高級內(nèi)科學(xué)-肝癌誘導(dǎo)分化治療與轉(zhuǎn)化研究完整版

肝癌誘導(dǎo)分化治療與轉(zhuǎn)化研究提出一個問題往往比解決一個問題更重要。提出新的問題，新的可能性，從新的角度去看舊的問題，需要創(chuàng)造性的想象，而且標(biāo)志著科學(xué)的真正進步?？偰繕?biāo)：解決某一疾病某一方面的疑難問題具體目標(biāo)：哪個疾?。渴裁磫栴}？研究基礎(chǔ)？現(xiàn)有條件？

臨床

基礎(chǔ)明確研究方向確立工作重點臨床基礎(chǔ)慢性肝病的基礎(chǔ)和臨床研究消化內(nèi)鏡微創(chuàng)檢查和治療肝纖維化研究的重要性現(xiàn)代肝病學(xué)奠基人HansPopper教授指出：

“誰能阻止或延緩肝纖維化的發(fā)生，誰就將治愈大多數(shù)慢性肝病。"

迄今為止，還沒有一種藥物被批準(zhǔn)用于治療肝纖維化。死亡慢性感染肝纖維化肝硬化肝癌常用指標(biāo)：

膠原：PШP、

Ш前膠原、層粘連蛋白、Ⅳ型膠原、Ⅵ型膠原等膠原相關(guān)酶：脯氨酰羥化酶等

糖胺多糖類：透明質(zhì)酸等

肝纖維化4項：透明質(zhì)酸、Ⅳ型膠原、人PШP、層粘連蛋白存在問題

敏感性高，特異性差非肝臟特異性主要反映基質(zhì)更新而非其沉積受影響因素多：肝內(nèi)外炎癥活動等肝纖維化血清學(xué)標(biāo)志物發(fā)表SCI論著30多篇Hepatology,2009IF10.8Gut，2010IF10.6JournalofHepatology,2009IF9.3AmericanJournalofGastroenterologyIF6.1

明確MAPK、PDGF、PAI-1和uPA等在肝纖維化中的作用為肝纖維化治療提供新的靶點潛在的臨床應(yīng)用前景

肝纖維化發(fā)病機制和治療研究

上海市科技進步獎一等獎（2009）

肝纖維化發(fā)病機制及治療研究

謝渭芬陳岳祥林勇施健尹川胡平方曾欣鐘巍鄧星獲獎情況研究局限性研究呈并聯(lián)式，不夠深入，缺乏臨床應(yīng)用前景。種一次僅收獲一次HuangP,etal.Nature2011;475:386-389SekiyaS,etal.Nature2011;475:390-393

LemaigreF&ZaretKS.CurrOpinGenetDev,2004;14:582-590肝細(xì)胞核因子

（Hepatocytenuclearfactors,HNFs）

在肝細(xì)胞優(yōu)勢表達(dá)對肝臟發(fā)育和功能維持起關(guān)鍵作用的轉(zhuǎn)錄因子包括HNF1、HNF3、HNF4、HNF6及C/EBP等調(diào)控人HNF4α基因表達(dá)促進移植肝細(xì)胞分化功能（2005年）肝細(xì)胞核因子網(wǎng)絡(luò)調(diào)控系統(tǒng)KulkarniRN,etal.Science2004;303:1311-1312

