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模塊十微生物的免疫技術(shù)Microbiologicalimmunologicaltechniques任務(wù)二血清學(xué)反應(yīng)內(nèi)容導(dǎo)入血清學(xué)反應(yīng)按抗原抗體反應(yīng)性質(zhì)不同,可分為凝集性反應(yīng)、沉淀反應(yīng)、有補體參與的反應(yīng)、中和反應(yīng)以及電免疫反應(yīng)、免疫轉(zhuǎn)印、蛋白質(zhì)芯片等技術(shù)。任務(wù)內(nèi)容凝集試驗:直接凝集試驗、間接凝集試驗、乳膠凝集試驗補體參與的試驗:補體結(jié)合試驗中和試驗:病毒中和試驗任務(wù)二血清學(xué)反應(yīng)沉淀試驗:環(huán)狀沉淀試驗、絮狀沉淀試驗、瓊脂擴散試驗、免疫電泳1、凝集反應(yīng)(agglutination)凝集反應(yīng)——顆粒性抗原與相應(yīng)抗體結(jié)合所發(fā)生的凝集反應(yīng)細菌和紅細胞等顆粒性抗原,當(dāng)與相應(yīng)抗體特異結(jié)合后,在適量電解質(zhì)存在的條件下,可逐漸聚集,出現(xiàn)肉眼可見的凝集現(xiàn)象稱為凝集反應(yīng)。反應(yīng)中的抗原稱為凝集原(agglutinogen)抗體稱為凝集素(agglutinin)。根據(jù)凝集反應(yīng)的原理,以后又發(fā)展建立了各種直接凝集試驗、間接凝集抑制試驗以及固相免疫吸附血凝試驗等新方法。1、凝集反應(yīng)(agglutination)直接凝集反應(yīng):抗原與抗體直接結(jié)合而發(fā)生的凝集反應(yīng)。玻片法:已知抗體檢測未知抗原(定性)。血清(適當(dāng)稀釋)與待檢菌懸液各一滴在玻片上混合,數(shù)分鐘后,出現(xiàn)顆粒狀凝集。試管法:已知抗原測定待測血清中有無某種抗體及其含量(定量)。將待檢血清進行倍比稀釋,然后加入等量抗原,37℃水浴數(shù)小時,觀察凝集程度。直接凝集反應(yīng)1、凝集反應(yīng)(agglutination)間接凝集反應(yīng):又稱為被動凝集反應(yīng)。利用某些與免疫反應(yīng)無關(guān)的均一的小顆粒物質(zhì)作為載體,將可溶性抗原(或抗體)吸附于表面,與相應(yīng)的抗體結(jié)合,在電解質(zhì)存在的適宜條件下,發(fā)生凝集現(xiàn)象。免疫微球:表面吸附抗原(或抗體)的載體微球稱為免疫微球。2、沉淀反應(yīng)(precipitation)沉淀反應(yīng)——可溶性抗原與相應(yīng)抗體結(jié)合所發(fā)生的沉淀反應(yīng)
沉淀反應(yīng)是指可溶性抗原(細菌培養(yǎng)濾液、細胞或組織的浸出液、血清蛋白等)與相應(yīng)抗體在液相中特異結(jié)合后,形成的免疫復(fù)合物受電解質(zhì)影響出現(xiàn)的沉淀現(xiàn)象。反應(yīng)中的抗原稱為沉淀原(precipitinogen),可以是類脂、多糖或蛋白質(zhì)等;抗體稱為沉淀素(precipitin)。1、絮狀沉淀反應(yīng)2、環(huán)狀沉淀反應(yīng)++——抗血清抗原抗原抗體2、沉淀反應(yīng)(precipitation)免疫擴散試驗(瓊脂擴散法)單向擴散試驗:是將已知抗體與1%的瓊脂混均勻制成凝膠板,在上面打圓孔,在孔內(nèi)加入抗原,在飽和濕度下擴散24小時,觀察環(huán)形沉淀帶。2、沉淀反應(yīng)(precipitation)單向擴散試驗單向擴散試驗的適用對象有特異性單價抗血清有已知含量的標(biāo)準(zhǔn)品待檢標(biāo)本抗原蛋白質(zhì)含量大于1.25μg2、沉淀反應(yīng)(precipitation)免疫擴散試驗(瓊脂擴散法)雙向擴散試驗:是在1%的瓊脂凝膠板上澆注2~3mm的凝膠板,在上面打梅花孔或長方形槽,在相鄰孔內(nèi)加抗原或抗體,在飽和濕度下擴散24小時,觀察沉淀帶。雙向擴散試驗的用途抗原、抗體相對含量測定抗原、抗體相對分子量分析抗原性質(zhì)分析3、補體結(jié)合反應(yīng)(complementfixationreaction)補體結(jié)合反應(yīng)——抗原抗體結(jié)合后激活補體所致的補體結(jié)合反應(yīng)原理:補體的作用無特異性,能與任何一種Ag-Ab復(fù)合物結(jié)合;但當(dāng)Ag與Ab不相對應(yīng)時,補體則不被結(jié)合而游離存在。此時如在上述反應(yīng)系統(tǒng)中加入綿羊紅細胞(Ag)和溶血素(Ab)系統(tǒng),即可與游離的補體結(jié)合而出現(xiàn)溶血現(xiàn)象。因此,根據(jù)溶血現(xiàn)象是否產(chǎn)生,即可得知檢測系統(tǒng)中有無相應(yīng)的抗原或抗體存在。3、補體結(jié)合反應(yīng)(complementfixationreaction)補體結(jié)合試驗:(CFT)抗原、抗體、補體、紅血球懸液、溶血素溶菌系統(tǒng)抗原
