高壓蒸汽殺菌鍋使用的注意事項(xiàng)

高壓蒸汽殺菌鍋使用的注意事項(xiàng)

高壓蒸汽滅菌爐是微生物實(shí)驗(yàn)中不可或缺的設(shè)備。在沒(méi)有細(xì)菌細(xì)菌過(guò)程的情況下，很難進(jìn)行微生物實(shí)驗(yàn)。我校微生物學(xué)實(shí)驗(yàn)室目前使用的滅菌器為下排氣式蒸汽滅菌鍋和脈動(dòng)真空壓力蒸汽滅菌器兩種,在操作過(guò)程中常常遇到滅菌失敗的情況,其原因主要是冷空氣沒(méi)有充分地從高壓蒸汽滅菌器內(nèi)排出,以致影響熱能的穿透,降低蒸汽的分壓,使之不能升到應(yīng)有的溫度,因而要掌握滅菌鍋的正確使用,不僅要了解滅菌鍋的構(gòu)造,而且使用經(jīng)驗(yàn)也非常重要。筆者多年從事微生物學(xué)實(shí)驗(yàn)準(zhǔn)備工作并經(jīng)常使用高壓鍋,本文對(duì)高壓蒸汽滅菌鍋使用過(guò)程中的注意事項(xiàng)以及影響因素作一歸納總結(jié),并針對(duì)具體情況具體分析,提出自己的對(duì)策和見(jiàn)解,為使用高壓鍋的同行提供參考,提高實(shí)驗(yàn)教學(xué)質(zhì)量。1.注意使用氮肥注釋(1)在使用反滲透膜時(shí),將待滅菌物品放入鍋內(nèi)之前,一定先檢查鍋內(nèi)水位,觀察控制面板上的工作燈和水位燈的顯示情況,顯示低水位應(yīng)先向鍋內(nèi)加水,當(dāng)高水位燈亮?xí)r應(yīng)停止加水,當(dāng)水位過(guò)多應(yīng)開(kāi)啟下排水閥放去內(nèi)膽中的多余水量。另外,使用高壓鍋時(shí)特別應(yīng)注意的是鍋蓋的旋開(kāi),如果鍋蓋旋不到一定高度,當(dāng)旋緊鍋蓋時(shí)很容易將橡膠封閉圈摩擦變形,時(shí)間久了封閉圈就會(huì)斷裂、漏氣,高壓鍋暫時(shí)就沒(méi)法使用,影響實(shí)驗(yàn)進(jìn)行。高壓鍋封閉圈一般都是專用的,不僅價(jià)格貴而且還要向生產(chǎn)廠家訂購(gòu),需要很長(zhǎng)時(shí)間,影響實(shí)驗(yàn)的準(zhǔn)備。因此,為避免這種情況發(fā)生,必須將鍋蓋旋至一定高度,減少對(duì)封閉圈的摩擦,延長(zhǎng)其使用壽命。(2)做好層物品的投放和網(wǎng)裝為了達(dá)到滅菌的目的,鍋內(nèi)待滅菌物品應(yīng)不要太緊太滿,以利于蒸汽流通。體積過(guò)大蒸汽就不易穿透物品。最下層物品擺放盡量稀疏,因下層蒸汽量相對(duì)少,分壓不夠,往往造成滅菌不完全。因此擺放時(shí)注意上下交錯(cuò)疊放,使留有較多空隙,利于蒸汽穿透。如需要對(duì)較小物品滅菌時(shí),應(yīng)事先裝在容器中,所選容器也應(yīng)盡量小且淺,且有通氣孔,若用過(guò)大、過(guò)深及不帶孔的容器,蒸汽不易穿透。同時(shí)滅菌物品應(yīng)盡量垂直放,不要平放,切勿擠壓。(3)輸送、運(yùn)輸速度過(guò)快滅菌鍋內(nèi)裝入物品的總量不能超過(guò)總?cè)萘康?5%,否則不能達(dá)到滅菌的目的,物品和物品之間應(yīng)留有一定空隙,還要適當(dāng)調(diào)控好蒸汽進(jìn)入鍋內(nèi)的速度,若往鍋內(nèi)過(guò)快輸送蒸汽,極易形成湍流,致使冷空氣難于排出,如輸送的速度過(guò)快時(shí),雖然鍋內(nèi)很快就達(dá)到所需的溫度,但是蒸汽穿透滅菌物品需要一定的時(shí)間,這樣滅菌時(shí)間就相對(duì)減少,從而影響了滅菌效果,故往鍋內(nèi)送氣時(shí),進(jìn)氣閥門(mén)不能完全開(kāi)大,必須逐漸開(kāi)大,使之緩緩進(jìn)氣。