中藥十八反對(duì)大鼠肝細(xì)胞色素p450酶含量的影響

中藥十八反對(duì)大鼠肝細(xì)胞色素p450酶含量的影響

18個(gè)熱是中醫(yī)理論的重要組成部分，是中醫(yī)七情“對(duì)立”配合的具體體現(xiàn)。目前，這項(xiàng)研究主要集中在對(duì)該現(xiàn)象的確認(rèn)上，而對(duì)該機(jī)制的解釋很少?，F(xiàn)代醫(yī)學(xué)理論認(rèn)為,藥物間的“反”應(yīng)指它們間不良的相互作用,藥物經(jīng)肝臟代謝時(shí),通過影響肝藥酶產(chǎn)生相互影響,是藥物相互作用的途徑之一。因此本實(shí)驗(yàn)選擇測(cè)定大鼠肝微粒體細(xì)胞色素P450酶含量,觀察烏頭、半夏、栝樓、貝母、白蘞和白及各藥單藥組、配伍組對(duì)P450酶及b5含量的影響,通過比較十八反藥物中的一組“半樓貝蘞及攻烏”,以探討其配伍藥物在肝藥酶途徑的相互影響,為今后中藥復(fù)方配伍研究提供實(shí)驗(yàn)依據(jù)。1材料表面1.1實(shí)驗(yàn)動(dòng)物中心2級(jí)Wistar大鼠,體質(zhì)量180～220g,雌雄各半,由軍事醫(yī)學(xué)科學(xué)院實(shí)驗(yàn)動(dòng)物中心提供,常規(guī)飼養(yǎng)。實(shí)驗(yàn)動(dòng)物質(zhì)量合格證號(hào):SCXK-(軍)2002-001,動(dòng)物實(shí)驗(yàn)設(shè)施使用證號(hào):SYXK-(軍)2002-001。1.2實(shí)驗(yàn)藥物實(shí)驗(yàn)藥物購自北京市同仁堂藥店和安國藥市(固定產(chǎn)地),水煎制備,濃縮成1g/mL,置4℃保存?zhèn)溆谩?.3血清標(biāo)準(zhǔn)蛋白和試劑連二亞硫酸鈉(北京化工廠);一氧化碳(CO)(北京夏天氣體廠);牛血清標(biāo)準(zhǔn)蛋白(總后藥檢所);Folin酚試劑(北京欣經(jīng)科生物公司);高速冷凍離心機(jī),DU-640核酸蛋白分析儀(BECKMAN公司)。1.4大鼠給藥劑量實(shí)驗(yàn)大鼠隨機(jī)分為11個(gè)給藥組和1個(gè)正常對(duì)照組,每組18只,灌胃給藥,正常對(duì)照組給予等量的生理鹽水,2次/d,連續(xù)3、7、14d。根據(jù)《中華人民共和國藥典》(2000年版)有關(guān)人用各藥的劑量范圍,取高限用量進(jìn)行預(yù)實(shí)驗(yàn),按體表面積換算成大鼠給藥劑量,各組實(shí)驗(yàn)給藥劑量分別為:烏頭組0.25g/(kg·d);半夏組、貝母組、白蘞組1.51g/(kg·d);栝樓組、白及組2.51g/(kg·d)。2實(shí)驗(yàn)方法2.1灌流肝臟,灌流肝臟分別于給藥3、7、14d后禁食12h以上斷頭處死動(dòng)物,迅速打開腹腔,作肝門靜脈插管,用預(yù)冷的生理鹽水灌流至肝臟顏色變?yōu)橥咙S色為止。取出肝臟稱質(zhì)量,按肝臟組織∶緩沖液(1∶4)加pH7.5(TMS)緩沖液制備勻漿,用鈣沉淀法制備微粒體懸液。2.2不同指標(biāo)樣品對(duì)cod-pcr測(cè)定Lowry法測(cè)定微粒體蛋白懸液蛋白含量,根據(jù)各樣品的蛋白含量,用pH7.4的Tris緩沖液稀釋微粒體蛋白懸液至0.5mg/mL,共6mL,分成2管。一管作為空白對(duì)照管,另一管加20μL連二亞硫酸鈉(0.1g/mL)混勻,作為b5樣品測(cè)定管,400～500nm掃描測(cè)定樣品b5含量;取出上述空白對(duì)照管倒入原管中,加20μL連二亞硫酸鈉(0.1g/mL)混勻,沖CO1min,作為P450酶樣品測(cè)定管,上述b5樣品測(cè)定管作為空白對(duì)照管,400～500nm掃描測(cè)定P450酶含量。計(jì)算公式:2.3壓力值的比較實(shí)驗(yàn)數(shù)據(jù)以均數(shù)±標(biāo)準(zhǔn)差()表示,兩組間的差異顯著性分析用方差分析。表中顯著性表示方法:與正常對(duì)照組比較*P<0.05,**P<0.01,***P<0.001;與烏頭組比較#P<0.05,##P<0.01,###P<0.01;與其相應(yīng)單藥組比較▲P<0.05,▲▲P<0.01,▲▲▲P<0.01。