中藥復(fù)方在煎煮過(guò)程中化學(xué)成分相互作用的研究現(xiàn)狀

中藥復(fù)方在煎煮過(guò)程中化學(xué)成分相互作用的研究現(xiàn)狀

中醫(yī)學(xué)是在中醫(yī)學(xué)的理論指導(dǎo)下應(yīng)用的藥物，具有獨(dú)特的理論體系和應(yīng)用形式。中藥復(fù)方(或稱中藥方劑)是中醫(yī)臨床用藥的主要形式。來(lái)源于長(zhǎng)期的醫(yī)療實(shí)踐,具有深刻的科學(xué)內(nèi)涵和臨床價(jià)值。中藥復(fù)方講究“君臣佐使,協(xié)同作用”的配伍原則,強(qiáng)調(diào)用藥的系統(tǒng)性和整體作用,中藥復(fù)方配伍所展示的獨(dú)特療效是多組分協(xié)同作用的結(jié)果。復(fù)方中的化學(xué)成分是中藥發(fā)揮藥效作用的物質(zhì)基礎(chǔ),復(fù)方化學(xué)成分的研究是中醫(yī)藥現(xiàn)代化研究的主要內(nèi)容之一。由于不同藥材中的化學(xué)成分在煎煮過(guò)程中可能存在助溶、揮發(fā)、水解、氧化、產(chǎn)生沉淀等物理或化學(xué)的相互作用,使原有的某些成分溶出增加,或者減少,甚至消失,或是產(chǎn)生新的化合物,化學(xué)成分可能會(huì)發(fā)生一定變化,從而使配伍表現(xiàn)出減毒、增效甚至產(chǎn)生單味藥不具備的藥理活性。煎煮過(guò)程對(duì)中藥復(fù)方的臨床應(yīng)用和藥效發(fā)揮有重要作用,復(fù)方配伍在煎煮過(guò)程中化學(xué)成分變化的影響,可能是復(fù)方配伍協(xié)同發(fā)揮療效的物質(zhì)基礎(chǔ)之一。本文收集了近年來(lái)國(guó)內(nèi)中藥配伍煎煮過(guò)程的化學(xué)成分變化方面的主要研究文獻(xiàn),對(duì)其中關(guān)于配伍在煎煮過(guò)程中化學(xué)成分與單味藥材化學(xué)成分之間的變化關(guān)系的研究結(jié)果,及其所采用的研究方法進(jìn)行了分析比較。以期對(duì)中藥配伍煎煮過(guò)程中化學(xué)協(xié)同現(xiàn)象獲得進(jìn)一步的認(rèn)識(shí),為研究中藥煎煮過(guò)程中的化學(xué)協(xié)同作用提供依據(jù)。一、在復(fù)方中的化學(xué)成分研究中與單味藥材煎煮(單煎)相比,合煎(復(fù)方煎劑)的化學(xué)成分發(fā)生的變化,總結(jié)起來(lái)包括有以下4個(gè)方面:1.單基礎(chǔ)藥物成分的變化吳昭暉應(yīng)用反相高效液相色譜法測(cè)定麻黃湯各配伍組合的水煎液中苦杏仁苷的含量,結(jié)果表明,麻黃、桂枝、甘草對(duì)苦杏仁苷的影響無(wú)顯著性差異,與杏仁單煎相比,復(fù)方中苦杏仁苷含量變化不大。譚洪根等應(yīng)用硅膠柱層析、聚酰胺柱層析結(jié)合薄層鑒別法對(duì)芍藥甘草湯進(jìn)行了研究,從中分離得到苯甲酸、芒柄花素、異甘草苷元、甘草苷元、4,7-二羥基黃銅、芒柄花苷、甘草苷、沒食子酸、芍藥苷、異甘草苷和甘草酸共Ⅱ個(gè)化合物,未發(fā)現(xiàn)新的化合物。涂瑤生等采用同批藥材分別制備了單煎和合煎的三利降脂顆粒(由大黃、草決明、半邊蓮、蒲黃、澤瀉、丹參、瓜蔞組成),對(duì)其脂溶性成分、有機(jī)酸類、生物堿類成分進(jìn)行了薄層層析定性鑒別,結(jié)果顯示,這些成分在兩種顆粒中沒有明顯差異。采用硅膠G薄層層析,進(jìn)行單波長(zhǎng)掃描,用外標(biāo)法計(jì)算峰面積,對(duì)兩種顆粒中的原兒茶醛及大黃素成分進(jìn)行了定量測(cè)定,結(jié)果顯示,二者在合煎顆粒中的含量略高,但差異無(wú)顯著性。