鷹嘴豆豆葉和豆莖中總多糖的測定

鷹嘴豆豆葉和豆莖中總多糖的測定

鷹嘴豆是布爾醫(yī)學中常用的藥物。維吾爾族用它治療支氣管炎、黏膜炎、霍亂、便秘痢疾、消化不良、腸胃氣脹、毒蛇咬傷、糖尿病、性欲降低、皮膚瘙癢、高脂血癥、中暑等疾病。在中醫(yī)上,鷹嘴豆可以調(diào)節(jié)濕度,有止瀉、解毒、壯身等作用,它的花可以治療痢疾,浸泡水后服用可以治療中藥中毒和白帶增多等。籽?？勺隼騽⒋吣虅?可治療失眠、預防皮膚病等。多糖廣泛存在于自然界,是多種中草藥的有效成分之一,具有多種生物活性,是理想的免疫增強劑。能提高機體免疫系統(tǒng)的功能,對正常細胞沒有毒副作用,在抗腫瘤,抗病毒,抗衰老等藥物研究中,多糖類藥物的研制已成為當今世界新藥的開展方向之一。多項研究已經(jīng)充分表明多糖無毒副作用,來源廣泛,生物活性高,必將為高效低毒藥物開發(fā)開辟廣闊的前景。鷹嘴豆的食用及藥用價值已經(jīng)受到廣泛的關(guān)注,鷹嘴豆中各種成分的分析已經(jīng)做得很詳細,但是豆莖、豆葉、豆莢中的成分分析沒有見到報導。本次課題的研究目的是利用分光光度法的檢測技術(shù),檢測鷹嘴豆豆莖、豆葉、豆莢中總多糖的含量,為鷹嘴豆的全面開發(fā)利用提供科學依據(jù)。1樣品的分析純分光光度計,蒽酮、濃硫酸、95%乙醇、無水乙醇、氯仿、正丁醇均為分析純,鷹嘴豆豆莖、豆葉、豆莢樣品(2009年采于新疆木壘)。2方法和結(jié)果2.1運移法濃縮運熱法分別稱取干燥至恒重過40目篩的鷹嘴豆豆莖、豆葉、豆莢粉末100g,加水適量,于95℃時超聲提取30min,過濾,濾渣于95℃時再超聲提取30min,共提取3次,合并提取液,于旋轉(zhuǎn)蒸發(fā)儀上濃縮至100ml。在其中加95%乙醇至含醇量達80%,4℃時靜置過夜。40000r/min下離心分離,離心后的沉淀物加少量熱水溶解后,再加95%乙醇至含醇量達80%,靜置過夜,離心分離。將得到的粗多糖溶于熱水,用Sevag法(氯仿∶正丁醇=4∶1)除蛋白8次。加1%活性炭脫色,抽濾,加入乙醇使含醇量達80%,靜置過夜,離心分離。沉淀物置于60℃的真空干燥箱中干燥,即得精制的淡黃色的鷹嘴豆豆莖,豆葉多糖。將精制后的多糖在260nm～280nm區(qū)間掃描,結(jié)果顯示無吸收峰,說明蛋白基本除盡。2.2標準溶液的制備精密稱取葡萄糖對照品0.1000g,用蒸餾水溶解并定容至100ml,配成濃度為1mg/ml的標準儲備液。2.3回歸方程精密吸取葡萄糖標準溶液0.0,0.1,0.2,0.3,0.4,0.5ml于10ml的容量瓶中,用蒸餾水定溶至刻度。分別取2.0ml至25ml具塞試管中,加蒽酮-濃硫酸(0.2g∶100ml)試劑4ml,放入沸水中加熱8min,迅速冷卻室溫。于620nm處測定吸光度。用吸光度對濃度回歸,得回歸方程:A=0.0294C-0.0325,r=0.9996。線性范圍為3.333～166.7μg/ml。2.4多糖含量的測定精密稱取精制的多糖0.1000g,用少量熱蒸餾水溶解后定溶于100ml容量瓶中,搖勻。精密吸取此溶液2ml至25ml具塞試管中,加蒽酮-濃硫酸試劑4ml,放入沸水中加熱8min迅速冷卻室溫。于620nm處測定吸光度,根據(jù)標準曲線計算濃度,再按下式計算換算因子:f=W/CD式中W為多糖質(zhì)量(mg),C為多糖的濃度(μg/ml),D為稀釋因素。得豆莖:f=6.265豆葉:f=4.608豆莢:f=3.216。2.5多糖含量的測定分別準確稱取鷹嘴豆豆莖、豆葉、豆莢粉末0.5g(4份),置于100ml容量瓶中,加水適量,在95℃時超聲提取30min,過濾于另一100ml容量瓶中,濾渣用蒸餾水洗滌多次,用水定溶至刻度。精密吸取樣品溶液2.5ml置25ml容量瓶中,加水稀釋刻度。精密吸取此溶液2.0ml置于25ml具塞試管中,加入蒽酮-濃硫酸試劑4m,放入沸水中加熱8min,迅速冷卻室溫。于620nm處測定吸光度。含量(%)=CDf/W×100%式中W為多糖質(zhì)量(mg),C為多糖的濃度(μg/ml),D為稀釋因素,f為換算因子。鷹嘴豆豆莖多糖的平均含量為11.4%(n=4),RSD=1.3%。鷹嘴豆豆葉多糖的平均含量為12.6%(n=4),RSD=1.1%。鷹嘴豆豆莢多糖的平均含量為8.7%(n=4),RSD=0.98%。2.6濃硫酸溶液法分別精密吸取對照品溶液1.0ml,于25ml具塞試管中,加1.0ml蒸餾水,加入蒽酮-濃硫酸試劑4m,放入沸水中加熱8min,迅速冷卻室溫。于620nm處測定吸光度。求的其RSD分別為:0.83%;0.97%;1.1%(n=5)2.7對照品溶液的制備分別準確稱取鷹嘴豆豆莖、豆葉、豆莢粉末0.5g(8份,分為4組),置于100ml容量瓶中,第一組為本底,后面三組分別加入0.1ml,0.2ml,0.3ml的對照品溶液,按2.5項下操作。于620nm處測定吸光度。測得豆莖、豆葉、豆莢平均回收率為98.01%;99.21%、101.2%3結(jié)果與討論3.1總多糖含量的測定(1)分光光度法測定鷹嘴豆豆莖、豆葉中總多糖含量。方法靈敏度高,其準確性、重現(xiàn)性、線性關(guān)系、穩(wěn)定性均能達