卵孢白僵菌對的生物活性測定

卵孢白僵菌對的生物活性測定

野生稻是金桂科昆蟲的共同名稱。它是中國農(nóng)業(yè)和草業(yè)中最重要的地下害蟲之一，通常會破壞幼苗的根部。蠐螬種類多、分布廣、危害時間長、營隱蔽性生活,防治極為困難,生產(chǎn)上主要采用化學農(nóng)藥防治措施,但在防治過程中多次使用高劑量的化學農(nóng)藥存在投入成本高,污染環(huán)境,易產(chǎn)生抗藥性等問題。卵孢白僵菌(BeauveriabrongniartiiPetch)屬絲孢綱(Hyphomycetes),叢梗孢目(Moniliales),叢梗孢科(Moniliaceae),白僵菌屬(Beauveria)。其寄主范圍較窄,主要對于鞘翅目昆蟲有極好的防治效果。徐慶豐等、郭志紅等研究應用卵孢白僵菌防治苗圃地蠐螬的試驗,其蟲量和苗木被害率都明顯下降,證明了白僵菌防治蠐螬的可行性。但其中針對春季發(fā)生蠐螬的防治技術仍待進一步研究。現(xiàn)使用卵孢白僵菌和綠僵菌對蠐螬進行室內(nèi)防治試驗,并使用2種常用化學農(nóng)藥以低劑量進行混用,檢驗以上菌株對春季蠐螬的致病性,并檢驗其與化學農(nóng)藥混用效果,為高效安全的菌藥復配劑生產(chǎn)實踐及應用提供科學依據(jù)。1材料和方法1.1菌種和農(nóng)藥供試昆蟲:黃褐麗金龜(AnomalaecoleteFaldermann),采自東北農(nóng)業(yè)大學試驗田,供試昆蟲為春夏季田間3齡幼蟲。采集后飼養(yǎng)3d,確保幼蟲健康后進行測定。供試菌種:東北農(nóng)業(yè)大學農(nóng)學院農(nóng)業(yè)昆蟲與害蟲防治實驗室保存菌種(NEAU30305)。參照標準菌種綠僵菌,卵孢白僵菌發(fā)酵菌粉(簡稱商品綠僵菌和商品白僵菌)由鹽城市神微微生物菌種科技有限公司提供。供試農(nóng)藥:陶絲本乳油(有效成分為48%的毒死蜱),由東莞市瑞德豐生物科技有限公司生產(chǎn);功夫乳油(有效成分為2.5%的高效氯氟氰菊酯),由吉林省八達農(nóng)藥有限公司生產(chǎn)。1.2測試方法1.2.1卵孢白陷菌分生孢子計數(shù)采用試管斜面法接種培養(yǎng),在28℃培養(yǎng)箱培養(yǎng)10d后,用吐溫-80無菌水將卵孢白僵菌(NEAU30305)分生孢子制成懸浮液,用血球計數(shù)板計數(shù)分生孢子數(shù),3板重復。1.2.2藥土、性土、水土的配置卵孢白僵菌(NEAU30305)測定,將孢子原液按照1×109孢子數(shù)/L、5×109孢子數(shù)/L、2.5×1010孢子數(shù)/L、1.25×1011孢子數(shù)/L濃度配置藥土。商品綠僵菌,商品白僵菌發(fā)酵菌粉,按照1和0.5g/L2個濃度配置藥土。處理后10d開始翻土觀察計數(shù),之后每5d調查1次?；瘜W農(nóng)藥的藥效測定,陶絲本標準劑量1000×(即稀釋1000倍,以下格式均為此意)和低劑量3000×;功夫按照標準2000×和低劑量6000×,以及2種化學農(nóng)藥低劑量與1×109孢子數(shù)/L濃度的白僵菌混用的藥土進行制備。處理后3d開始進行翻土觀察計數(shù),第5天時調查1次,之后每5d調查1次。室內(nèi)生物測定方法采用藥土法,挑選蟲體大小一致的黃褐麗金龜三齡幼蟲。用大豆芽作為食料。用容量為4L的塑料桶作容器,每桶放置混合均勻藥土2L,加入20顆豆芽作為食料。每處理試蟲數(shù)量為15頭,重復3次。對照組不加藥劑。接蟲后置于室內(nèi)常溫培養(yǎng)。1.3毒力檢測結果將觀察時間分為7個時間區(qū)段(菌藥混用的生物測定為9個時間段),分別統(tǒng)計、整理每個時間區(qū)段內(nèi)的累計死亡率,并校正。菌藥混用效果使用Duncan多重極差檢驗分析各處理差異性,并以LT50、LT90累計校正死亡率作為對害蟲毒力分析的指標,以時間(d)的對數(shù)值為X,死亡率的幾率值為Y,采用幾率值分析法計算毒力回歸方程得出LT50、LT90值。以上運算均采用DPSv7.05數(shù)據(jù)處理系統(tǒng)軟件完成。2結果與分析2.1參照菌株的死亡率檢測由表1可知,對照組蠐螬在30d前無死亡情況出現(xiàn),35d時幼蟲出現(xiàn)死亡,據(jù)觀察分析是由于幼蟲開始化蛹所致。