判斷：供試品色譜中，在與對(duì)照品色譜相應(yīng)的位置上，顯相同顏色的熒光斑點(diǎn)。（4）大黃的TLC鑒別：①供試品溶液的制備：取本品1片，研細(xì)，加甲醇20ml，超聲處理15分鐘，濾過，取濾液10ml，蒸干，殘?jiān)铀?0ml使溶解，加鹽酸1ml，加熱回流30分鐘，放冷，用乙醚提取2次，每次20ml，合并乙醚液，蒸干，殘?jiān)尤燃淄?ml使溶解。②對(duì)照品溶液的制備：取大黃對(duì)照藥材0.1g，同法制成對(duì)照藥材溶液。再取大黃素對(duì)照品，加甲醇制成每1ml含lmg的溶液。③薄層色譜：吸取上述三種溶液各40，分別點(diǎn)于同一以羧甲基纖維素鈉為黏合劑的硅膠H薄層板上，以石油醚（30~60℃）-甲酸乙酯-甲酸（15：5：1）的上層溶液為展開劑，展開，取出，晾干，置紫外光燈（365nm）下檢視。④結(jié)果判斷：供試品色譜中，在與對(duì)照藥材色譜相應(yīng)的位置上，顯相同的5個(gè)橙黃色熒光主斑點(diǎn)；在與對(duì)照品色譜相應(yīng)的位置上，顯相同的橙黃色熒光斑點(diǎn)，置氨蒸氣中熏后，日光下檢視，斑點(diǎn)變?yōu)榧t色。（5）黃芩的TLC鑒別：①供試品溶液的制備：取本品4片，研細(xì)，加乙醚30ml，超聲處理15分鐘，濾過，棄去乙醚，濾渣揮盡乙醚，加甲醇30ml，超聲處理15分鐘，濾過，濾液蒸干，殘?jiān)铀?0ml，加熱使溶解，滴加鹽酸調(diào)節(jié)pH至2~3，加乙酸乙酯30ml振搖提取，分取乙酸乙酯液，蒸干，殘?jiān)蛹状?ml使溶解。②對(duì)照品溶液的制備：取黃芩苷對(duì)照品，加甲醇制成每1ml含lmg的溶液。③薄層色譜：吸取上述兩種溶液各5μl，分別點(diǎn)于同一以含4%醋酸鈉的羧甲基纖維素鈉溶液為黏合劑的硅膠G薄層板上，以乙酸乙酯-丁酮-甲酸-水（5：3：1：1）為展開劑，展開，取出，晾干，噴以1%三氯化鐵乙醇溶液。④結(jié)果判斷：供試品色譜中，在與對(duì)照品色譜相應(yīng)的位置上，顯相同顏色的斑點(diǎn)。5.檢查（1）砷鹽檢查：測(cè)試前，先于導(dǎo)氣管C中裝入醋酸鉛棉花60mg（裝管高度為60~80mm）；再于旋塞D的頂端平面上放一片溴化汞試紙（試紙大小以能覆蓋孔徑而不露出平面為宜），蓋上旋塞正并旋緊，即得。1）標(biāo)準(zhǔn)砷斑的制備：精密量取標(biāo)準(zhǔn)砷溶液2ml，置A瓶中，加鹽酸5ml與水21ml，再加碘化鉀試液5ml與酸性氯化亞錫試液5滴，在室溫放置10分鐘后，加鋅粒2g，立即將照上法裝妥的導(dǎo)氣管C密塞于A瓶上，并將A瓶置25~40℃水浴中反應(yīng)45分鐘，取出溴化汞試紙，即得。2）供試品的制備：取本品適量（包衣片除去包衣），研細(xì)，精密稱取1.52g，加稀鹽酸20ml，時(shí)時(shí)攪拌1小時(shí)，濾過，殘?jiān)孟←}酸洗滌2次，每次10ml，攪拌10分鐘。洗液與濾液合并，置500ml量瓶中，加水稀釋至刻度，搖勻。精密量取5ml，置10ml量瓶中，加水至刻度，搖勻，精密量取2ml，加鹽酸5ml與水21ml，照標(biāo)準(zhǔn)砷斑的制備，自“再加化鉀試液5ml”起，依法操作。將生成的砷斑與標(biāo)準(zhǔn)砷斑比較，不得更深。（2）重量差異檢查：按重量差異法操作，標(biāo)示片重（或平均片重）在0.3g以下的片劑，重量差異限度為±7.5%，標(biāo)示片重（或平均片重）在0.3g或0.3g以上的片劑，重量差異限度為±5%；超出重量差異限度的不得多于2片，并不得有1片超出限度一倍。