2011年中國(guó)脊髓灰質(zhì)炎實(shí)驗(yàn)室網(wǎng)絡(luò)監(jiān)測(cè)數(shù)據(jù)分析

2011年中國(guó)脊髓灰質(zhì)炎實(shí)驗(yàn)室網(wǎng)絡(luò)監(jiān)測(cè)數(shù)據(jù)分析

自2000年，包括中國(guó)在內(nèi)的世界衛(wèi)生組織（who）被證明為無(wú)脊椎動(dòng)物（脊柱灰），中國(guó)進(jìn)入無(wú)脊椎動(dòng)物灰的維護(hù)階段。中國(guó)疾病預(yù)防控制中心(CenterforDiseaseControlandPrevention,CDC)病毒病預(yù)防控制所國(guó)家脊灰實(shí)驗(yàn)室(NationalPolioLaboratory,NPL),也是WHOWPR的脊灰參比實(shí)驗(yàn)室,主要承擔(dān)中國(guó)的省(自治區(qū)、直轄市,下同)級(jí)CDC脊灰實(shí)驗(yàn)室(未包括香港、澳門特別行政區(qū)和臺(tái)灣地區(qū),下同)送檢的從急性弛緩性麻痹(AcuteFlaccidParalysis,AFP)病例及其接觸者、流動(dòng)人口、健康人群和外環(huán)境等分離到的脊灰病毒(Poliovirus,PV)的型內(nèi)鑒定(IntratypiciDentification,ITD)和基因特征分析,及時(shí)發(fā)現(xiàn)可能出現(xiàn)的疫苗衍生(Vaccine-derived)PV(VDPV)或輸入性野生型(Wild)PV(WPV);同時(shí)對(duì)省級(jí)CDC脊灰實(shí)驗(yàn)室進(jìn)行質(zhì)量控制(質(zhì)控),并協(xié)助WHO對(duì)省級(jí)CDC脊灰實(shí)驗(yàn)室開(kāi)展盲樣考核和現(xiàn)場(chǎng)認(rèn)證?，F(xiàn)就中國(guó)2011年脊灰實(shí)驗(yàn)室網(wǎng)絡(luò)(PolioLaboratoryNetwork,PLN)運(yùn)轉(zhuǎn)指標(biāo),以及實(shí)驗(yàn)室快速鑒定和應(yīng)對(duì)新疆維吾爾自治區(qū)(新疆)輸入性WPV疫情的情況報(bào)告如下。材料和方法1來(lái)自來(lái)源2分析結(jié)果1省級(jí)cdc脊柱灰實(shí)驗(yàn)室app病例監(jiān)測(cè)1.1糞便樣本來(lái)自app1.2型,pv+nvi從6089例AFP病例的糞便標(biāo)本中,分離到PV的207例,分離率為3.4%;其中Ⅰ型63例,Ⅱ型50例,Ⅲ型54例,混合型28例,PV+NPEV12例。分離到NPEV的782例,分離率為12.8%。1.3血液清學(xué)評(píng)價(jià)的結(jié)果是匹配率1.4pv監(jiān)測(cè)的實(shí)施2關(guān)于非營(yíng)利非政府組織的itd結(jié)果2.1相對(duì)于pv服裝外殼capsidprote，vp1編碼區(qū)域的磷酸序列的測(cè)定和分析2.2病毒對(duì)抗中的藥物2.3病毒、疾病監(jiān)測(cè)3病毒輸入來(lái)源2011年8月25日,NPL確認(rèn),新疆CDC脊灰實(shí)驗(yàn)室送檢的4株P(guān)VⅠ陽(yáng)性分離物(分離于和田地區(qū)4例AFP病例)的VP1編碼區(qū)核苷酸,與疫苗株(Sabin1株)PV相比差異在189~193個(gè),差異率為20.9%~21.3%,4個(gè)毒株之間的同源性高達(dá)99.2%~99.6%,鑒定為境外輸入WPVⅠ引起的和田地區(qū)局部爆發(fā)。此WPVⅠ既往未在國(guó)內(nèi)流行過(guò)。通過(guò)與WHO總部、WPRO、美國(guó)CDC和巴基斯坦等全球PLN快速溝通和合作,在3h內(nèi)闡明病毒輸入來(lái)源,證實(shí)中國(guó)新疆輸入的WPVⅠ與巴基斯坦2010年流行的WPVⅠ的VP1編碼區(qū)核苷酸同源性高達(dá)99%,WHO判定此次新疆WPVⅠ由巴基斯坦輸入。