王燕生等從四君子湯(由黨參、茯苓、白術(shù)和甘草四味藥組成)復(fù)方和單味白術(shù)的水煎劑中分得蒼術(shù)醚、蒼術(shù)內(nèi)酯、羥基蒼術(shù)內(nèi)酯和脫水羥基蒼術(shù)內(nèi)酯等多種化合物,并用薄層層析和紫外、紅外等多種分析手段對(duì)四君子湯中的白術(shù)主要活性成分進(jìn)行了考查,結(jié)果表明,四君子湯煎劑中白術(shù)主要成分與單味白術(shù)相比沒有發(fā)生變化。2.不同組分復(fù)方的部分增溶作用曾惠芳等采用分光光度法和薄層色譜法對(duì)虎杖單煎及復(fù)方共煎過(guò)程中的物理化學(xué)變化進(jìn)行了研究,結(jié)果發(fā)現(xiàn),虎杖分別與楤木、甘草合煎,其有效成分蒽醌煎出量較虎杖單煎高。作者推斷楤木、甘草含有豐富的皂苷可能對(duì)蒽醌類的溶出有增溶作用,使蒽醌類含量在配伍后升高。李川等采用分光光度法研究了4種煅石決明及其生品對(duì)決明子煎液中的蒽醌煎出率的影響。發(fā)現(xiàn)決明子與石決明配伍后,蒽醌煎出率顯著提高;且煅石決明的助溶作用優(yōu)于生品。郭戌等采用薄層色譜掃描-吸光度比例系數(shù)校正法對(duì)當(dāng)歸中的磷脂組分進(jìn)行了探討,研究了當(dāng)歸承氣湯中磷脂對(duì)大黃中蒽醌溶出率的影響,結(jié)果表明,加大當(dāng)歸用量,湯液中磷脂含量隨之升高,大黃總蒽醌的溶出也隨之增大。許益民用麻黃、銀花、當(dāng)歸組方,研究發(fā)現(xiàn)當(dāng)歸中的磷脂也可以增加麻黃堿、綠原酸的煎出率。分析磷脂的增溶作用,可能在于其結(jié)構(gòu)中具有極性磷酸基和非極性磷酸基,是天然表面活性劑。蘇子仁等對(duì)補(bǔ)骨脂復(fù)方煎劑研究發(fā)現(xiàn),與大棗、黃芪、菟絲子、白芍、丹參、當(dāng)歸合煎,可以顯著提高補(bǔ)骨脂有效成份的煎出。這是由于中藥復(fù)方大多含有磷脂、皂苷、高級(jí)脂肪醇、甾醇等兩親性物,在共煎中均有可能形成膠團(tuán),增加藥物有效成份的溶出。蘇子仁等研究發(fā)現(xiàn),在骨康方(由補(bǔ)骨脂、淫羊藿、當(dāng)歸、白芍、黃芪、丹參等組成)中,補(bǔ)骨脂與丹參配伍共煎,對(duì)補(bǔ)骨脂素、異補(bǔ)骨脂素均有顯著的增溶作用。推測(cè)這是由于丹參中的丹參酮在90℃的水中可分解成各種烷烴、高級(jí)脂肪醇、甾醇等,一方面該反應(yīng)產(chǎn)物已經(jīng)沒有原來(lái)的藥效作用,但另一方面分解產(chǎn)物高級(jí)醇、甾醇與磷脂共同組成膠團(tuán),在藥物共煎液中可以發(fā)揮增溶作用,促進(jìn)其他有效成分的煎出率。張宇等在研究四逆湯(由附子、甘草、干姜3味藥組成)時(shí),采用薄層層析結(jié)合離子對(duì)萃取-分光光度法對(duì)附子與干姜及3味藥配伍前后主要有效成分進(jìn)行了定性與定量分析。結(jié)果表明,附子與干姜配伍及3味藥配伍時(shí),烏頭堿類生物堿含量升高。王勇等利用電噴霧質(zhì)譜分析和比較生附子及其復(fù)方中藥煎煮液中二萜類生物堿的變化規(guī)律。研究結(jié)果發(fā)現(xiàn),生附子單煎煮及與甘草共煎后,雙酯型烏頭生物堿大部分發(fā)生水解;而生附子與半夏或五味子共煎,生物堿水解受抑制。生附子和甘草單煎液的酸性遠(yuǎn)低于半夏或五味子單煎液,烏頭堿在酸性條件下不水解。說(shuō)明酸性是影響烏頭堿類雙酯型生物堿水解的重要因素,強(qiáng)酸條件下(與半夏或五味子配伍時(shí))其水解受抑制,從而使其含量相對(duì)升高,增加附子煎煮液的毒性。袁久榮等采用多種分析方法測(cè)定了四物湯(由當(dāng)歸、地黃、赤芍和川芎組成)各藥單煎、分煎和合煎液中的阿魏酸、8種微量元素、17種氨基酸及水溶性煎出物的含量,并測(cè)定了紫外譜吸收峰位值。結(jié)果表明,在加熱條件下合煎時(shí),各成分間具有增溶效應(yīng)。對(duì)生脈散的研究表明,共煎過(guò)程中原來(lái)是微量成分的人參皂苷Rg3、Rh1等轉(zhuǎn)化為主要成分,含量明顯增加。