不同蛋白質(zhì)源部分替代魚(yú)粉對(duì)褐點(diǎn)石斑魚(yú)幼魚(yú)生長(zhǎng)性能、體組成及血清生化指標(biāo)的影響

不同蛋白質(zhì)源部分替代魚(yú)粉對(duì)褐點(diǎn)石斑魚(yú)幼魚(yú)生長(zhǎng)性能、體組成及血清生化指標(biāo)的影響

飼料中的蛋白質(zhì)主要來(lái)自動(dòng)和植物蛋白質(zhì)的原料。由于魚(yú)粉含有高蛋白質(zhì)含量、所需氨基酸含量高、易于被水生動(dòng)物吸收的優(yōu)點(diǎn)，它是水生動(dòng)物的首選優(yōu)質(zhì)蛋白質(zhì)的來(lái)源。但是,隨著水產(chǎn)養(yǎng)殖業(yè)的迅速發(fā)展和漁獲量的降低,魚(yú)粉價(jià)格不斷攀升,導(dǎo)致水產(chǎn)飼料價(jià)格居高不下。因此,尋找魚(yú)粉的替代品成為水產(chǎn)動(dòng)物營(yíng)養(yǎng)研究的熱點(diǎn)?，F(xiàn)有的研究多是利用來(lái)源廣泛、價(jià)格低廉的植物性蛋白質(zhì)源來(lái)替代魚(yú)粉,雖然植物性蛋白質(zhì)源具有適口性差、氨基酸不平衡、存在抗?fàn)I養(yǎng)因子等缺點(diǎn),但通過(guò)適當(dāng)?shù)募庸ぬ幚砗涂茖W(xué)的設(shè)計(jì)配方,可以成為魚(yú)粉的優(yōu)良替代品。褐點(diǎn)石斑魚(yú)(Epinephelusfuscoguttatus),又稱(chēng)棕點(diǎn)石斑魚(yú),俗稱(chēng)老虎斑、虎頭斑,在分類(lèi)學(xué)上隸屬鱸形目,鱸亞目,科,石斑魚(yú)亞科,石斑魚(yú)亞屬,為暖水性島礁性魚(yú)類(lèi),在我國(guó)主要分布于東海和南海,資源量稀少。由于其肉味鮮美、生長(zhǎng)快、市場(chǎng)潛力大,養(yǎng)殖前景看好,已成為福建、廣東、海南等地海水養(yǎng)殖的重要名優(yōu)品種之一。豆粕、玉米蛋白粉、啤酒酵母是動(dòng)物飼料中常用的蛋白質(zhì)飼料。已有研究發(fā)現(xiàn),石斑魚(yú)(Epinepheluscoioides)、軍曹魚(yú)(Rachycentroncanadum)、哲羅魚(yú)(Huchotaimen)、牙鲆(Paralichthysolivaceus)、金鯧魚(yú)(Trachinotusovatus)飼料中大豆蛋白替代魚(yú)粉蛋白的比例以不超過(guò)25%為宜。關(guān)于海水魚(yú)飼料中玉米蛋白粉和啤酒酵母替代魚(yú)粉的研究目前較少,對(duì)部分蝦類(lèi)、淡水魚(yú)類(lèi)和中華鱉(Pelodiscussinensis)的研究發(fā)現(xiàn),飼料中玉米蛋白粉和啤酒酵母替代魚(yú)粉比例不宜超過(guò)10%。為找到可部分替代魚(yú)粉且適合褐點(diǎn)石斑魚(yú)生長(zhǎng)的蛋白質(zhì)源,本試驗(yàn)擬分別采用豆粕、啤酒酵母、玉米蛋白粉部分替代飼料中的魚(yú)粉,研究這3種蛋白質(zhì)源部分替代魚(yú)粉后對(duì)褐點(diǎn)石斑魚(yú)幼魚(yú)生長(zhǎng)性能、體組成以及血清生化指標(biāo)的影響,為今后褐點(diǎn)石斑魚(yú)人工復(fù)合飼料的研發(fā)提供理論依據(jù)。