乳腺癌中er、pr和epha2表達(dá)的臨床研究

乳腺癌中er、pr和epha2表達(dá)的臨床研究

乳腺癌是女性最常見的腫瘤之一。近年來我國婦女乳腺癌發(fā)病率呈上升趨勢,其預(yù)后的判斷及與預(yù)后相關(guān)的生物標(biāo)志物的測定倍受關(guān)注。本研究通過檢測ER、PR和EphA2在乳腺癌組織的表達(dá),探討其在乳腺癌發(fā)生、發(fā)展中的作用。1材料和方法1.1病例選擇性別選取山東省諸城市人民醫(yī)院2003年2月-2007年9月行乳腺癌根治術(shù)或改良根治術(shù)的組織石蠟標(biāo)本130例,均為女性,年齡30～65歲,中位年齡54.5歲。其中導(dǎo)管內(nèi)癌6例,浸潤性導(dǎo)管癌50例,髓樣癌24例,浸潤性小葉癌25例,其他類型癌25例。腋窩淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移80例,無淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移50例。TNM分期:臨床分期0～Ⅰ期40例,Ⅱ期48例,Ⅲ期37例,Ⅳ期5例。均經(jīng)兩位以上病理醫(yī)師分別閱片,取得一致意見后重新認(rèn)定。所有標(biāo)本均經(jīng)4%甲醛溶液固定,石蠟包埋,4μm厚連續(xù)切片,分別作HE染色和免疫組化檢測。1.2epha2抗體ER、PR單克隆抗體及S-P免疫組化相關(guān)試劑盒均購自福州邁新生物技術(shù)有限公司。EphA2多克隆抗體購自上海卓康生物技術(shù)有限公司。采用S-P免疫組化染色法,以PBS代替一抗作陰性對照,光學(xué)顯微鏡觀察著色反應(yīng)。1.3bs-p法采用S-P二步法免疫組化染色。切片厚4μm,脫蠟,梯度酒精水化,高壓鍋熱處理5-8分鐘進(jìn)行抗原修復(fù),PBS沖洗,3%過氧化氫阻斷過氧化物酶,馬血清封閉,加用一抗,4℃冰箱孵育過夜,加生物素標(biāo)記的二抗,室溫下30分鐘后PBS充分洗滌,加入S-P復(fù)合物孵育20-30分鐘;PBS洗3次,每次2分鐘;DAB顯色,蘇木素復(fù)染。自來水沖洗返藍(lán),梯度酒精脫水,中性樹膠封片。用PBS代替一抗作為陰性對照,已知陽性片作為陽性對照。1.4er、pr優(yōu)化的標(biāo)準(zhǔn)隨機(jī)選擇5個高倍鏡視野,計數(shù)500個細(xì)胞,根據(jù)著色細(xì)胞占腫瘤細(xì)胞數(shù)的比例來分為(-)和(+):ER、PR細(xì)胞核著棕黃色顆粒的細(xì)胞凡5個高倍視野>10%以上者為陽性,否則為陰性。EphA2陽性標(biāo)準(zhǔn)為胞膜和細(xì)胞漿同時染成棕黃色或棕褐色的細(xì)胞,凡5個高倍視野>20%者為陽性,否則為陰性病例。結(jié)果判斷均由兩名高年資病理科醫(yī)生統(tǒng)一核準(zhǔn)。1.5樣本率及相關(guān)性分析應(yīng)用SPSS13.0統(tǒng)計軟件分析,樣本率的比較采用χ2檢驗,相關(guān)性分析采用Spearman檢驗,檢驗標(biāo)準(zhǔn)均取P≤0.05為差異有統(tǒng)計學(xué)意義。2er、pr和epha2表達(dá)的陽性表達(dá)乳腺癌組織中ER、PR和EphA2的表達(dá)與各臨床病理特征及相互關(guān)系見表1、表2。