用卵孢白僵菌分生孢子液的不同濃度進行毒力測試中,在10d時2.5×1010和1.25×1011孢子數(shù)/L2個濃度的死亡率分別是17.8%和15.6%。15d時,2個低濃度仍未發(fā)揮效果。30d時濃度為1.25×1011死亡率達到64.4%,其余濃度死亡率低于40%。40d時濃度從低到高的校正死亡率為:34.7%、34.7%、67.3%、79.9%。參考菌株的生物測定中,標準劑量1g/L商品白僵菌和商品綠僵菌在10d時死亡率分別達到42.2%和33.3%,30d時均達到48.9%,40d時累計校正死亡率達59.7%,有較好的防治效果,而低劑量的商品白僵菌和商品綠僵菌在10d時死亡率分別為20%和17.8%,20d時為28.9%和31.1%,最終死亡率達到47.1%和44.6%。由圖1可以看出,卵孢白僵菌懸浮液在濃度低于等于5×109孢子數(shù)/L時,雖然對蠐螬有致病性,但是效果并不理想,濃度大于5×109孢子數(shù)/L后,卵孢白僵菌對蠐螬的致病性隨著濃度提高而顯著增加,而且1.25×1011孢子數(shù)/L濃度的卵孢白僵菌懸浮液在40d時對蠐螬達到79.9%的致死率,防治效果較為理想。由圖2可以看出,參照菌種處理的試蟲死亡率呈現(xiàn)階段性增長,以參考菌株的死亡率與卵孢白僵菌的死亡率在同一區(qū)間,說明卵孢白僵菌濃度設定符合要求。通過觀察受試昆蟲發(fā)現(xiàn),雖然在10～30d時,3齡幼蟲期致死率僅為28.9%～48.9%,但是有部分活蟲體壁上出現(xiàn)菌斑,活動能力下降的情況,而且35d后的死亡率出現(xiàn)提高。2.2不同防治效果及效果由表2可知,陶絲本(1000×)5d時達到了62.2%,25d時到達100%。陶絲本(3000×)5d時達到了71.1%,30d時到達100%。陶絲本(3000×)與白僵菌混用處理中,3d時死亡率達到73.3%,15d時達到100%。功夫(24000×)15d時死亡率達到51.1%,30d時死亡率達到86.7%,40d時幼蟲化蛹階段,死亡率達到100%。功夫(6000×)15d時死亡率為28.9%,幼蟲化蛹階段(40d)死亡率為57.3%,無法到防治效果,功夫(6000×)與白僵菌混用后,前期藥效不僅無明顯增強,而且在3和6d的調查中,甚至低于單劑使用的累計死亡率。但在化蛹階段二者混用的死亡率提升至74.9%,防治效果好于單劑使用。方差分析結果表明,低劑量陶絲本與白僵菌混用處理殺蟲效果最高,且在5d即與其它處理達到極顯著差異,其次是陶絲本單劑使用(2種濃度間差異不顯著),之后功夫(2000×)效果好于功夫(6000×)與白僵菌混用,功夫(6000×)防治效果最差。根據(jù)表2數(shù)據(jù)計算各處理的獨立回歸方程(表3),由此可以看出陶絲本(3000×)與白僵菌混用的殺蟲速度與陶絲本(3000×)單用相比,LT50由4.9d提前至2.1d,LT90由9.6d提前至4.1d,說明陶絲本和白僵菌混有有極好的協(xié)同作用。功夫(6000×)與白僵菌混用的殺蟲速度與功夫(6000×)單用相比,雖然LT50由原來32.2d提前至27.5d,但仍無法達到防治效果,說明功夫使用時需要達到標準濃度,且低劑量與白僵菌混用效果不明顯。3生物測定和用藥的協(xié)同作用對于生物農(nóng)藥和化學試劑的相容性測定國內(nèi)已經(jīng)有很多報道,孫家寶等使用綠僵菌與農(nóng)藥混用防治東北大黑鰓金龜幼蟲,李春香等使用卵孢白僵菌(ACCC30290)與化學農(nóng)藥混用防治甜菜夜蛾,均得到很好的防效。同時陸秀君等防治美國白蛾Hyphantriacunea(Drury)試驗中發(fā)現(xiàn)孢球白僵菌與高效氯氰菊酯有拮抗作用。在該試驗中,卵孢白僵菌及參照菌株的生物測定表明,卵孢白僵菌(NEAU30305)的孢子懸浮液防治蠐螬的致死效果已經(jīng)達到商品生物試劑的標準,甚至在1.25×1011孢子數(shù)/L濃度的孢子懸浮液處理中,防治效果要優(yōu)于標準劑量的參照菌株,因此卵孢白僵菌(NEAU30305)具有作為商品化生物試劑的潛力。卵孢白僵菌與化學農(nóng)藥混用的生物測定表明,陶絲本和卵孢白僵菌有很好的協(xié)同作用,單區(qū)段的累計死亡率和總體殺蟲