由此推測(cè)在加熱煎煮過(guò)程中發(fā)生了人參皂苷的水解轉(zhuǎn)化,使原來(lái)單味藥中某些微量成分成為復(fù)方的主要成分。在應(yīng)用高效液相色譜法考察了六味地黃湯(由熟地、山茱萸、山藥、丹皮、澤瀉、茯苓組成)煎煮過(guò)程中對(duì)馬錢素煎出率的影響,證明了六味地黃湯不同配伍煎煮時(shí)對(duì)馬錢素煎出率有影響,其中丹皮與山茱萸合煎時(shí),能使馬錢素的煎出量增加。3.不同配比吳樹立組合湯、養(yǎng)魚劑配伍對(duì)小堿含量的影響吳昭暉應(yīng)用反相高效液相色譜法測(cè)定麻黃湯各配伍組合水煎液中甘草酸的含量,結(jié)果表明,麻黃、桂枝、苦杏仁能顯著降低湯劑中甘草酸的含量。曾惠芳等采用分光光度法和薄層色譜法對(duì)虎杖單煎及復(fù)方共煎過(guò)程中的物理化學(xué)變化進(jìn)行了研究,結(jié)果發(fā)現(xiàn)虎杖分別與五味子、山楂合煎,其有效成分蒽醌煎出量均較虎杖單煎低。張宇等在研究四逆湯(由附子、甘草、干姜3味藥組成)時(shí),采用薄層層析結(jié)合離子對(duì)萃取-分光光度法對(duì)附子與甘草配伍前后主要有效成分進(jìn)行了定性與定量分析。結(jié)果表明,附子與甘草配伍時(shí),烏頭堿含量降低。研究者采用不同方法都得到了同樣的結(jié)果。何桂霞等用薄層掃描法測(cè)定了芍藥湯中黃連、大黃、黃芩的有效成分在不同配伍情況下煎液中的含量,結(jié)果大黃、黃芩、甘草使黃連中小檗堿含量明顯降低,尤以大黃配黃連煎液中小檗堿含量降低最為嚴(yán)重。涂瑤生等采用薄層色譜掃描法對(duì)清胃散(由當(dāng)歸、黃連、生地、牡丹皮、升麻5味中藥組成)單煎液與合煎液中黃連的有效成分鹽酸小檗堿的含量進(jìn)行了考察,結(jié)果表明,合煎液中小檗堿的含量明顯減低。研究者對(duì)白頭翁湯進(jìn)行了研究,結(jié)果發(fā)現(xiàn)湯劑中小檗堿、七葉樹堿、七葉樹內(nèi)酯含量較相應(yīng)的單味藥中的含量降低。黃連配伍白頭翁后,小檗堿含量下降最為明顯;白頭翁、黃連、黃柏分別與秦皮配伍后,湯劑中七葉樹內(nèi)酯含量下降。影響大小順序?yàn)榘最^翁>黃連>黃柏。白頭翁湯合煎液中七葉樹內(nèi)酯含量下降26.37%,小檗堿下降46.45%,二者含量的降低,并不符合各單味藥作用的相加。黃連與方中各味藥配伍煎煮,均會(huì)產(chǎn)生含小檗堿的沉淀,推測(cè)可能是配伍后某些化學(xué)成分的存在,使小檗堿的溶解度降低而析出。王浴銘等采用薄層掃描法研究發(fā)現(xiàn),黃連與吳茱萸配伍后,煎液中小檗堿含量較黃連單煎液下降,且有沉淀產(chǎn)生,沉淀物經(jīng)TLC檢識(shí)及其化學(xué)組成的探討,發(fā)現(xiàn)黃連中小檗堿與吳茱萸中的黃酮類成分產(chǎn)生沉淀。梅全喜等對(duì)含黃連的瀉心湯類方劑進(jìn)行了研究,結(jié)果發(fā)現(xiàn)復(fù)方中同時(shí)含有大黃或甘草時(shí),煎液中小檗堿的強(qiáng)烈苦味消失,不含大黃或甘草的煎液有強(qiáng)烈苦味,原因是大黃或甘草存在時(shí)小檗堿與大黃鞣質(zhì)或甘草酸結(jié)合生成了難溶性沉淀物,從而使小檗堿含量降低。徐艷春等采用高效液相色譜法對(duì)黃連與吳茱萸配伍后吳茱萸堿及吳茱萸次堿的含量進(jìn)行了測(cè)定,結(jié)果發(fā)現(xiàn)配伍后兩種生物堿的含量均有不同程度的下降。潘浪勝等按照黃連和吳茱萸藥材先分煎,然后再用分煎液配伍的思路,來(lái)研究配伍后主要組分的含量變化規(guī)律,二者按不同比例配伍,在100℃下加熱1h,在優(yōu)化的RP-HPLC條件下進(jìn)行分析,比較色譜指紋圖譜,考察主要組分相對(duì)峰面積變化和配伍比例之間的關(guān)系。