ER、PR陽性著色部位在胞核,呈棕黃色或棕褐色,灶性、片狀和散在分布(圖1、2),EphA2陽性著色部位在細(xì)胞膜和細(xì)胞漿,呈棕黃色或棕褐色(圖3);ER、PR和EphA2的陽性表達(dá)率分別為63.1%、58.4%和72.3%;ER、PR的陽性表達(dá)與乳腺癌患者的年齡、病理組織學(xué)類型、腫瘤大小、淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移和臨床分期無顯著相關(guān)(P>0.05);EphA2的陽性表達(dá)與與乳腺癌患者的年齡、與腫瘤大小、病理組織學(xué)類型無顯著相關(guān)(P>0.05);而與腋窩淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移、臨床分期顯著相關(guān),淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移組的陽性表達(dá)率顯著高于無淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移組(P<0.05),臨床分期較晚者陽性表達(dá)率顯著高于臨床分期較早者(P<0.05);EphA2的陽性表達(dá)率在乳腺癌ER\PR陰性組明顯高于ER\PR陽性組(P<0.05)。3乳腺癌中er、pr、epha2表達(dá)與er的相關(guān)性乳腺癌雌激素受體(estrogenreceptor,ER)、孕激素受體(progesteronereceptor,PR)是正常乳腺上皮細(xì)胞存在的性激素受體,是屬于核受體超家族中的甾體激素受體。PR是雌激素和雄激素受體結(jié)合誘導(dǎo)的產(chǎn)物,其合成數(shù)量與雌激素受體復(fù)合物移位于細(xì)胞核內(nèi)數(shù)量呈平衡關(guān)系。PR的出現(xiàn)顯示ER功能機(jī)制的完整性,PR在孕激素存在的情況下,可顯著抑制乳腺癌細(xì)胞株的生長,抑制腫瘤細(xì)胞的浸潤和轉(zhuǎn)移。乳腺癌表達(dá)ER、PR說明癌細(xì)胞已保留激素依賴性生長的特征。其陽性表達(dá)說明其分化程度高,惡性程度低,內(nèi)分泌治療反應(yīng)好,預(yù)后好。陰性表達(dá)提示腫瘤惡性程度高,預(yù)后差。較多的臨床報道顯示乳腺癌內(nèi)分泌治療的有效率僅為20%～30%,很少能達(dá)到完全緩解(CR)。進(jìn)一步研究證實,受體狀況不明的乳腺癌患者,其內(nèi)分泌治療的有效率僅為30%;ER陽性患者有效率達(dá)到50%～60%,而ER陰性患者的有效率為5%～8%;ER、PR均為陽性者其內(nèi)分泌治療的有效率為70%。對于年老、絕經(jīng)后受體陽性、病情發(fā)展緩慢、轉(zhuǎn)移部位為骨及軟組織的患者,主張首選內(nèi)分泌治療,說明ER、PR狀態(tài)在乳腺癌治療中的重要意義。現(xiàn)在二者已成為公認(rèn)的估測乳腺癌患者預(yù)后和選擇治療方案的指標(biāo)。李道旺等研究顯示乳腺癌中ER與PR的表達(dá)分別與組織學(xué)分級呈負(fù)相關(guān),但ER陽性表達(dá)與患者的年齡、臨床分期、淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移與否及腫瘤大小均無明顯相關(guān),乳腺癌中PR的表達(dá)與患者年齡呈負(fù)相關(guān),與患者臨床分期、有無淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移及腫塊大小也均無相關(guān)。本研究結(jié)果顯示乳腺癌組織中ER、PR的陽性表達(dá)率與年齡、組織學(xué)類型、腫瘤大小、淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移和臨床分期均無顯著相關(guān)(P>0.05)。受體酪氨酸激酶(receptortyrosinekinases,RTKs)是外界刺激信息傳遞至細(xì)胞核,轉(zhuǎn)化成細(xì)胞效應(yīng)的信號轉(zhuǎn)導(dǎo)通路中的關(guān)鍵分子組成。Eph基因家族是新發(fā)現(xiàn)的最大的RTKs家族成員,EphA2是該家族中被發(fā)現(xiàn)具有酪氨酸激酶活性的第一個基因。EphA2定位于人染色體1p36.1,編碼一個含有976個氨基酸殘基的多肽,為膜結(jié)合Ⅰ型糖蛋白。