但進(jìn)氣速度也不能太慢,太慢鍋內(nèi)冷空氣會(huì)長(zhǎng)時(shí)間排不出去,空氣的溫度也隨之增高,使之更難排出。因?yàn)槿萜鲀?nèi)的空氣要依靠蒸汽的擠壓而排除,所以送氣速度適宜,有利于熱能對(duì)物品的穿透和冷空氣的排除。(4)冷凝器排盡壓力蒸汽滅菌鍋內(nèi)蒸汽的溫度不僅與壓力有關(guān),而且與蒸汽的飽和度有關(guān)。滅菌鍋內(nèi)冷空氣未排盡時(shí),即使蒸汽壓力達(dá)到要求,溫度也上不到相應(yīng)的高度,而且還影響高壓蒸汽穿透被滅菌物品的能力。故首先要打開(kāi)進(jìn)氣閥門(mén),引導(dǎo)外源蒸汽進(jìn)入夾層,冷空氣與冷凝水由夾層的阻氣器排出,大約需要10min后,再打開(kāi)進(jìn)氣閥,蒸汽即進(jìn)入鍋內(nèi),如此充分的時(shí)間即可排除冷空氣。冷空氣的排出是滅菌效果可靠的保障,排氣時(shí)間不能超過(guò)25min。如何判斷冷空氣是否排盡,可觀察排氣口的氣體,若排氣口氣體呈白色霧狀;或在排氣口出口處連接一橡皮管,將另一端插入冷水盆中,若管內(nèi)排出氣體在冷水中產(chǎn)生氣泡,表示鍋內(nèi)空氣尚未排盡,需要繼續(xù)排氣。若不產(chǎn)生氣泡,表示鍋內(nèi)空氣已基本排盡。當(dāng)壓力表顯示鍋內(nèi)達(dá)到所需溫度時(shí),應(yīng)盡量關(guān)小排氣閥以防蒸汽損失,造成鍋內(nèi)缺水,但注意關(guān)閉不能太緊,應(yīng)稍有氣體排出,保持溫度壓力相匹配。2.滅菌鍋的清洗和時(shí)間(1)水水溫極大地影響滅菌鍋真空系統(tǒng)的性能,水溫過(guò)高可能會(huì)導(dǎo)致預(yù)定的真空水平改變,因此水溫應(yīng)盡量低。滅菌鍋使用的水應(yīng)符合應(yīng)用水質(zhì)量,并且溫度不超過(guò)15℃。水的硬度值在0.7～2.0mmol/L之間,超出該范圍的硬度值可能會(huì)引起水垢和腐蝕等問(wèn)題,從而縮短滅菌鍋的使用壽命。因此,使用的水需經(jīng)過(guò)過(guò)濾和處理,并且應(yīng)保持鍋體清潔。(2)蒸汽的干燥程度滅菌鍋應(yīng)使用干燥程度不小于0.9的飽和蒸汽,即蒸汽含水量不超過(guò)10%;金屬負(fù)載狀態(tài)下,干燥程度不小于0.95,以保持溫度與壓力符合線性關(guān)系。(3)滅菌時(shí)間滅菌時(shí)間是指滅菌過(guò)程中滅菌室內(nèi)達(dá)到規(guī)定溫度后滅菌所需時(shí)間。它包括:熱穿透時(shí)間、熱死亡時(shí)間、安全時(shí)間。使用真空壓力蒸汽滅菌鍋,由于滅菌鍋內(nèi)負(fù)壓較大,熱穿透時(shí)間僅為1min。操作中,應(yīng)注意觀察蒸汽的進(jìn)汽速度和壓力,一般保持壓力和溫度同步上升。3.薄膜中間破裂在實(shí)際工作中常常需要對(duì)液體進(jìn)行滅菌,高壓滅菌鍋說(shuō)明書(shū)中,也表明能夠?qū)ζ繝畹囊后w進(jìn)行滅菌處理,但在實(shí)驗(yàn)中卻遇到了意外的情況:用敞口的玻璃瓶滅菌,其結(jié)果是玻璃瓶中的液體減少了1/3;用塑料薄膜緊緊封住瓶口,其結(jié)果封口塑料薄膜中間破裂,玻璃瓶中的液體仍然減少了1/3。