結(jié)果發(fā)現(xiàn)黃連水煎液和吳茱萸水煎液配伍后色譜峰具有加和性,未見新峰產(chǎn)生,吳茱萸中主要組分的相對(duì)峰面積未見明顯變化,黃連生物堿的相對(duì)峰面積隨吳茱萸水煎液配比的增加呈線性下降,說(shuō)明吳茱萸組分存在時(shí),使黃連生物堿溶解度下降,含量降低。黃熙等用液相色譜-質(zhì)譜聯(lián)用儀和高效液相色譜儀研究了不同煎煮方法所得川芎?jiǎn)渭逡汉痛ㄜ号湮槌嗌值暮霞逡簩?duì)阿魏酸含量的影響,結(jié)果發(fā)現(xiàn)川芎與赤芍合煎中阿魏酸含量顯著低于川芎?jiǎn)渭逡褐邪⑽核岷?。吳嘉瑞等?yīng)用薄層掃描法對(duì)不同比例人參與萊菔子配伍后人參主要指標(biāo)性成分人參皂苷Rg1的含量進(jìn)行了測(cè)定,并對(duì)其煎出量變化進(jìn)行了初步分析,實(shí)驗(yàn)結(jié)果表明,與人參單煎組比較,不同比例人參與萊菔子配伍組合中人參皂苷Rg1的煎出量均有所減少。容蓉等采用RP-HPLC對(duì)考察了四物湯中白芍與其它各單味藥排列組合構(gòu)成的8種樣本藥物中苯甲酸煎出量的變化,結(jié)果顯示,四物湯各藥合煎提取液的苯甲酸含量明顯低于白芍單煎液提取物中苯甲酸的含量。魏鳳環(huán)等應(yīng)用GC-MS法研究了配伍對(duì)麻黃湯(由麻黃、桂枝、杏仁、甘草組成)中桂皮醛含量的影響,通過(guò)比較麻黃、杏仁、甘草及兩兩相互作用對(duì)桂皮醛含量的影響,發(fā)現(xiàn)麻黃湯全方煎液中桂皮醛的含量明顯低于其他各配伍組煎液中桂皮醛的含量,且麻黃、杏仁對(duì)配方中桂皮醛含量下降影響顯著,而甘草及兩兩相互作用對(duì)配方中桂皮醛含量影響不明顯。統(tǒng)計(jì)結(jié)果顯示,麻黃、杏仁能顯著降低桂皮醛的含量。謝躍生等在應(yīng)用高效液相色譜法考察了六味地黃湯(由熟地、山茱萸、山藥、丹皮、澤瀉、茯苓組成)煎煮過(guò)程中對(duì)馬錢素煎出率的影響,證明了六味地黃湯不同配伍煎煮時(shí)對(duì)馬錢素煎出率有影響,其中,山茱萸與丹皮配伍,馬錢素溶出顯著增加(22%),而與山藥熟地配伍時(shí),馬錢素的溶出增加(2%),而增加澤瀉和茯苓后馬錢素溶出降低的效應(yīng)非常顯著,全方合煎時(shí)使馬錢素的煎出率顯著下降,達(dá)到26%。研究沒有討論山茱萸加澤瀉、茯苓的配伍對(duì)馬錢素溶出的影響。鐘立賢等在研究小青龍湯的過(guò)程中,測(cè)定了各藥濃煎劑、單煎混合及混煎液中麻黃堿的含量。結(jié)果顯示,合煎液中麻黃堿含量最低,作者推測(cè)這是由于甘草酸與麻黃堿作用產(chǎn)生沉淀所致。4.以苦參堿為原料的配伍配方肖盛元等利用色譜二級(jí)質(zhì)譜數(shù)據(jù),從干姜水煎煮液中鑒定了18個(gè)二芳基庚烷類化合物,通過(guò)對(duì)比干姜水煎煮液和附子、干姜、甘草配伍后水煎煮液中二芳基庚烷類化合物HPLC-MS提取離子流色譜圖發(fā)現(xiàn),采用配伍/飲片對(duì)應(yīng)的化學(xué)成分的積分面積比值(四逆湯中的積分面積比干姜中的積分面積)考察配伍對(duì)二芳基庚烷類化合物的影響,從色譜保留行為、質(zhì)譜數(shù)據(jù)等推測(cè)某些化合物的差向異構(gòu)體在復(fù)方煎煮過(guò)程中發(fā)生了顯著的立體選擇性反應(yīng),由外消旋體變成了單一旋光異構(gòu)體,并從這些化合物的結(jié)構(gòu)特征推測(cè),吡喃環(huán)C4-位手性碳原子上的羥基乙酰化可能是減少這種反應(yīng)的關(guān)鍵因素。研究者根據(jù)傳統(tǒng)中藥復(fù)方,選取具有代表性的藥材分別與苦參配伍,用水煎提取后,比較配伍前后苦參堿和氧化苦參堿含量變化,發(fā)現(xiàn)中藥復(fù)方配伍后,氧化苦參堿含量降低,而苦參堿含量升高。說(shuō)明苦參入藥后苦參堿和氧化苦參堿之間存在相互轉(zhuǎn)化。