NPL迅速啟動(dòng)應(yīng)急機(jī)制,對(duì)新疆各設(shè)區(qū)的市(地區(qū),州,下同)送檢的疑似AFP病例、接觸者和流動(dòng)兒童的糞便標(biāo)本,直接采用逆轉(zhuǎn)錄-聚合酶鏈反應(yīng)(ReverseTranscription-PolymeraseChainReaction,RT-PCR)結(jié)合序列測(cè)定和分析的方法,開(kāi)展了PV檢測(cè);同時(shí)迅速開(kāi)展新疆環(huán)境WPV的檢測(cè),共檢出53例為WPVⅠ,其中21例來(lái)源于WPVⅠ病例,14例來(lái)源于接觸者,16例來(lái)源于健康人群。2份環(huán)境污水來(lái)源于和田地區(qū)環(huán)境標(biāo)本。4中國(guó)pln的質(zhì)量控制4.1pv核苷酸測(cè)定和分析能力驗(yàn)證2011年9月,NPL參加了WHO組織的RealtimeRT-PCRITD和VDPV篩查的能力驗(yàn)證;2011年9月,NPL參加了WHO組織的PV核苷酸序列測(cè)定和分析能力驗(yàn)證。兩項(xiàng)能力驗(yàn)證所使用的盲樣標(biāo)本是由WHO全球脊灰專項(xiàng)參比實(shí)驗(yàn)室———美國(guó)CDC的脊灰實(shí)驗(yàn)室制備的。NPL均以100分的成績(jī)順利通過(guò)。2011年11月2~3日,WHO專家對(duì)NPL進(jìn)行了2011年度的現(xiàn)場(chǎng)認(rèn)證。NPL作為WHOWPR參比實(shí)驗(yàn)室,按照WHO的關(guān)于地區(qū)參比實(shí)驗(yàn)室的標(biāo)準(zhǔn)進(jìn)行認(rèn)證,順利通過(guò)了WHO的現(xiàn)場(chǎng)認(rèn)證,繼續(xù)擁有擔(dān)任2012年度WHOWPR脊灰參比實(shí)驗(yàn)室的資格。4.2現(xiàn)場(chǎng)認(rèn)證考核2011年11月6~11日,對(duì)13個(gè)省級(jí)CDC脊灰實(shí)驗(yàn)室(天津、山西、吉林、上海、江西、山東、貴州、云南、西藏、陜西、甘肅、青海和新疆)進(jìn)行現(xiàn)場(chǎng)認(rèn)證考核。從實(shí)驗(yàn)室空間布局、工作人員工作情況、實(shí)驗(yàn)室管理、細(xì)胞培養(yǎng)技術(shù)、糞便標(biāo)本處理技術(shù)、病毒分離技術(shù)、病毒鑒定技術(shù)、生物安全與PV的保存、儀器設(shè)備、耗材供應(yīng)、與擴(kuò)大免疫規(guī)劃(ExpandedProgramonImmunization,EPI)工作人員的合作、實(shí)驗(yàn)室數(shù)據(jù)庫(kù)等12個(gè)方面進(jìn)行了嚴(yán)格的認(rèn)證考核,被考核省全部通過(guò)認(rèn)證。環(huán)境健康監(jiān)測(cè)2000年,我國(guó)實(shí)現(xiàn)無(wú)脊灰后,全國(guó)性補(bǔ)充免疫活動(dòng)(SupplementaryImmunizationActivities,SIA)逐年減少,AFP病例中疫苗株P(guān)V的分離率也逐年下降。然而,2011年由于新疆輸入WPVⅠ引起局部傳播,新疆和部分省開(kāi)展了口服脊灰減毒活疫苗(OralPoliomyelitisAttenuatedLiveVaccine,OPV)SIA,導(dǎo)致2011年P(guān)V分離率高于前幾年。然而,近10年NPEV的分離率保持在>10%相對(duì)穩(wěn)定水平上［2-4］。NPEV分離率是衡量糞便標(biāo)本質(zhì)量、病毒分離敏感性的一個(gè)重要的指標(biāo),間接反映了一個(gè)實(shí)驗(yàn)室運(yùn)轉(zhuǎn)的質(zhì)量,間接提示中國(guó)PLN保持著較高的運(yùn)轉(zhuǎn)水平。2011年,中國(guó)PLN接受WHO的盲樣標(biāo)本能力驗(yàn)證,NPL及31個(gè)省級(jí)CDC脊灰實(shí)驗(yàn)室均以滿分的成績(jī)通過(guò)了病毒分離和鑒定的盲樣考核。