HNF4α誘導(dǎo)肝癌細(xì)胞向肝細(xì)胞分化∴∴∴∴∴∴∴∴∴∴∴∴∴∴∴∴∴∴∴∴HNF4aHepatologyApoptosisHNF4a全反式維甲酸（ATRA）誘導(dǎo)急性早幼粒細(xì)胞白血?。ˋPL）細(xì)胞向成熟粒細(xì)胞分化王振義院士1985年首次應(yīng)用ATRA治療APL獲得成功ATRA聯(lián)合化療初治APL，80%以上患者獲得長期緩解甚至治愈凱特林獎評委會：王振義教授是“人類癌癥治療史上應(yīng)用誘導(dǎo)分化療法獲得成功的第一人”HuangME,etal.Blood.1988;72:567-572FenauxPetal.Blood.1999;94:1192-1200SanzMA.Hematology.2006;147-155腫瘤誘導(dǎo)分化治療的經(jīng)典范例1927：發(fā)現(xiàn)晚期膠質(zhì)母細(xì)胞瘤自發(fā)轉(zhuǎn)變?yōu)榱夹阅z質(zhì)細(xì)胞瘤CushingH,WolbaSB.AmJPathol.1927;3:203-2161959：畸胎癌細(xì)胞向良性細(xì)胞轉(zhuǎn)化PierceGB,DixonFJ.Cancer(Phila.).1959;12:573-589.PierceGB,etal.LabInvest.1960;9:583-602.PierceGB,VerneyEL.Cancer(Phila.).1961;14:1017-10291961：首先提出分化治療惡性腫瘤的概念PierceGB.CanCancerConf.1961;4:119-137誘導(dǎo)分化治療（DifferentiationTherapy）通過誘導(dǎo)劑促進腫瘤細(xì)胞向成熟階段分化，抑制惡性腫瘤細(xì)胞的增殖。王振義院士：“教育”腫瘤細(xì)胞向正常細(xì)胞轉(zhuǎn)化讓腫瘤細(xì)胞“棄惡從善”或“改邪歸正”腫瘤分化治療（DifferentiationTherapyoftumor）肝細(xì)胞核因子能否用于誘導(dǎo)分化治療肝癌？∴∴∴∴∴∴∴∴∴∴∴∴∴∴∴∴∴∴∴∴HNF4aHepatologyApoptosisHNF4aReductionofHNF4ainHCCtissuesYinC,LinY,etal.Hepatology2008;48:1528-1539HNF4α抑制肝癌細(xì)胞體外克隆形成肝癌細(xì)胞株Hep3B分別感染HNF4a腺病毒和對照病毒HNF4a消除肝癌細(xì)胞體內(nèi)成瘤性

HNF4a抑制肝癌種植瘤生長裸鼠皮下種植瘤內(nèi)注射HNF4a腺病毒載體和對照病毒YinC,LinY,etal.Hepatology2008;48:1528-1539HNF4aGFPPBSHNF4a治療肝臟轉(zhuǎn)移瘤脾靜脈注射肝癌細(xì)胞，制備肝臟轉(zhuǎn)移癌模型3天后經(jīng)尾靜脈注射HNF4a腺病毒或?qū)φ詹《綴inC,LinY,etal.Hepatology2008;48:1528-1539肝臟種植肝癌細(xì)胞，制備原位肝癌模型10天后經(jīng)尾靜脈注射HNF4α腺病毒或?qū)φ詹《?/p>

HNF4α根除肝臟原位種植瘤shorttermlongtermshorttermlongterm治療腫瘤干細(xì)胞的臨床意義確定腫瘤干細(xì)胞的特定標(biāo)記或其信號通路，用特異性的藥物殺滅腫瘤干細(xì)胞誘導(dǎo)其分化，使其喪失自我更新的能力（誘導(dǎo)分化治療）

治療腫瘤干細(xì)胞策略

MassardC,etal.AnnalsofOncology2006;17:1620-1624HNF4α誘導(dǎo)肝癌干細(xì)胞分化CD133CD90YinC,LinY,etal.Hepatology2008;48:1528-1539HNF4α誘導(dǎo)肝癌細(xì)胞及其干細(xì)胞分化HNF4α腫瘤干細(xì)胞apoptosistumor∴∴∴∴∴∴∴∴∴∴∴∴∴∴∴∴∴∴∴∴YinC,LinY,etal.Hepatology2008;48:1528-1539NingBF,etal.CancerRes,2010;70:7640-7651

HNF4a預(yù)防肝癌發(fā)生發(fā)展IKK/NF-kB

Wnt/b-catenin

HepEMTHepaticfibrosisCancerStemCellsHCCHNF4aDEN腹腔注射10周誘發(fā)大鼠肝癌模型10周后尾靜脈注射AdHNF4α和對照腺病毒HNF4

抑制肝癌細(xì)胞轉(zhuǎn)移及其分子機制HNF4

與miRNAs形成負(fù)向調(diào)控環(huán)路，抑制肝臟炎癥和細(xì)胞EMTHNF4

通過調(diào)控NF-

B信號通路抑制肝癌轉(zhuǎn)移美國NIHGaoB教授在Hepatology同期發(fā)表專文述評，認(rèn)為我們的工作明確了HNF4

在肝臟“炎-癌”演變中的作用機制，調(diào)控HNF4-miRNA調(diào)控環(huán)路為肝癌治療開辟新途徑。NingBF,etal.Hepatology,2014;60:1607-1619Wnt/b-CateninsignalpathwaywithHNF4α

treatment類似于real-timePCRTaqman的方法檢測700多條MICRORNA的表達(dá)情況檢測HNF4a誘導(dǎo)肝癌后microRNA變化HNF4a誘導(dǎo)分化肝癌的分子機制