崔健等采用薄層掃描法研究了山豆根主要化學(xué)成分苦參堿和氧化苦參堿在復(fù)方中化學(xué)成分的變化,結(jié)果表明,山豆根分別與丹參、木蝴蝶、黃柏、玄參等配伍合煎時(shí),氧化苦參堿含量隨時(shí)間的延長(zhǎng)而減少直至消失;苦參堿含量增加。作者認(rèn)為這是因?yàn)檠趸鄥A的結(jié)構(gòu)中含有N-O配位鍵,與含羥基、醛基、雙鍵等基團(tuán)的化合物合煎(加熱條件下)時(shí),會(huì)被還原為苦參堿。艾云采用高效液相色譜法,在定量研究氧化苦參堿向苦參堿的轉(zhuǎn)化過(guò)程的同時(shí),分析其他化學(xué)成分的變化。研究結(jié)果表明,苦參與蛇床子配伍過(guò)程中有新成分產(chǎn)生及某些成分的消失,經(jīng)核磁氫譜和色譜保留時(shí)間及紫外吸收研究共煎時(shí)新產(chǎn)生的成分和蛇床子中消失的成分,大致判斷為氧化還原反應(yīng)(氧化苦參堿作為氧化劑被還原成苦參堿作為已知半反應(yīng))的另一個(gè)半反應(yīng)。作者認(rèn)為這是證明在中藥復(fù)方中有氧化還原反應(yīng)發(fā)生的完整證據(jù)。魏其才等采用絡(luò)合滴定法對(duì)甘草與生石膏配伍煎煮前后,煎液中鈣鹽含量的變化進(jìn)行了考察,結(jié)果表明,配伍后生石膏中硫酸鈣煎出量有所下降,但煎液中鈣鹽總量仍略有升高,可能由于甘草酸類成分與鈣離子結(jié)合生成不溶性鈣鹽,在甘草單煎液中可測(cè)出部分可溶性鈣鹽。研究認(rèn)為石膏清熱之功在于鈣離子,麻杏石甘湯清熱的物質(zhì)基礎(chǔ)可能與其中的微量元素同有機(jī)成分的協(xié)同作用有關(guān),即石膏的主要無(wú)機(jī)元素鈣、鐵、錳、鋅等與麻黃堿、甘草酸、杏仁苷形成絡(luò)合物。蘇子仁等在利用GC-MS法研究大黃提取精制工藝的過(guò)程中,發(fā)現(xiàn)大黃素在煎煮過(guò)程中發(fā)生開環(huán)等一系列化學(xué)反應(yīng),推測(cè)這些反應(yīng)與大黃素在水中發(fā)揮醌類遞氫體作用,催化自身氧化還原反應(yīng)有關(guān)。羅尚鳳等采用GC-MS法以白術(shù)中有效化學(xué)成分蒼術(shù)酮、蒼術(shù)內(nèi)酯、羥基蒼術(shù)內(nèi)酯和脫水羥基蒼術(shù)內(nèi)酯為標(biāo)準(zhǔn),對(duì)白術(shù)在炮制、組方等不同狀況下這4種成分的含量和變化進(jìn)行了研究,結(jié)果發(fā)現(xiàn)在炮制時(shí),白術(shù)中的蒼術(shù)酮氧化生成蒼術(shù)內(nèi)酯和羥基蒼術(shù)內(nèi)酯;而在與枳實(shí)組方時(shí),蒼術(shù)內(nèi)酯和羥基蒼術(shù)內(nèi)酯又可還原成蒼術(shù)酮。有關(guān)學(xué)者對(duì)生脈散(由人參、麥冬、五味子3味藥組成)煎煮前后的化學(xué)成分進(jìn)行了研究,發(fā)現(xiàn)單味人參、麥冬、五味子在煎煮前均不含5-羥甲基-2-糠醛(5-HMF),單味五味子水煎后能產(chǎn)生少量的5-HMF,人參、麥冬與五味子配伍的水煎液中5-HMF的含量顯著增高,由此推斷5-HMF的形成可能與五味子的酸性有關(guān)。朱丹妮等進(jìn)一步探討5-HMF在生脈散各配伍組中的含量變化,用高效液相色譜法測(cè)定了不同配伍組中5-HMF的含量,并測(cè)定了不同煎煮時(shí)間、煎煮次數(shù)及不同比例的麥冬與五味子配伍對(duì)5-HMF含量的影響。結(jié)果表明,5-HMF是麥冬與五味子共煎過(guò)程中生成的,含量隨麥冬的增加而增加,以煎煮1.5h為最高,且前兩次煎煮即可提取完全。據(jù)此分析生脈散中5-HMF產(chǎn)生和變化機(jī)理為:麥冬在與五味子共煎時(shí)(酸性條件下),麥冬中所含的糖降解生成了5-HMF。