1材料和方法1.1營(yíng)養(yǎng)水平的測(cè)定試驗(yàn)設(shè)計(jì)5種等氮等能的飼料,對(duì)照組飼料(D1)以魚(yú)粉為唯一蛋白質(zhì)源,試驗(yàn)組飼料(D2~D5)是在對(duì)照組飼料的基礎(chǔ)上分別用豆粕替代10%的魚(yú)粉、豆粕替代20%的魚(yú)粉、啤酒酵母替代10%的魚(yú)粉、玉米蛋白粉替代10%的魚(yú)粉。試驗(yàn)飼料中添加0.5%的三氧化二鉻(Cr2O3)作為營(yíng)養(yǎng)物質(zhì)表觀(guān)消化率測(cè)定的指示劑,其組成及營(yíng)養(yǎng)水平見(jiàn)表1。飼料原料均購(gòu)自粵海飼料集團(tuán)有限公司,經(jīng)粉碎后過(guò)60目篩,再經(jīng)制粒機(jī)加工成直徑為3.0mm的顆粒料,風(fēng)干后置于4℃冰箱中備用。1.2正式試驗(yàn)魚(yú)及試驗(yàn)用水試驗(yàn)用褐點(diǎn)石斑魚(yú)幼魚(yú)由海南石斑魚(yú)苗場(chǎng)提供。褐點(diǎn)石斑魚(yú)幼魚(yú)從育苗池運(yùn)到實(shí)驗(yàn)室水槽后,采用對(duì)照組飼料進(jìn)行馴化,馴化時(shí)間為10d,在幼魚(yú)完全適應(yīng)實(shí)驗(yàn)室養(yǎng)殖環(huán)境,攝食活躍,且沒(méi)有意外死亡的情況下進(jìn)入正式試驗(yàn)。選取體重在15g左右的褐點(diǎn)石斑魚(yú)幼魚(yú)180尾,隨機(jī)分為5組,每組3個(gè)重復(fù),每個(gè)重復(fù)12尾。試驗(yàn)魚(yú)以重復(fù)為單位飼養(yǎng)于半自動(dòng)充氣循環(huán)水族箱(60cm×52cm×60cm)中,每個(gè)水族箱裝水150L,24h充氣,每天09:00和15:00定時(shí)投喂飼料至飽食狀態(tài),投喂結(jié)束后撈出剩料。試驗(yàn)用水為經(jīng)曝氣、沉淀、沙濾及網(wǎng)濾的天然海水,鹽度27‰~32‰。試驗(yàn)期間每天測(cè)1次水溫,每周測(cè)1次水體溶氧和氨氮,水族箱內(nèi)水溫保持在(28±1)℃,氨氮低于0.5mg/L,溶氧高于5mg/L,pH6.7左右,自然光照,8周后結(jié)束試驗(yàn)。1.3飼料和糞樣營(yíng)養(yǎng)成分的測(cè)定分別在試驗(yàn)開(kāi)始和結(jié)束時(shí)對(duì)各重復(fù)魚(yú)進(jìn)行計(jì)數(shù)和稱(chēng)重,并記錄投料量和剩料量。試驗(yàn)結(jié)束后將魚(yú)禁食1d,從每組中隨機(jī)選取12尾魚(yú)(每個(gè)重復(fù)中隨機(jī)選取4尾魚(yú)),其中6尾烘干后用于測(cè)定全魚(yú)組成,另6尾用于測(cè)定體重、肝臟重、肌肉組成以及血清生化指標(biāo)。試驗(yàn)飼料和魚(yú)體營(yíng)養(yǎng)成分的測(cè)定采用AOAC(1995)的方法,即干物質(zhì)含量采用105℃恒溫干燥法測(cè)定;粗蛋白質(zhì)含量采用凱氏定氮法測(cè)定,粗脂肪含量采用索氏抽提法測(cè)定,灰分含量采用高溫(550℃)灼燒法測(cè)定。