MicroRNAinDLK1/DIO3imprintingregionKircherM,etal.BMCGenomics2008,23;9:346第二軍醫(yī)大學(xué)附屬長征醫(yī)院XuWP,etal.Hepatology,2013;58:1964-1976（IF11.2）YinC,etal.Hepatology,2013;58:1977-1991（IF11.2）HNF4α誘導(dǎo)分化肝癌的機制HNF1αincreasestheexpressionoflncRNAACUnpublisheddataBNovelmechanismforHNF1a-induceddifferentiationUnpublisheddataPTPN6SHP1(Ptpn6)inactivatedHNF1αHNF1α-AS1HNF1αSHP1(Ptpn6)activatedInflammationAnti-apoptosisCellcycleC-TerminalLemaigreF&ZaretKS.CurrOpinGenetDev2004;14:582-590肝細(xì)胞核因子

（hepatocytenuclearfactors,HNFs）包括HNF1、HNF3、HNF4、HNF6及C/EBP等HNF1α參與肝臟眾多主要功能糖原合成和貯存糖異生脂代謝血清蛋白合成和解毒p21HNF1a

miR-192

miR-194

G2/Marrest

HCCHepatocyteZengX,etal.Hepatology,2011;54:2036-2047

研究意義—提出腫瘤誘導(dǎo)分化新策略YinC,XieWF.Hepatology,2009;50:2046-2047明確HNF1a和HNF4a均可誘導(dǎo)肝癌細(xì)胞向肝細(xì)胞分化，有效治療實驗性肝癌提出利用細(xì)胞分化相關(guān)的轉(zhuǎn)錄因子誘導(dǎo)分化治療肝癌的新策略利用轉(zhuǎn)錄因子誘導(dǎo)分化也適合于其它惡性腫瘤的治療獲3項國內(nèi)專利授權(quán)，申請2項PCT國際專利肝纖維化肝硬化肝癌拓展研究領(lǐng)域HNFsHatziapostolouM,etal.Cell,147;2011:1233–1247HNF4α是肝癌發(fā)生的關(guān)鍵調(diào)節(jié)因子HNF4aDeletionPromotesDEN-InducedHepatocellularCarcinomainRodentsWaleskyC,etal.Hepatology2013;57:2480-2490ThesedatasuggestanovelroleasatumorsuppressorandhighlightHNF4aasapotentialtherapeutictargetforlivercancers.FOAX2及FOXA1是影響肝癌發(fā)生性別差異的關(guān)鍵基因IKK-α介導(dǎo)的FOXA2磷酸化失活對肝臟炎-癌演變起至關(guān)重要的作用叉頭樣轉(zhuǎn)錄因子A2（ForkheadboxA2,FOXA2）WangJ,etal.Carcinogenesis,2014;35(11):2576-2583FOXA2通過下調(diào)MM9表達(dá)抑制肝癌轉(zhuǎn)移Inductionoffunctionalhepatocyte-likecellsfrommousefibroblastsbydefinedfactors

HNF1a,Gata4,andFoxa3

HuangP,etal.Nature2011;475:386-389Directconversionofmousefibroblaststohepatocyte-likecellsbydefinedfactorsHNF4aplusFoxa1,Foxa2orFoxa3SekiyaS,etal.Nature2011;475:390-393InductionofhepatocytesfromfibroblastswithHNFs肝癌大多發(fā)生與肝硬化或纖維化肝臟肝細(xì)胞核因子(HNFs)是否可以治療肝纖維化？困惑？HNFs不可能同時治療肝癌和肝纖維化！HNFs可增強肝細(xì)胞功能，理論上可行！

HNF4α顯著減輕大鼠肝纖維化多種肝纖維化動物模型：DMN和BDLHNF4a治療后肝臟膠原面積減少達(dá)71％肝功能指標(biāo)明顯改善24YueHY,YinC,etal.Gut,2010;59:236-246病毒對照組

HNF4a治療組TAA制備大鼠肝硬化模型肝硬化形成后尾靜脈注射AdHNF4a和對照腺病毒HNF4a逆轉(zhuǎn)早期肝硬化FanTT,etal.JDigDis,2013;14(6):318-327ModelHNF4aGFPHE(×100)Masson(×100)SiriusRed(×100)FanTT,etal.JDigDis,2013;14(6):318-327HNF4a減輕晚期肝硬化程度