二、中藥復(fù)方化學(xué)成分的分類中藥復(fù)方化學(xué)成分的研究目前處于多方法、多途徑的探索階段,現(xiàn)代科學(xué)的高速發(fā)展為中藥復(fù)方的化學(xué)成分和體內(nèi)成分的研究提供了簡(jiǎn)便、快速、高效的技術(shù)手段。對(duì)于中藥復(fù)方化學(xué)成分的現(xiàn)代研究,主要有兩大類。其一,是藥理活性篩選結(jié)合分離純化、結(jié)構(gòu)鑒定的方法,此處簡(jiǎn)稱植物化學(xué)法。其二,是以化學(xué)分析為基礎(chǔ)的定性、定量分析法。比較常用的包括薄層色譜法、液相色譜法、氣相色譜法等色譜法,軟電離質(zhì)譜法,以及與上述方法聯(lián)用的研究方法等。1.復(fù)方化學(xué)組分檢測(cè)方法不一,其分植物化學(xué)方法將中藥復(fù)方視為一個(gè)整體,采用各種現(xiàn)代化學(xué)方法和色譜技術(shù),對(duì)其化學(xué)成分進(jìn)行系統(tǒng)的提取、分離、純化和結(jié)構(gòu)鑒定,同時(shí)結(jié)合一定的藥理實(shí)驗(yàn)?zāi)Ｐ?確定復(fù)方的有效部位(組分)。它采用了系統(tǒng)提取分離和結(jié)構(gòu)鑒定的思路,有助于了解復(fù)方的化學(xué)物質(zhì)基礎(chǔ),并且可以兼顧有效組分的篩選,通過(guò)與單味藥成分的比較,也有可能發(fā)現(xiàn)復(fù)方配伍后是否產(chǎn)生的新化合物。如譚洪根等采用柱層析結(jié)合薄層鑒別法,從芍藥與甘草共煎的水提取物中分離出11個(gè)化合物,分別為苯甲酸、芒柄花素、異甘草苷元、甘草苷元、4,7-二羥基黃酮、芒柄花苷、甘草苷、沒食子酸、芍藥苷、異甘草苷和甘草酸。植物化學(xué)方法的缺點(diǎn)有兩個(gè)方面,一是不夠靈敏,分離純化所獲得的成分種類有限,往往是含量比較高的成分,不能全面地反映復(fù)方的化學(xué)組成。二是不能反映煎煮過(guò)程中由于配伍引起的化學(xué)成分之間在含量變化上的影響。植物化學(xué)分離純化主要以獲得一定量的純凈化合物以滿足結(jié)構(gòu)分析的需要,相對(duì)而言,忽視了物質(zhì)轉(zhuǎn)移過(guò)程中的量值轉(zhuǎn)移效率,經(jīng)過(guò)多次處理,植物化學(xué)法在量值傳遞方面必然帶入較大的誤差,因此不能較好地反映定量關(guān)系。如上述對(duì)芍藥甘草湯的研究過(guò)程中,只是提取分離得到并鑒定了11個(gè)化合物成分,只能說(shuō)明在復(fù)方中這些成分仍然存在,并不能反映復(fù)方煎煮過(guò)程中,哪些成分的相對(duì)含量發(fā)生了變化。同時(shí),芍藥甘草湯中的化學(xué)成分遠(yuǎn)不只這11種。2.基于成分變化的比較應(yīng)用于中藥復(fù)方在煎煮過(guò)程中化學(xué)成分變化的色譜學(xué)方法主要包括氣相色譜(GC)、液相色譜和薄層色譜等。色譜分析方法可對(duì)一種或幾種化學(xué)成分進(jìn)行比較準(zhǔn)確的定量分析,因此,可以對(duì)煎煮過(guò)程中配伍引起的化學(xué)成分含量變化進(jìn)行準(zhǔn)確、靈敏的比較,從而把握配伍引起的藥效、用途變化的物質(zhì)基礎(chǔ)。但是,如前所述,單純考察一種或幾種成分的變化,并不能反映復(fù)方的全部,對(duì)于未被考察的成分,不能進(jìn)行含量變化關(guān)系的考察,因此,有可能會(huì)出現(xiàn)錯(cuò)誤的推論。例如艾云的研究中認(rèn)為復(fù)方中增加的色譜信號(hào)和減少的信號(hào)是氧化苦參堿還原為苦參堿的還原劑發(fā)生氧化反應(yīng)的結(jié)果。但是從減少信號(hào)部位的組分和增加信號(hào)部位的組分的核磁共振氫譜,兩者結(jié)構(gòu)上不應(yīng)該有太大的相似性。