NPL還接受并通過(guò)了WHO的Real-timeRT-PCRITD盲樣考核,PV核苷酸序列測(cè)定和分析的盲樣考核,證明了中國(guó)PLN在WHO的水準(zhǔn)要求下高水平地運(yùn)轉(zhuǎn)。PV通常會(huì)持續(xù)幾周隨著感染者的糞便排出體外,因此從污水或者其他廢水中檢測(cè)到WPV或VDPVs,可以用來(lái)評(píng)估PV在環(huán)境中的循環(huán),以及估計(jì)環(huán)境人口中感染者的數(shù)量,因而可以將PV環(huán)境監(jiān)測(cè)結(jié)果作為某一特定人口地區(qū)無(wú)脊灰循環(huán)的指標(biāo),并為最終消滅脊灰計(jì)劃提供依據(jù)［5-7］。環(huán)境監(jiān)測(cè)作為AFP病例病毒學(xué)監(jiān)測(cè)的補(bǔ)充,WHO建議在那些AFP病例監(jiān)測(cè)質(zhì)量較差的地區(qū)或高風(fēng)險(xiǎn)地區(qū),應(yīng)開(kāi)展環(huán)境中PV監(jiān)測(cè)。截至2011年,NPL借鑒國(guó)內(nèi)外經(jīng)驗(yàn),已經(jīng)建立了一套成熟的環(huán)境樣品采集、病毒濃縮以及病毒分離的技術(shù)。以環(huán)境監(jiān)測(cè)結(jié)果作為評(píng)估特定地區(qū)健康人群PV和NPEV感染或流行的指標(biāo),建立了人群中PV和NPEV發(fā)生和循環(huán)的預(yù)測(cè)預(yù)警方法,并推廣到山東、廣東、上海、新疆、云南和廣西等?。?-9］。2010年,印度WPV輸入塔吉克斯坦,并引起持續(xù)6個(gè)月的流行,并發(fā)生10次傳播到其他地區(qū)和國(guó)家的事件［10-12］。NPL在2010年針對(duì)塔吉克斯坦的WPV流行,迅速建立了快速RT-PCR結(jié)合序列測(cè)定從糞便標(biāo)本中直接鑒定WPV、VDPVs和VHPV及疫苗株P(guān)V,將從糞便標(biāo)本鑒定WPV的時(shí)間從35d縮短到1~3d。該方法為快速闡明2011年新疆WPV的地區(qū)分布、年齡分布和省分布起到了堅(jiān)實(shí)的技術(shù)支撐作用。2011年,NPL及時(shí)鑒定了初始4例WPVⅠ病例,并通過(guò)WHO協(xié)調(diào)全球PLN,在3h內(nèi)闡明了病毒由巴基斯坦輸入,證實(shí)了NPL和全球PLN的高度合作和高效率。在衛(wèi)生部領(lǐng)導(dǎo)下,NPL依靠快速RT-PCR法迅速闡明了WPV病例的地理區(qū)域分布、年齡分布。為衛(wèi)生部制訂在新疆不同地區(qū)、不同年齡組的SIA策略和劑次提供了重要的科學(xué)依據(jù)。在衛(wèi)生部的領(lǐng)導(dǎo)下和中國(guó)CDC的技術(shù)指導(dǎo)下,在新疆CDC和各省CDC大力支援下,通過(guò)5輪SIA,中國(guó)在創(chuàng)紀(jì)錄的3個(gè)月(首例WPV病例發(fā)病為2011年7月3日,最后1例WPV病例發(fā)病時(shí)間為2011年10月9日)阻斷了輸入性WPV的傳播,疫情未擴(kuò)散到其他省或國(guó)家。2012年10月9日,WHO宣布中國(guó)重新恢復(fù)無(wú)脊灰狀態(tài)。PLN在新疆輸入WPVⅠ的發(fā)現(xiàn)和應(yīng)對(duì)中發(fā)揮了至關(guān)重要的作用。雖然這次輸入性WPV的傳播已被阻斷,但風(fēng)險(xiǎn)猶存。巴基斯坦、阿富汗和尼日利亞還有本土WPV流行,只要全球還未消滅脊灰,我國(guó)就存在再次發(fā)生WPV輸入的風(fēng)險(xiǎn),若存在免疫空白就會(huì)發(fā)生局部傳播或爆發(fā)的可能。為此,必須繼續(xù)保持高質(zhì)量的常規(guī)免疫,高質(zhì)量的AFP病例流行病監(jiān)測(cè)和病毒學(xué)監(jiān)測(cè),保障PLN有效和高質(zhì)量的運(yùn)轉(zhuǎn)。