（3）崩解時(shí)限檢查：照崩解時(shí)限檢查法檢，藥材原粉片各片均應(yīng)在30分鐘內(nèi)全部崩解；浸膏（半浸膏）片、糖衣片各片均應(yīng)在1小時(shí)內(nèi)全部崩解。微生物限度檢查：按微生物限度檢查法依法檢，應(yīng)符合下列規(guī)定：①細(xì)菌數(shù)：lg不得過30000cfu。②霉菌和酵母菌數(shù)：每lg不得過100cfu。③大腸菌群：每lg不超過100個(gè)。④大腸埃希菌、沙門菌不得檢出。6.黃芩苷的含量測(cè)定用高效液相色譜法測(cè)定。（1）色譜條件與系統(tǒng)適用性試驗(yàn)：用十八烷基硅烷鍵合硅膠為填充劑；以甲醇-水-磷酸（45：55：0.2）為流動(dòng)相；檢測(cè)波長(zhǎng)為315nm。理論板數(shù)按黃芩苷峰計(jì)算應(yīng)不低于3000。（2）對(duì)照品溶液的制備：取黃芩苷對(duì)照品適量，精密稱定，加甲醇制成每1ml中含30網(wǎng)的溶液，即得。供試品溶液的制備：取本品20片（包衣片除去包衣），精密稱定，研細(xì)，混勻，取6g，精密稱定，置錐形瓶中，加70%乙醇30ml，超聲處理（功率250W，頻率33kHz）20分鐘，放冷，濾過，濾液置100ml量瓶中，用少量70%乙醇分次洗滌容器和殘?jiān)?，洗液濾入同一量瓶中，加70%乙醇至刻度，搖勻，精密量取2ml，置10ml量瓶中，加70%乙醇至刻度，搖勻，即得?！緦?shí)訓(xùn)注意】1.升華法鑒別時(shí)，樣品粉末一般為0.5g，過少不易產(chǎn)生足夠的升華物。2.砷鹽檢查時(shí)，反應(yīng)溫度一般控制在25℃之間，時(shí)間為45分鐘。冬季氣溫低，可置溫水浴中進(jìn)行反應(yīng)。如反應(yīng)太快，則宜適當(dāng)降低反應(yīng)溫度，使砷化氫氣體能被均勻吸收。制備標(biāo)準(zhǔn)砷斑或標(biāo)準(zhǔn)砷對(duì)照液，應(yīng)與供試品檢查同時(shí)進(jìn)行。因砷斑不穩(wěn)定，反應(yīng)中應(yīng)保持干燥及避光，并立即比較。標(biāo)準(zhǔn)砷溶液應(yīng)于實(shí)訓(xùn)當(dāng)天配制，標(biāo)準(zhǔn)砷貯備液存放時(shí)間不宜超過一年。砷鹽檢查時(shí)，浸入乙醇制溴化汞試液的濾紙的質(zhì)量，對(duì)生成砷斑的色澤有影。必須選用質(zhì)量較好、組織疏松的中速定量濾紙，以使所顯砷斑色調(diào)鮮明，梯度規(guī)律。不宜使用定性濾紙，否則所顯砷斑色暗，深淺梯度無(wú)規(guī)律；溴化汞試紙宜新鮮制備。砷鹽檢查時(shí)，《中國(guó)藥典》規(guī)定標(biāo)準(zhǔn)砷斑為2ml標(biāo)準(zhǔn)砷溶液（相當(dāng)于2μg的砷）所形成的色斑。供試品規(guī)定含砷限量不同時(shí)，采用改變供試品取用量的方法來(lái)適應(yīng)要求，而不采用改變標(biāo)準(zhǔn)砷溶液取量的方法。1.HPLC中常用的定量方法有幾種？外標(biāo)法、內(nèi)標(biāo)法定量時(shí)有何優(yōu)缺點(diǎn)？2.砷鹽檢的原理是什么？加入KI、SnCl2、Pb(Ac)2棉花的作用是什么？【實(shí)訓(xùn)思考】記錄實(shí)訓(xùn)現(xiàn)象及檢驗(yàn)結(jié)果，分析實(shí)訓(xùn)現(xiàn)象并將檢驗(yàn)結(jié)果與藥品標(biāo)準(zhǔn)相比較，判斷供試品是否符合規(guī)定?！緦?shí)訓(xùn)報(bào)告】【實(shí)訓(xùn)評(píng)價(jià)】考核內(nèi)容