飼料和糞樣中Cr2O3的測(cè)定參照Bolin等的方法。采用2mL一次性無(wú)菌注射器從尾鰭后方的尾靜脈采血,將采集的血液注入玻璃采血管中,于4℃條件下靜置,待血液分層后,置于離心機(jī)中以3000r/min離心10min,用微量移液槍將血清轉(zhuǎn)入1.5mL離心管中,用日立全自動(dòng)生化分析儀進(jìn)行血清生化指標(biāo)的測(cè)定。1.4增重率的計(jì)算成活率(survivalratio,SR,%)=100×試驗(yàn)結(jié)束時(shí)魚(yú)尾數(shù)/試驗(yàn)開(kāi)始時(shí)魚(yú)尾數(shù);增重率(weightgainrate,WGR,%)=100×(終末體重-初始體重+死亡魚(yú)體重)/初始體重;飼料系數(shù)(feedconversionratio,FCR)=(投料量-剩料量)/(終末體重-初始體重+死亡魚(yú)體重);1.5統(tǒng)計(jì)學(xué)分析試驗(yàn)結(jié)果以平均值±標(biāo)準(zhǔn)差表示。采用SPSS16.0對(duì)數(shù)據(jù)進(jìn)行統(tǒng)計(jì)學(xué)分析,先對(duì)數(shù)據(jù)進(jìn)行單因素方差分析(One-wayANOVA),再進(jìn)行Duncan氏多重比較,以檢驗(yàn)組間差異顯著性,P<0.05表示差異顯著。2結(jié)果與分析2.1對(duì)試驗(yàn)魚(yú)的一般資料的影響由表2可知,D2、D3組的增重率、攝食率、特定生長(zhǎng)率和粗蛋白質(zhì)表觀(guān)消化率與對(duì)照組差異不顯著(P>0.05),而D4、D5組的上述指標(biāo)均顯著低于對(duì)照組(P<0.05)。此外,D5組的增重率和粗蛋白質(zhì)表觀(guān)消化率還顯著低于D2組(P<0.05);D4、D5組的特定生長(zhǎng)率還顯著低于D2、D3組(P<0.05);D5組的攝食率還顯著低于D2、D3、D4組(P<0.05)。D4、D5組的干物質(zhì)表觀(guān)消化率顯著高于對(duì)照組和D2組(P<0.05),與D3組差異不顯著(P>0.05)。試驗(yàn)魚(yú)的飼料系數(shù)和肝體指數(shù)均以對(duì)照組最低,D5組最高。其中,飼料系數(shù)除D3、D4組間差異不顯著(P>0.05)外,其余各組間均差異顯著(P<0.05);而肝體指數(shù)除D2、D3組間差異不顯著(P>0.05)外,其余各組間均差異顯著(P<0.05)。各組試驗(yàn)魚(yú)的成活率差異不顯著(P>0.05)。2.2對(duì)肌肉組成的影響由表3可知,全魚(yú)組成中,D1、D2、D3組粗蛋白質(zhì)含量顯著高于D5組(P<0.05),與D4組無(wú)顯著差異(P>0.05);D1組粗脂肪含量顯著高于D5組(P<0.05),與D2、D3、D4組無(wú)顯著差異(P>0.05);水分含量在各組間均無(wú)顯著差異(P>0.05)。