HNF1α表達(dá)下降促進肝纖維化發(fā)生和發(fā)展QianH,etal.CellResearch,2015;25:930-945HNF1α顯著減輕大鼠肝纖維化QianH,etal.CellResearch,2015;25:930-945AnHNF1α-regulatedfeedbackcircuitmodulateshepaticfibrogenesis

viathecrosstalkbetweenhepatocytesandhepaticstellatecellsQianH,etal.CellResearch,2015;25:930-945肝細(xì)胞核因子抗肝纖維化療效優(yōu)于其它治療!肝星狀細(xì)胞（HSC）的激活是肝纖維化發(fā)生的中心環(huán)節(jié)主要治療策略：抑制HSC激活、增殖或誘導(dǎo)其凋亡迄今尚無藥物被批準(zhǔn)用于治療肝纖維化亟需探索新的治療策略和方法

肝纖維化治療FriedmanSL.ProcNatlAcadSciUSA,2012;109:9230-9231Hernandez-GeaV,etal.AnnuRevPatholMechDis,2011;6:425-456

肝星狀細(xì)胞新功能!!!

YinC,etal.JClinInvest.2013;123:1902-1910Hepaticstellatecellsinliverdevelopment,regenerationandcancer

肝臟發(fā)育

肝纖維化

肝再生

肝癌活化HSC促進肝干細(xì)胞產(chǎn)生GFAP啟動子驅(qū)動胸苷激酶(Tk)在HSC特異表達(dá)(GFAP-Tk小鼠)更昔洛韋(GCV)誘導(dǎo)GFAP-Tk小鼠HSC凋亡清除HSC后肝干細(xì)胞產(chǎn)生明顯減少傳統(tǒng)治療肝纖維化主要策略：抑制HSC活化和增殖，或誘導(dǎo)其凋亡現(xiàn)在研究發(fā)現(xiàn)：HSC在肝臟損傷修復(fù)中具有雙向調(diào)節(jié)功能提示：傳統(tǒng)治療肝纖維化策略不是理想方法大多數(shù)研究：動物實驗效果好，而臨床試驗不理想

肝纖維化治療困惑治療肝纖維化的理想策略？

developtargetedtherapiesthatwillinhibit?brosiswhilepromotingliverregenerationBansalMB.HepatolInt,2016HNFs：criticalforhepatocytedifferentiation減輕肝纖維化促進肝細(xì)胞功能預(yù)防肝癌發(fā)生誘導(dǎo)肝癌分化保護肝細(xì)胞應(yīng)成為治療慢性肝病的主要策略增強HNFs在肝細(xì)胞的表達(dá)水平即可抑制肝纖維化，也可促進肝再生，是治療慢性肝病的理想方法慢性肝病治療新策略CCl4制備大鼠不可逆和致命性肝功能衰竭HNF4α通過恢復(fù)損傷肝細(xì)胞功能而逆轉(zhuǎn)肝衰竭未見產(chǎn)生新的肝細(xì)胞提高HNFs表達(dá)水平是治療器官功能衰竭的有效方法NishikawaT,etal.JClinInvest.2015;125:1533-44HNF4a逆轉(zhuǎn)終末期肝功能衰竭SongG,etal.CellStemCell,2016;18:797–808RezvaniM,etal.CellStemCell,2016;18:809–816GuanY,etal.CellStemCell,2016;18:683–684明確肝細(xì)胞損傷在肝纖維化發(fā)生發(fā)展中的作用提出治療肝纖維化應(yīng)首先重視保護肝細(xì)胞多位國際著名專家高度評價我們的研究美國

GoldsteinJ教授MolPharmacol.2012Hepatology,2011奧地利Trauner教授LabInvest.2010意大利Castagliuolo教授AmJPhysiol.2011西班牙FortesP教授GeneTher.2012意大利羅馬大學(xué)Tripodi教授認(rèn)為我們的研究為臨床治療肝纖維化提供新的思路和方法。

提出肝纖維化治療新策略肝纖維化肝硬化肝癌拓展和深化研究課題HNFsHNFsHNF4a對脂肪肝的作用小鼠特異性敲除肝細(xì)胞HNF4α促進脂肪肝進展提高HNF4a表達(dá)顯著抑制脂肪肝程度HNF1a在脂肪肝和肝癌發(fā)生中的作用小鼠特異性敲除肝細(xì)胞HNF1α促進脂肪肝進展肝細(xì)胞HNF1a表達(dá)缺失促進肝癌發(fā)生和發(fā)展