與其他受體酪氨酸激酶一樣,EphA2分子可分成三個結(jié)構(gòu)區(qū),即胞外的配體結(jié)合區(qū)、細(xì)胞內(nèi)部具有酪氨酸激酶活性的功能區(qū)和連接這兩個區(qū)域的由疏水氨基酸組成的跨膜區(qū)。在許多腫瘤細(xì)胞模型和臨床樣本中,均報道EphA2高水平的表達(dá),包括乳腺癌、結(jié)腸癌、前列腺癌、肺癌、高侵襲性黑色素瘤、子宮頸癌、卵巢癌等。Zelinski等報道,EphA2的表達(dá)增高,能誘導(dǎo)非轉(zhuǎn)化乳腺上皮細(xì)胞在體內(nèi)和體外的惡性轉(zhuǎn)化,削弱腫瘤細(xì)胞之間的連接,增加腫瘤細(xì)胞與細(xì)胞外基質(zhì)成分的黏附,增強(qiáng)對基質(zhì)的侵襲,促進(jìn)腫瘤的侵襲、轉(zhuǎn)移。秦艷等研究顯示EphA2蛋白的過表達(dá)與乳腺癌患者絕經(jīng)狀態(tài)、臨床分期、組織學(xué)分級及有無淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移有關(guān)(P<0.05),乳腺癌中EphA2與ERβ的表達(dá)呈負(fù)相關(guān)。而趙瑞皎等研究則發(fā)現(xiàn)EphA2的表達(dá)水平與乳腺癌患者的年齡、腫瘤大小、淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移情況無明顯相關(guān)性,但與ER表達(dá)呈負(fù)相關(guān),ER陰性組EphA2的陽性表達(dá)率明顯高于ER陽性組。國外研究也發(fā)現(xiàn),乳腺癌細(xì)胞中EphA2表達(dá)水平與ER的表達(dá)呈負(fù)相關(guān)。ER缺陷的乳腺癌細(xì)胞中,通常EphA2表達(dá)水平最高;雌二醇(E2)處理乳腺上皮細(xì)胞后,可以下調(diào)EphA2的表達(dá);EphA2過表達(dá)可以降低ER陽性乳腺癌細(xì)胞對雌激素的需要和依賴性,使乳腺癌細(xì)胞對三苯氧胺產(chǎn)生抵抗;并且發(fā)現(xiàn)抗EphA2抗體可以阻斷EphA2過表達(dá)所產(chǎn)生的后果,使過表達(dá)EphA2的細(xì)胞恢復(fù)對化療藥物的敏感性。本研究顯示EphA2陽性表達(dá)與乳腺癌患者的年齡、腫瘤大小、病理組織學(xué)類型均無顯著相關(guān)(P>0.05);而與腋窩淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移、臨床分期顯著相關(guān)(P<0.05),有腋窩淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移者其陽性表達(dá)率顯著高于腋窩淋巴結(jié)陰性者,臨床分期較晚者其陽性表達(dá)率顯著高于臨床分期較早者。本研究還顯示EphA2的表達(dá)與ER\PR的表達(dá)成負(fù)相關(guān),EphA2的陽性表達(dá)率在乳腺癌ER\PR陰性組明顯高于ER\PR陽性組(P<0.05)。綜上所述,EphA2過表達(dá)于乳腺癌組織中,而表達(dá)強(qiáng)度隨乳腺癌惡性度的增高而增強(qiáng),提示EphA2有可能是乳腺癌的一個新的標(biāo)志物,ER、PR和EphA2的聯(lián)合檢測可能有助于客觀評估乳腺癌的生物學(xué)行為,用來指導(dǎo)臨床用藥和預(yù)測預(yù)后。但作者也注意到,目前關(guān)于ER、PR和EphA2在乳腺癌中表達(dá)的研究結(jié)果還不一致,這種差別可能是很多原因造成的。腫瘤組織病理形態(tài)學(xué)的改變給病理醫(yī)師判斷腫瘤特異性標(biāo)記物的表達(dá)帶來難度;且腫瘤取材部位的差異也可能會造成腫瘤特異性標(biāo)記物的表達(dá)差異,用于檢測生物因子的腫瘤標(biāo)本只能是整個腫瘤組織的一部分,而整個腫瘤組