肌肉組成中,D1、D2、D3組粗蛋白質(zhì)含量顯著高于D5組(P<0.05),與D4組無(wú)顯著差異(P>0.05);D1組粗脂肪含量顯著高于D3、D4組(P<0.05),與D2、D5組無(wú)顯著差異(P>0.05);D1組水分含量顯著高于D3組(P<0.05),與D2、D4、D5組無(wú)顯著差異(P>0.05)。2.3血清白球、葡萄糖、試劑含量由表4可知,D1、D4組血清總蛋白含量顯著高于D3組(P<0.05),與D2、D5組無(wú)顯著差異(P>0.05);D1組血清球蛋白含量顯著高于D3組(P<0.05),與D2、D4、D5組無(wú)顯著差異(P>0.05);D3組血清白球比顯著高于其他各組(P<0.05);D1組血清葡萄糖含量顯著高于D3組(P<0.05),與D2、D4、D5組無(wú)顯著差異(P>0.05);D1、D4組血清甘油三酯含量顯著高于D3、D5組(P<0.05),與D2組無(wú)顯著差異(P>0.05)。各組試驗(yàn)魚(yú)的血清白蛋白、總膽固醇含量以及谷丙轉(zhuǎn)氨酶、谷草轉(zhuǎn)氨酶活性均差異不顯著(P>0.05)。3討論3.1豆?jié){替代魚(yú)粉對(duì)褐點(diǎn)石斑魚(yú)幼魚(yú)的影響目前,對(duì)單種蛋白質(zhì)源替代魚(yú)粉的研究較多,而對(duì)不同蛋白質(zhì)源之間替代效果對(duì)比的研究較少。水產(chǎn)動(dòng)物配合飼料中適宜蛋白質(zhì)源替代魚(yú)粉的比例與養(yǎng)殖動(dòng)物的種類(lèi)、食性等多種因素有關(guān),肉食性魚(yú)類(lèi)對(duì)蛋白質(zhì)的需求量比草食性和雜食性魚(yú)類(lèi)要高。羅智等研究表明,以發(fā)酵豆粕替代10%的魚(yú)粉不影響石斑魚(yú)幼魚(yú)的生長(zhǎng);高榮兵等研究發(fā)現(xiàn),在具有雜食偏植食性特點(diǎn)的點(diǎn)籃子魚(yú)(Siganusguttatus)飼料中,豆粕替代魚(yú)粉比例不宜超過(guò)1/3;Chou等研究得出,采用大豆蛋白替代40%的魚(yú)粉蛋白不影響軍曹魚(yú)幼魚(yú)的生長(zhǎng);Kaushik等認(rèn)為,虹鱒(Oncorhynchusmykiss)飼料中豆粕替代魚(yú)粉比例不宜超過(guò)25%;Shimeno等研究發(fā)現(xiàn),黃獅魚(yú)飼料中豆粕替代魚(yú)粉比例不宜超過(guò)20%。本試驗(yàn)中,D2、D3組試驗(yàn)魚(yú)的飼料系數(shù)和蛋白質(zhì)效率顯著低于對(duì)照組,這可能是因?yàn)槎蛊芍写嬖诘目範(fàn)I養(yǎng)因子和氨基酸不平衡性影響了試驗(yàn)魚(yú)對(duì)飼料中營(yíng)養(yǎng)成分的吸收;但增重率、特定生長(zhǎng)率、肝體指數(shù)與對(duì)照組相比無(wú)顯著差異,這說(shuō)明飼料中以豆粕替代20%的魚(yú)粉并不影響褐點(diǎn)石斑魚(yú)幼魚(yú)的正常生長(zhǎng)。一般認(rèn)為,魚(yú)類(lèi)配合飼料中采用植物性蛋白質(zhì)源替代魚(yú)粉會(huì)降低飼料的適口性,本試驗(yàn)中的3種蛋白質(zhì)源替代魚(yú)粉后均降低了試驗(yàn)魚(yú)的攝食率,因此應(yīng)在進(jìn)一步的試驗(yàn)中添加更適合的誘食劑。