中國(guó)PLN在維持無(wú)脊灰狀態(tài)和全球消滅脊灰的進(jìn)程中,需要持續(xù)發(fā)揮重要角色。目前,中國(guó)PLN使用的方法和AFP病例監(jiān)測(cè)系統(tǒng)能夠及早的發(fā)現(xiàn)VDPVs和WPV,只有實(shí)驗(yàn)室的早期發(fā)現(xiàn)和預(yù)警,才能保證對(duì)VDPVs和WPV做出快速應(yīng)對(duì),早期阻斷其傳播。中國(guó)免疫規(guī)劃監(jiān)測(cè)信息管理系統(tǒng)數(shù)據(jù)庫(kù)中,31個(gè)省上報(bào)的AFP病例個(gè)案調(diào)查表和NPL的病毒學(xué)監(jiān)測(cè)數(shù)據(jù)庫(kù)。所有檢測(cè)結(jié)果均采用微軟電子表格(MicrosoftExcel)2003和微軟數(shù)據(jù)庫(kù)管理系統(tǒng)(MicrosoftAccess)2003等軟件對(duì)資料進(jìn)行統(tǒng)計(jì)分析。2011年,全國(guó)共報(bào)告AFP病例6205例,其中6145例采集了糞便標(biāo)本,占99.03%(6108例采集了雙份糞便標(biāo)本,占98.44%;合格糞便標(biāo)本采集率為90.9%;37例采集了單份糞便標(biāo)本,占0.59%),其余60例未采集糞便標(biāo)本,占0.97%。全國(guó)PLN共收到6205例AFP病例的12253份糞便標(biāo)本,省級(jí)CDC脊灰實(shí)驗(yàn)室按照WHO第4版《脊灰實(shí)驗(yàn)室手冊(cè)》的要求進(jìn)行了病毒分離和鑒定。2011年,省級(jí)CDC脊灰實(shí)驗(yàn)室送檢的PV毒株血清學(xué)鑒定結(jié)果與NPL結(jié)果的符合率為100%。2011年,廣西、上海、廣東、云南、山東省CDC脊灰實(shí)驗(yàn)室開(kāi)展了PV的環(huán)境監(jiān)測(cè),共分離到323株P(guān)V。其中在廣西分離到2株Ⅲ型疫苗高變異(Vaccine-hypervariable)PV(VHPV),在廣東分離到1株Ⅲ型VHPV,在新疆分離到2株Ⅰ型(Type1)WPV(WPVⅠ)(表1)。NPL對(duì)594株單血清型PV進(jìn)行了VP1編碼區(qū)核苷酸序列測(cè)定與分析(表2)。與賽賓(Sabin)疫苗株P(guān)V相比,VP1編碼區(qū)核苷酸變異≤5個(gè)的477株,占80.3%;變異6~9個(gè)的30株,占5.1%;變異≥9個(gè)的87株,占14.6%。根據(jù)PV的VP1編碼區(qū)核苷酸序列分析結(jié)果,2011年NPL在7個(gè)省鑒定出9例VDPVs,分別為Ⅰ型1例1株,Ⅱ型7例13株,Ⅲ型1例12株。1株Ⅰ型分離于1例山東省AFP患者,為來(lái)源不明(Ambiguous)VDPV(aVDPV);7例13株Ⅱ型分別來(lái)源于福建省和浙江省AFP病例各1例接觸者的共5株aVDPVs,貴州省1例AFP病例的2株免疫缺陷(Immunodeficiency)VDPVs(iVDPVs),貴州省1例流動(dòng)兒童的1株aVDPVs,四川省2例AFP病例的3株VDPVs,甘肅省1例AFP病例的2株VDPVs;Ⅲ型來(lái)源于寧夏回族自治區(qū)1例AFP病例的12株iVDPV(表3)。根據(jù)PV的VP1編碼區(qū)核苷酸序列分析結(jié)果,2011年鑒定出Ⅰ型VHPV共9株,核苷酸變異6~8個(gè),其中山東省3株,上海市1株,湖北省1株,甘肅省2株,西藏自治區(qū)2株;8株Ⅱ型VHPV,核苷酸變異均為5個(gè),其中浙江省1株,廣西壯族自治區(qū)1株,四川省2株,北京市1株,廣東省1株,云南省2株;11株Ⅲ型VHPV,核苷酸變異為6~8個(gè),其中山東省5株,安徽省1株,西藏自治區(qū)1株,上海市1株,貴州省2株,廣東省1株(表4)。2011年6月,NPL參加了WHO關(guān)于病毒分離和鑒定能力的驗(yàn)證項(xiàng)目,所使用的一組5份盲樣標(biāo)本是