+抗體溶血系統(tǒng)紅血球
+溶血素待檢系統(tǒng)(無可見反應(yīng))指示系統(tǒng)(可見反應(yīng))補體補體結(jié)合試驗原理待檢系統(tǒng)指示系統(tǒng)補體補體結(jié)合試驗原理(結(jié)果陽性)待檢系統(tǒng)指示系統(tǒng)(不溶血)補體消耗補體結(jié)合試驗原理(結(jié)果陰性)待檢系統(tǒng)指示系統(tǒng)(溶血)補體未消耗4、中和反應(yīng)(neutralization)中和反應(yīng)——細菌外毒素或病毒與相應(yīng)抗體結(jié)合所致的中和反應(yīng)中和試驗是免疫學(xué)和病毒學(xué)中常用的一種抗原抗體反應(yīng)試驗方法,用以測定抗體、中和病毒感染性或細菌毒素的生物學(xué)效應(yīng)。凡能與病毒結(jié)合,使其失去感染力的抗體又稱中和抗體。能與細菌外毒素結(jié)合,中和其毒性作用的抗體稱為抗毒素。1.血清學(xué)反應(yīng)的類型:凝集反應(yīng)的類型、原理與應(yīng)用、沉淀反應(yīng)的類型、原理與應(yīng)用、補體結(jié)合反應(yīng)的原理與應(yīng)用、中和反應(yīng)的原理。思考與討論:我學(xué)到什么?任務(wù):簡述補體結(jié)合反應(yīng)的原理及結(jié)果判斷?思考討論與任務(wù)模塊十微生物的免疫技術(shù)Microbiologicalimmunologicaltechniques任務(wù)二血清學(xué)反應(yīng)內(nèi)容導(dǎo)入血清學(xué)鑒定是采用含有已知特異性抗體的免疫血清(診斷血清)與分離培養(yǎng)出的未知純種細菌或標(biāo)本中的抗原進行血清學(xué)反應(yīng),以確定病原菌的種或型。任務(wù)二血清學(xué)反應(yīng)任務(wù)內(nèi)容一、血清學(xué)反應(yīng)的定義二、血清學(xué)反應(yīng)的特點三、血清學(xué)反應(yīng)的主要影響因素任務(wù)二血清學(xué)反應(yīng)定義:抗體在體內(nèi)或體外都可以與相應(yīng)的抗原發(fā)生特異性的反應(yīng)。在體外進行的抗原和抗體反應(yīng)叫血清學(xué)反應(yīng)。一、血清學(xué)反應(yīng)的定義任務(wù)二血清學(xué)反應(yīng)1、抗原抗體結(jié)合的特異性與交叉性血清學(xué)反應(yīng)具有高度的特異性,如豬瘟病毒的抗體只與豬瘟病毒結(jié)合。同一抗原分子可具有多種不同的抗原表位,若兩種不同的抗原具有一個或多個相同(相似)的抗原表位,在與相應(yīng)抗體反應(yīng)時可出現(xiàn)交叉反應(yīng)(crossreacion)二、血清學(xué)反應(yīng)的特點任務(wù)二血清學(xué)反應(yīng)2、抗原抗體結(jié)合的可逆性抗原與抗體的結(jié)合為弱能量的共價結(jié)合,抗原抗體結(jié)合是分子表面的結(jié)合,該過程受物理、化學(xué)和熱力學(xué)的法則所制約,結(jié)合溫度在0~40℃,pH在4~9。如溫度超過60或pH在3以下,則可解離。二、血清學(xué)反應(yīng)的特點任務(wù)二血清學(xué)反應(yīng)3、抗原抗體結(jié)合的比例性與結(jié)合物的可見性等價帶表示抗原與抗體比例最合適,形成大而多的結(jié)合物,此時在反應(yīng)體系中測不出或有極少游離的抗原或抗體;抗體過剩帶(前帶)和抗原過剩帶(后帶)皆表示抗原與抗體的比例不合適,所形成的結(jié)合物少且小,在反應(yīng)體系中存在著較多的游離抗原或抗體二、血清學(xué)反應(yīng)的特點任務(wù)二血清學(xué)反應(yīng)4、抗原抗體反應(yīng)的階段性第一階段是抗原抗體的特異結(jié)合,此階段僅需幾秒到幾分鐘,尚無可見反應(yīng)第二階段為可見反應(yīng)階段,需數(shù)分鐘、數(shù)小時乃至數(shù)日,受各種因素影響二、血清學(xué)反應(yīng)的特點任務(wù)二血清學(xué)反應(yīng)三、血清學(xué)反應(yīng)的主要影響因素1、抗原和抗體濃度、比例:抗原和抗體濃度、比例對抗原抗體反應(yīng)影響最大、是決定性因素,
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