造成此現(xiàn)象的原因是在較長(zhǎng)的加熱和保壓過(guò)程中,滅菌鍋和瓶作為一個(gè)系統(tǒng),處于相對(duì)平衡狀態(tài),當(dāng)蒸汽滅菌鍋的壓力達(dá)到0.165MPa,瓶?jī)?nèi)液體的壓力也為0.165MPa,當(dāng)限壓閥開(kāi)啟后,滅菌鍋的壓力在短時(shí)間降到0.14MPa,但玻璃瓶中液體壓力仍為0.165MPa,與玻璃瓶外的壓力差為ΔP=0.165MPa-0.14MPa=0.025Mpa,即液體內(nèi)部的壓力大于液體表面的壓力,符合液體沸騰的條件,從而發(fā)生沸騰現(xiàn)象,液體溢出。當(dāng)ΔP大到一定數(shù)量值時(shí),容器中的液體產(chǎn)生噴射現(xiàn)象。在對(duì)液態(tài)物質(zhì)進(jìn)行滅菌時(shí),當(dāng)滅菌結(jié)束注意卸壓不能過(guò)快,盡量將排氣閥關(guān)小,保持自然降壓,保持系統(tǒng)原有的平衡,以防產(chǎn)生液體減少或噴濺現(xiàn)象。4.高壓蒸汽滅菌高壓滅菌鍋屬于強(qiáng)檢儀器,必須進(jìn)行滅菌效果的驗(yàn)證。高壓滅菌鍋使物品滅菌后達(dá)到無(wú)菌要求,這是微生物實(shí)驗(yàn)成功的一個(gè)基本保證。將嗜熱芽孢桿菌紙片用無(wú)菌鑷子放入封閉試管中,化學(xué)指示卡和留點(diǎn)溫度計(jì)放入敞口的試管中,以上兩種試管各準(zhǔn)備5～10支,分別放置在高壓滅菌鍋蒸汽口處、底部排氣口處及底部出水口處或上下左右中間5處。留點(diǎn)溫度計(jì)標(biāo)化合格后可用于驗(yàn)證試驗(yàn)。檢測(cè)前,需將溫度計(jì)的水銀柱甩至40℃以下。每次監(jiān)測(cè)后留點(diǎn)溫度計(jì)的溫差應(yīng)在1℃之間,則說(shuō)明滅菌鍋內(nèi)的溫度分布是均勻的。滅菌后的菌片應(yīng)在嚴(yán)格無(wú)菌操作條件下放入滅菌后的溴甲酚紫胨水培養(yǎng)基內(nèi),50～60℃培養(yǎng)24～48小時(shí),觀察顏色變化。如培養(yǎng)基變?yōu)辄S色,說(shuō)明菌片中的嗜熱芽孢桿菌尚未完全滅活,細(xì)菌仍可在培養(yǎng)基中生長(zhǎng),分解葡萄糖產(chǎn)酸變?yōu)辄S色。如培養(yǎng)基顏色不變化仍為紫色,則說(shuō)明芽孢桿菌已滅活。同時(shí)要用未經(jīng)滅菌的紙片放入培養(yǎng)基內(nèi)作為陽(yáng)性對(duì)照,不加紙片的空白培養(yǎng)基作為陰性對(duì)照?；瘜W(xué)指示卡上的指示色塊,在高壓蒸汽滅菌時(shí),由淡黃色變?yōu)楹谏?。隨著顏色變化的深淺,并與對(duì)照色相比,可判斷滅菌效果是否達(dá)到要求。化學(xué)指示卡應(yīng)在干燥處保存。遇潮會(huì)變色,影響滅菌效果的觀測(cè)。高壓蒸汽滅菌必須使蒸汽順利進(jìn)入滅菌鍋內(nèi),與滅菌物品接觸,并將原有的冷空氣排出方可達(dá)到滅菌的效果。要進(jìn)行空載熱分布和滿載熱穿透力驗(yàn)證(滿載時(shí)不超過(guò)總體積的2/3)。兩種驗(yàn)證各重復(fù)三次。5個(gè)點(diǎn)六次試驗(yàn)表明溫度均在121℃,化學(xué)指示卡變黑;程度與對(duì)照色一致;培養(yǎng)基均未改變顏色,說(shuō)明高壓蒸汽滅菌效果合格。5.加強(qiáng)操作,保證微生物實(shí)驗(yàn)準(zhǔn)備工作的實(shí)效性為了提高滅菌效果、防止事故發(fā)生并延長(zhǎng)高壓鍋的使