3結(jié)果3.1兩組配伍p450酶含量比較結(jié)果表明,烏頭、半夏單藥組藥后14d大鼠肝細(xì)胞色素P450酶含量均顯著增加,與正常對(duì)照組比較統(tǒng)計(jì)差別顯著(P<0.05或P<0.01);兩藥配伍后P450酶含量與其相應(yīng)單藥組比較顯著降低(P<0.01),與正常對(duì)照組比較無統(tǒng)計(jì)差別(P>0.05);烏頭單藥組藥后14d大鼠肝細(xì)胞色素b5含量顯著增加,與正常對(duì)照組比較統(tǒng)計(jì)差別顯著(P<0.01),兩藥配伍藥后7、14db5含量與其相應(yīng)單藥組比較顯著降低(P<0.05),與正常對(duì)照組比較無統(tǒng)計(jì)差別(P>0.05)。3.2胞色素p450酶檢測(cè)結(jié)果表明,栝樓組及烏頭與栝樓配伍組藥后對(duì)大鼠肝細(xì)胞色素P450酶含量無影響(P>0.05);兩藥配伍藥后14db5含量與其相應(yīng)單藥組及正常對(duì)照組比較顯著降低(P<0.05或P<0.01)。3.3組患者的統(tǒng)計(jì)差別p/0.05,正常對(duì)照組與正常對(duì)照組比較結(jié)果表明,烏頭與貝母兩藥配伍藥后14dP450酶含量與其相應(yīng)單藥組比較顯著降低。(P<0.05或P<0.01),與正常對(duì)照組比較無統(tǒng)計(jì)差別(P>0.05);貝母組藥后7、14d大鼠肝細(xì)胞色素b5含量顯著增加,與正常對(duì)照組比較統(tǒng)計(jì)差別顯著(P<0.05),烏頭與貝母兩藥配伍藥后7db5含量顯著低于貝母單藥組(P<0.05),藥后14db5含量與相應(yīng)單藥組及正常對(duì)照組比較顯著降低(P<0.001)。3.4不同單藥組p450酶含量比較結(jié)果表明,白蘞單藥組藥后14d大鼠肝細(xì)胞色素P450酶含量顯著增加,與正常對(duì)照組比較統(tǒng)計(jì)差別顯著(P<0.01),烏頭與白蘞兩藥配伍后P450酶含量與其相應(yīng)單藥組比較顯著降低(P<0.01),與正常對(duì)照組比較無統(tǒng)計(jì)差別(P>0.05);白蘞單藥組藥后14d大鼠肝細(xì)胞色素b5含量顯著增加,與正常對(duì)照組比較統(tǒng)計(jì)差別顯著(P<0.05),烏頭與白蘞兩藥配伍后b5含量與其相應(yīng)單藥組及正常對(duì)照組比較顯著降低(P<0.05或P<0.01)。3.5酶含量比較結(jié)果表明,白及單藥組對(duì)大鼠肝細(xì)胞色素P450酶含量無影響,烏頭與白及兩藥配伍藥后14dP450酶含量與烏頭組比較顯著降低(P<0.01),與正常對(duì)照組比較無統(tǒng)計(jì)差別(P>0.05);白及單藥組藥后14d大鼠肝細(xì)胞色素b5含量顯著高于正常對(duì)照組(P<0.05),烏頭與白及兩藥配伍藥后14db5含量與其相應(yīng)單藥組和正常對(duì)照組比較顯著降低(P<0.05或P<0.01)。4不同藥物配伍對(duì)p450酶活性的影響本實(shí)驗(yàn)設(shè)3個(gè)給藥時(shí)間點(diǎn),觀察了給藥后3、7、14d大鼠P450酶及b5含量變化,結(jié)果發(fā)現(xiàn)該組藥物于藥后3、7d對(duì)P450酶及b5含量僅個(gè)別組有影響,藥后14d對(duì)P450酶及b5含量影響較大。單藥栝樓組、貝母組、白及組對(duì)P450酶含量無影響,烏頭組、半夏組和白蘞組與正常對(duì)照組比較可顯著增高P450酶含量(P<0.01或P<0.05),烏頭分別與半夏、貝母、白蘞、白及配伍可降低P450酶含量,與其相應(yīng)單藥組比較統(tǒng)計(jì)差別顯著(P<0.01或P<0.05),與正常對(duì)照組無統(tǒng)計(jì)差別(P>0.05);單藥栝樓組和半夏組對(duì)b5含量無影響,烏頭組、貝母組、白蘞組和白及組與正常對(duì)照組比較可顯著增高b5含量(P<0.001或P<0.05);烏頭分別與半夏、栝樓、貝母、白蘞、白及配伍可降低b5含量,與其相應(yīng)單藥組及正常對(duì)照組比較統(tǒng)計(jì)差別顯著(P<0.001或P<0.05)。細(xì)胞色素P450酶是體內(nèi)主要參與藥物代謝的酶,P450酶活性的高低直接影響到藥物的藥理作用,當(dāng)兩種以上的藥物合用時(shí),就可能誘導(dǎo)或抑制P450酶,從而導(dǎo)致藥物藥效或毒性的增強(qiáng)或降低。細(xì)胞色素P450酶在化學(xué)藥物相互作用研究中應(yīng)用廣泛,但在中藥復(fù)方配伍研究中