在淡水魚(yú)中,陳然等對(duì)異育銀鯽(Carassiusauratusgibelio)的研究發(fā)現(xiàn),當(dāng)飼料中玉米蛋白粉替代魚(yú)粉比例達(dá)到16%時(shí),試驗(yàn)魚(yú)的粗蛋白質(zhì)表觀(guān)消化率、干物質(zhì)表觀(guān)消化率和增重率顯著降低;李自金等對(duì)草魚(yú)(Ctenopharyngodonidellua)的研究發(fā)現(xiàn),用啤酒酵母替代飼料中3%的魚(yú)粉有助于草魚(yú)的生長(zhǎng)。在海水魚(yú)中,Shiau等對(duì)點(diǎn)帶石斑魚(yú)(Epinephelusmalabaricus)的研究發(fā)現(xiàn),隨著飼料中玉米淀粉含量的增加,點(diǎn)帶石斑魚(yú)的粗蛋白質(zhì)表觀(guān)消化率和增重率降低,體組成中的粗脂肪含量升高;Laining等認(rèn)為,老鼠斑(Cromileptesaltivelis)對(duì)飼料中富含碳水化合物的植物成分難以消化,導(dǎo)致粗蛋白質(zhì)表觀(guān)消化率、干物質(zhì)表觀(guān)消化率降低。本試驗(yàn)中,D4、D5組試驗(yàn)魚(yú)的生長(zhǎng)性能顯著低于對(duì)照組,這說(shuō)明飼料中以玉米蛋白粉和啤酒酵母替代10%的魚(yú)粉不適合褐點(diǎn)石斑魚(yú)幼魚(yú)的生長(zhǎng),其原因在于:與魚(yú)粉和豆粕相比,玉米蛋白粉中賴(lài)氨酸、蛋氨酸、色氨酸等必需氨基酸缺乏;此外,玉米蛋白粉含有大量的多糖,而褐點(diǎn)石斑魚(yú)對(duì)植物添加成分中的多糖難以消化,這與Shiau等、Laining等、Chen等等對(duì)其他品種石斑魚(yú)的研究結(jié)果相似。適量的啤酒酵母雖因含有益生素可通過(guò)改善腸道健康提高飼料消化率,但過(guò)高的用量(如本試驗(yàn)中9.25%的用量)則可能因?yàn)楹羞^(guò)量的核酸等非蛋白氮而影響營(yíng)養(yǎng)物質(zhì)的吸收。因此,本研究認(rèn)為,玉米蛋白粉和啤酒酵母替代10%的魚(yú)粉不能滿(mǎn)足褐點(diǎn)石斑魚(yú)幼魚(yú)的營(yíng)養(yǎng)需求,進(jìn)一步的試驗(yàn)需要考慮降低玉米蛋白粉和啤酒酵母對(duì)魚(yú)粉的替代比例,或者嘗試以其他蛋白質(zhì)源替代魚(yú)粉。3.2玉米蛋白粉或豆?jié){替代魚(yú)粉比例對(duì)褐點(diǎn)石斑魚(yú)幼魚(yú)全魚(yú)的影響對(duì)軍曹魚(yú)、虹鱒的研究發(fā)現(xiàn),大豆蛋白含量的增加未對(duì)魚(yú)體體組成產(chǎn)生負(fù)面影響;韓斌等研究發(fā)現(xiàn),玉米蛋白粉替代魚(yú)粉未對(duì)凡納濱對(duì)蝦(Litopenaeusvannamei)體組成產(chǎn)生顯著影響;而Deng等對(duì)牙鲆幼魚(yú)的研究發(fā)現(xiàn),大豆蛋白替代魚(yú)粉比例的增加使魚(yú)體粗蛋白質(zhì)含量顯著降低。