如前所述,復(fù)方煎煮過(guò)程引起煎煮液中化學(xué)成分變化的因素很多,因此,需要經(jīng)過(guò)系統(tǒng)的研究才能搞得出合理的結(jié)論。3.傳統(tǒng)質(zhì)量分析模型電噴霧質(zhì)譜(ESI-MS)的出現(xiàn)使復(fù)雜組分的溶液直接用于質(zhì)譜分析,從中獲得溶液中的化合物的分子量信息和碎片離子組成信息成為可能。質(zhì)譜分析有較強(qiáng)的分離能力,可以區(qū)分分子量不同的化合物的離子。利用二級(jí)質(zhì)譜特異性的碎片離子,質(zhì)譜可以對(duì)分子結(jié)構(gòu)不同的同分異構(gòu)體分別進(jìn)行定量分析。利用電噴霧質(zhì)譜直接進(jìn)樣分析中藥提取物,可以快速獲得中藥提取物中大致的物質(zhì)組成情況。研究者利用這種技術(shù)對(duì)中藥附子在炮制、配伍煎煮過(guò)程中生物堿類成分的變化規(guī)律進(jìn)行了大量的研究。結(jié)果表明,在附子炮制過(guò)程中,雙酯鍵取代的烏頭堿類化合物酯鍵連接的取代基會(huì)發(fā)生水解反應(yīng),生成毒性較低,溶解性更好的單酯鍵取代生物堿。炙甘草、大黃、白芍、干姜、山茱萸等藥材與附子配伍時(shí),可以促進(jìn)雙酯烏頭堿水解。而山藥、白術(shù)、半夏、五味子等藥材與附子配伍時(shí),可能促進(jìn)雙酯烏頭堿的溶出,或減少其酯鍵的水解。大黃與附子配伍時(shí),烏頭堿可能與大黃的某些成分結(jié)合而生成難溶復(fù)合物從而減少方劑中雙酯烏頭堿的含量。而另有一些中草藥,如肉桂、丹皮、澤瀉、地黃、茯苓等則對(duì)附子烏頭堿沒有影響。直接質(zhì)譜分析應(yīng)用于中藥提取物直接分析的缺陷表現(xiàn)在以下幾個(gè)方面。第一,同分異構(gòu)體難以直接用質(zhì)譜區(qū)分。中藥提取物中存在大量的天然化合物的分子量信息和二級(jí)質(zhì)譜信息完全相同,如甘草中的二氫黃酮和查爾酮及其相應(yīng)的糖復(fù)合物;有些化合物在結(jié)構(gòu)上的區(qū)別僅僅是取代基的連接位置的差別,例如人參皂苷Rb2,Rb3和Rc。烏頭屬植物中發(fā)現(xiàn)的與烏頭堿分子元素組成完全一致的化合物有4種,這些化合物單純采用質(zhì)譜是難以區(qū)分的。第二,源內(nèi)裂解(Insourcedissociation)產(chǎn)生的離子難以同提取物中的化合物產(chǎn)生的離子區(qū)分。一個(gè)離子從離子源產(chǎn)生后,在進(jìn)入質(zhì)量分析器之前,可能會(huì)在傳輸過(guò)程中發(fā)生裂解,質(zhì)量分析器不能區(qū)分這些離子的來(lái)源。例如,人參皂苷Re可能因?yàn)樵磧?nèi)裂解脫除一份子鼠李糖而產(chǎn)生與Rg1質(zhì)荷比相同的離子,如果這兩種中物質(zhì)的混合物直接進(jìn)行質(zhì)譜分析,則對(duì)應(yīng)于Rg1的離子中可能有部分來(lái)源于Re的源內(nèi)裂解。通常乙?；⒓柞；?、苯甲?；〈幕衔镏恍枰獛讉€(gè)伏特的電勢(shì)差就可以發(fā)生源內(nèi)裂解。另外,離子化過(guò)程中的離子抑制效應(yīng)(Ionsuppression)以及離子阱質(zhì)譜的空間電荷效應(yīng)對(duì)直接應(yīng)用質(zhì)譜分析復(fù)雜混合物的結(jié)果產(chǎn)生影響。4.基于gc-ms和ms-ms前化合物的配伍組成,進(jìn)行有針對(duì)性的重新確定,并通過(guò)進(jìn)行質(zhì)譜質(zhì)譜聯(lián)用方法進(jìn)行定功能性定量比較,從其中有利于促進(jìn)復(fù)方化學(xué)協(xié)同作用的裝置出現(xiàn)中藥復(fù)方是一個(gè)非常復(fù)雜的研究體系,對(duì)這種復(fù)雜體系的化學(xué)成分進(jìn)行盡量全面的表征需要采用分辨率較高的分析方法。