肝細(xì)胞核因子系列研究脂肪肝纖維化肝癌肝細(xì)胞核因子Hepatology,2008;48:1528-1539Hepatology,2009;50:2046-2047Hepatology,2013;58:1977-1991Hepatology,2013;58:1977-1991Hepatology,2011;54:2036-2047Hepatology,2014;60:1607-1619Hepatology.2014;60(2):648-660JHepatology2009;51:102-113Gut,2010;59:236-246CancerRes,2010;70:7640-7651Carcinogenesis.2014;35:2576-2583CellResearch,2015;25:930-945

種一顆年年豐收缺乏能支持轉(zhuǎn)化研究的公共平臺基礎(chǔ)研究人員和生物醫(yī)藥企業(yè)之間缺乏有效溝通轉(zhuǎn)化醫(yī)學(xué)的思考迄今已有2141項基因治療相關(guān)臨床試驗獲得批準(zhǔn)其中1376項（64.2%）針對腫瘤治療已批準(zhǔn)臨床試驗的基因治療中496項(22.5%)采用腺病毒重組腺復(fù)制缺陷型腺病毒載體是腫瘤基因治療的強有力工具腺病毒載體應(yīng)用病毒類載體臨床應(yīng)用2003年SFDA批準(zhǔn)首個基因治療藥物“今又生”上市（腺病毒）2008年SFDA批準(zhǔn)首個溶瘤病毒（H101）治療鼻咽癌（腺病毒）2012年歐盟批準(zhǔn)Glybera治療家族性脂蛋白脂肪酶缺乏癥（AAV）2015年美國批準(zhǔn)首個溶瘤病毒TVec治療黑色素瘤（Amgen）AdHNF4α制備及生產(chǎn)工藝研究和質(zhì)量控制標(biāo)準(zhǔn)的制定（藥學(xué)研究）AdHNF4α抗肝癌的藥效學(xué)研究AdHNF4α安全性評價AdHNF4α的藥代動力學(xué)研究臨床前研究內(nèi)容目前研究思路提升基礎(chǔ)研究，發(fā)表大文章（IF?20）加快轉(zhuǎn)化研究，力爭臨床應(yīng)用（HNF4a）強化臨床研究，解決實際問題基于MRI的非創(chuàng)傷性指標(biāo)對門靜脈壓力的預(yù)測價值利福昔明預(yù)防肝硬化并發(fā)癥多中心臨床研究磁共振T1-Rho診斷肝纖維化和早期肝硬化臨床研究斯特魯普試驗（strooptest）診斷肝性腦病CT診斷肝硬化價值的臨床評估肝硬化患者營養(yǎng)狀態(tài)調(diào)查

自體干細(xì)胞治療終末期肝硬化腸道微生態(tài)紊亂的“N宗罪”GiannelliV,etal.WorldJGastroenterol.2014;20:16795-810.腸道菌群過度生長腸道黏膜通透性增加腸道菌群易位腸源性內(nèi)毒素血癥肝細(xì)胞損傷微循環(huán)障礙加重免疫功能紊亂炎癥因子釋放腸道微生態(tài)紊亂對肝硬化的影響腸道微生態(tài)：肝硬化并發(fā)癥治療靶點抗生素治療自發(fā)性細(xì)菌性腹膜炎肝硬化食管靜脈曲張破裂出血治療的重要組成部分有效預(yù)防肝性腦病存在問題：調(diào)控腸道微生態(tài)能否預(yù)防肝硬化并發(fā)癥？傳統(tǒng)抗生素的安全性問題？LiYT,etal.WorldJGastroenterol.2015;21:10409-17.TripathiD,etal.Gut.2015;64:1680-704.LuoM,

etal.WorldJGastroenterol.2015;21:11815-24.

利福昔明是利福霉素的半合成衍生物對利福霉素母體分子進行結(jié)構(gòu)改造，增加吡啶環(huán)在溶解態(tài)和固體態(tài)時都傾向于相互結(jié)合，分子體積的增加也使其難以通過腸粘膜由于吡啶環(huán)的增加、分子結(jié)構(gòu)的改變，利福昔明難以通過腸粘膜吸收入血。Brufanietal.JAntibiot(Tokyo).1984;37:1623-1627利福昔明：腸道不易吸收昔服申

（利福昔明-

）:抗菌譜廣、抗菌作用強對腸道中的革蘭氏陽性菌及革蘭氏陰性菌有效對需氧菌、厭氧菌有效糞便中濃度遠(yuǎn)遠(yuǎn)高于腸道致病菌及非致病菌的MIC90;強抗菌作用。GillisandBrogden,Drugs,2002,49:467Gomietal,AntimicrobAgentsChemoter,2001,45:212Hooveretal,DiagnMicrobiolInfectDis,1993,16:111;Jiangetal