本試驗(yàn)發(fā)現(xiàn),飼料中以玉米蛋白粉替代10%的魚(yú)粉時(shí),褐點(diǎn)石斑魚(yú)幼魚(yú)全魚(yú)粗蛋白質(zhì)和粗脂肪含量顯著降低;飼料中以豆粕替代20%的魚(yú)粉時(shí),褐點(diǎn)石斑魚(yú)幼魚(yú)肌肉粗脂肪和水分含量顯著降低。上述結(jié)果說(shuō)明,未經(jīng)過(guò)高溫膨化的大豆蛋白中存在胰蛋白酶抑制因子、大豆凝集素等抗?fàn)I養(yǎng)因子,限制了魚(yú)體對(duì)飼料中營(yíng)養(yǎng)物質(zhì)的吸收,導(dǎo)致了肌肉中粗脂肪含量的降低,這與哲羅魚(yú)、牙鲆、點(diǎn)籃子魚(yú)的研究結(jié)果相似;而玉米蛋白粉中雖然抗?fàn)I養(yǎng)因子較少,但其碳水化合物含量較多且氨基酸平衡性差,導(dǎo)致試驗(yàn)魚(yú)全魚(yú)粗蛋白質(zhì)和粗脂肪含量都顯著降低,這與試驗(yàn)魚(yú)的生長(zhǎng)性能所反映的情況相一致。3.3豆?jié){替代魚(yú)粉對(duì)褐點(diǎn)石斑魚(yú)幼魚(yú)營(yíng)養(yǎng)特性的影響研究表明,哲羅魚(yú)血漿中總蛋白含量隨大豆分離蛋白替代魚(yú)粉比例的增加呈降低趨勢(shì),而牙鲆肝臟中總蛋白含量隨豆粕替代魚(yú)粉比例的增加呈升高趨勢(shì)。本試驗(yàn)中,在以豆粕替代20%的魚(yú)粉時(shí),顯著降低了試驗(yàn)魚(yú)血清總蛋白和球蛋白含量,這是因?yàn)槎蛊芍械牡鞍彼?、?lài)氨酸含量均低于魚(yú)粉,且含有某些抗?fàn)I養(yǎng)因子,高豆粕含量飼料導(dǎo)致褐點(diǎn)石斑魚(yú)幼魚(yú)對(duì)飼料中蛋白質(zhì)的吸收能力降低。研究發(fā)現(xiàn),隨著飼料中豆粕含量的增加,牙鲆、虹鱒和異育銀鯽血清葡萄糖含量未產(chǎn)生顯著變化。Wilson認(rèn)為,飼料中復(fù)雜的碳水化合物結(jié)構(gòu)會(huì)降低魚(yú)體對(duì)營(yíng)養(yǎng)物質(zhì)的利用。本試驗(yàn)中,以豆粕替代20%魚(yú)粉的組褐點(diǎn)石斑魚(yú)幼魚(yú)血清葡萄糖含量顯著低于對(duì)照組,結(jié)合試驗(yàn)魚(yú)的生長(zhǎng)情況可知,褐點(diǎn)石斑魚(yú)幼魚(yú)不易消化吸收豆粕中的碳水化合物成分。研究發(fā)現(xiàn),牙鲆、點(diǎn)帶石斑魚(yú)、異育銀鯽血清膽固醇含量隨豆粕替代魚(yú)粉比例的增加呈降低趨勢(shì),而瘤棘鲆(Psettamaxima)血清膽固醇和甘油三酯含量隨玉米蛋白粉替代魚(yú)粉比例的增加而顯著降低。本試驗(yàn)中,3種蛋白質(zhì)源部分替代魚(yú)粉后對(duì)褐點(diǎn)石斑魚(yú)幼魚(yú)血清總膽固醇含量的影響并不顯著,結(jié)合血清谷草轉(zhuǎn)氨酶、谷丙轉(zhuǎn)氨酶活性的無(wú)顯著變化可以認(rèn)為,本試驗(yàn)中的3種蛋白質(zhì)源部分替代魚(yú)粉對(duì)褐點(diǎn)石斑魚(yú)幼魚(yú)血脂的合成與分解代謝以及肝功能和腎功能未產(chǎn)生負(fù)面影響。4褐點(diǎn)石斑魚(yú)幼魚(yú)的飼料質(zhì)量評(píng)價(jià)本試驗(yàn)條件下:①玉米蛋白粉和啤酒酵母替代10%的魚(yú)