色譜和質(zhì)譜兩種方法均具備較好的分離能力,兩種方法聯(lián)用,可以比較全面地分辨研究體系中不同物質(zhì)產(chǎn)生的信號(hào)響應(yīng)。另外,質(zhì)譜信息可以對(duì)分析目標(biāo)進(jìn)行一定程度的定性研究,所以色譜質(zhì)譜聯(lián)用是目前最適合中藥復(fù)方研究的方法之一。色譜質(zhì)譜聯(lián)用方法的最大優(yōu)勢(shì)在于可以根據(jù)化合物類群的結(jié)構(gòu)特征,對(duì)具有共同結(jié)構(gòu)的化合物類群進(jìn)行定性定量比較,從而發(fā)現(xiàn)復(fù)方合煎過(guò)程中,同一類群的化合物發(fā)生的相同的變化,從而比較明確地推斷復(fù)方化學(xué)協(xié)同作用的反應(yīng)機(jī)理。近年來(lái),學(xué)者們利用色譜質(zhì)譜聯(lián)用的方法,充分利用質(zhì)譜的定性功能,從化合物類群的角度對(duì)復(fù)方煎煮過(guò)程中配伍對(duì)化學(xué)成分的影響進(jìn)行了非常有意義的探索。魏鳳環(huán)等通過(guò)應(yīng)用EI-MS定性鑒定了不同配伍組成中的桂皮醛,并利用GC-MS在不同配伍組成中對(duì)該成分進(jìn)行定量研究,得出麻黃能顯著降低桂皮醛溶出量的結(jié)論。肖盛元等通過(guò)分析干姜中的二芳基庚烷類化合物的ESI-MS/MS裂解規(guī)律,利用HPLC-MS/MS從干姜中鑒定出18種二芳基庚烷類化合物。并發(fā)現(xiàn)該類化合物差向異構(gòu)體在四逆湯復(fù)方配伍煎煮過(guò)程中發(fā)生了顯著的立體選擇性反應(yīng)。蘇子仁等在研究大黃提取精制工藝的過(guò)程中,利用GC-MS法探討大黃素在煎煮過(guò)程中的濕熱分解機(jī)理,同時(shí)定性定量了30多種大黃素濕熱降解產(chǎn)物,發(fā)現(xiàn)濕熱確能使大黃素開環(huán),發(fā)生一系列化學(xué)反應(yīng)。三、復(fù)配方的化學(xué)影響因素方劑配伍是中醫(yī)的精華之一,同一種藥材經(jīng)過(guò)不同的炮制加工和不同的配伍,發(fā)揮不同的臨床功效。研究方劑配伍引起的復(fù)方化學(xué)成分的變化,是研究復(fù)方協(xié)同發(fā)揮藥效作用物質(zhì)基礎(chǔ)的途徑之一。復(fù)方化學(xué)背景非常復(fù)雜,研究過(guò)程中涉及到的影響因素比較多,因此,采用合適的研究方法是獲得反應(yīng)配伍對(duì)化學(xué)成分影響的真實(shí)作用。從研究過(guò)程的各個(gè)環(huán)節(jié)看,主要包括以下幾個(gè)方面:1.復(fù)方配伍中物質(zhì)的穩(wěn)定性研究復(fù)方配伍引起的化學(xué)成分的變化,需要精確地比較復(fù)方和單味藥材在相同條件下處理后化學(xué)成分的差異,如前所述,這些成分的差異主要表現(xiàn)在含量變化方面,因此,樣品處理過(guò)程需要總是分析結(jié)果的可比性,盡可能消除處理過(guò)程帶來(lái)的偶然誤差。另外,復(fù)方配伍引起的化學(xué)成分變化應(yīng)該是在復(fù)方煎煮這一特殊條件下產(chǎn)生的,才能反映復(fù)方配伍改變藥物效應(yīng)物質(zhì)基礎(chǔ)的意義,因此,在樣品處理過(guò)程中有必要確認(rèn)樣品處理?xiàng)l件不至于引起復(fù)方物質(zhì)的變化。例如,對(duì)生脈散的復(fù)方化學(xué)研究中,研究者將大孔吸附樹脂柱洗脫的組分于蒸發(fā)皿水浴干燥,殘留物用甲醇溶解定容后進(jìn)行分析,似乎沒有考慮到復(fù)方中的酸性成分(來(lái)源于組方中的五味子)對(duì)人參皂苷降解的影響。達(dá)瑪烷型人參皂苷的C-20位糖苷鍵在酸性條件下加熱極易水解,生成相應(yīng)的次級(jí)產(chǎn)物,如Rg3。因此,需要排除這種由于樣品制備過(guò)