食品中有毒有害成分的分析-獸藥殘留量測定

獸藥的定義及作用獸藥的定義及作用

獸藥是指用于預(yù)防、治療、診斷動物疾病或者有目的地調(diào)節(jié)動物生理機能的物質(zhì)（含藥物飼料添加劑）?？捎糜谝话慵膊》乐?、傳染病防治、體內(nèi)、體外寄生蟲病防治、促進(jìn)動物生長等。除防治傳染病的生化免疫制品以及畜禽特殊寄生蟲病藥和促生長藥等專用獸藥外，其余均與人用相同，只是劑量、劑型和規(guī)格有所區(qū)別。Part02獸藥殘留的定義及種類獸藥殘留的定義及種類

1.定義獸藥殘留是“獸藥在動物源食品中的殘留”的簡稱，是指動物性產(chǎn)品的任何可食部分含有獸藥母體化合物或其代謝物，以及與獸藥有關(guān)的雜質(zhì)。因此，獸藥殘留既包括原藥，也包括藥物在動物體內(nèi)的代謝產(chǎn)物和獸藥生產(chǎn)中所伴生的雜質(zhì)。

獸藥殘留的定義及種類

2.獸藥殘留種類常見獸藥殘留的種類主要有：（1）抗生素類藥物（2）磺胺類藥物（3）硝基呋喃類藥物（4）抗寄生蟲類藥物（5）激素類藥物Part03獸藥殘留產(chǎn)生的原因獸藥殘留產(chǎn)生的原因

產(chǎn)生獸藥殘留的主要原因：（1）非法使用違禁或淘汰藥物；（2）不遵守休藥期規(guī)定；休藥期是指自停止給藥到動物獲準(zhǔn)屠宰或其動物性產(chǎn)品的獲準(zhǔn)上市的間隔時間，休藥期過短，是造成動物性食品獸藥殘留過量的一個重要原因。

獸藥殘留產(chǎn)生的原因

產(chǎn)生獸藥殘留的主要原因：（3）過量、多次使用藥物；（4）獸藥標(biāo)簽不合格，造成用戶盲目用藥；（5）屠宰前用藥。屠宰前用藥掩飾有病畜禽臨床癥狀，以逃避宰前檢驗。Part04獸藥殘留危害獸藥殘留危害

獸藥最高殘留限量是指某種獸藥在食物中或食物表面產(chǎn)生的最高允許獸藥殘留量，（一般單位為μg/kg）。長期食用獸藥殘留超標(biāo)的食品會對人體產(chǎn)生多種危害，主要有以下幾個方面：1.產(chǎn)生毒性反應(yīng)長期食用獸藥殘留超標(biāo)的食品，當(dāng)體內(nèi)蓄積藥物濃度達(dá)到一定量時，會對人體產(chǎn)生多種急慢性中毒。

獸藥殘留危害

2.產(chǎn)生耐藥菌株動物機體長期反復(fù)接觸某種抗菌藥物后，其體內(nèi)敏感菌株受到選擇性的抑制，從而使耐藥菌株大量繁殖，耐藥性細(xì)菌的產(chǎn)生使得一些常用藥物的療效下降甚至失去療效。3.產(chǎn)生致癌、致畸、致突變作用獸藥殘留危害4.過敏反應(yīng)許多抗菌藥物如青霉素、四環(huán)素類、磺胺類和氨基糖苷類等能使部分人群發(fā)生過敏反應(yīng)甚至休克，并在短時間內(nèi)出現(xiàn)血壓下降、皮疹、喉頭水腫、呼吸困難等嚴(yán)重癥狀。5.腸道菌群失調(diào)有抗菌藥物殘留的動物源食品可對人類胃腸的正常菌群產(chǎn)生不良影響，造成人體內(nèi)菌群的平衡失調(diào)，導(dǎo)致長期腹瀉或引起維生素的缺乏等反應(yīng)。

獸藥殘留危害6.對生態(tài)環(huán)境質(zhì)量的影響一些性質(zhì)穩(wěn)定的藥物隨動物排泄物進(jìn)入環(huán)境中后仍能穩(wěn)定存在，造成環(huán)境中藥物殘留，對水、土壤、空氣等有潛在不良作用。7.影響畜牧業(yè)發(fā)展長期濫用藥物嚴(yán)重制約畜牧業(yè)的健康持續(xù)發(fā)展。Part05獸藥殘留檢測方法獸藥殘留檢測方法

常見的獸藥殘留檢測方法主要有：1.氣相色譜法2.液相色譜法3.酶聯(lián)免疫法4.液相色譜-串聯(lián)質(zhì)譜法。液相色譜-串聯(lián)質(zhì)譜儀定義定義

液相色譜法就是用液體作為流動相的色譜法。經(jīng)典液相色譜法流動相是依靠重力緩慢地流過色譜柱，因此固定相的粒度不可能太小(100μm～150μm左右)

分離后的樣品是被分級收集后再進(jìn)行分析的，使得經(jīng)典液相色譜不僅分離效率低、分析速度慢，而且操作也比較復(fù)雜，只能進(jìn)行簡單混合物的分離。

定義

高效液相色譜法（HPLC）是以經(jīng)典液相色譜為基礎(chǔ)，以高壓下的液體為流動相的色譜分析方法，使用粒度小于10μm的高效固定相，并采用高壓輸液泵和自動記錄的檢測器，克服了經(jīng)典液相色譜的缺點，也稱為高壓液相色譜。Part02HPLC特點HPLC特點

1.高壓流動相為液體，流經(jīng)色譜柱時，受到的阻力較大，為了能迅速通過色譜柱，必須對載液加高壓。2.高速分析速度快、載液流速快，比經(jīng)典液體色譜法速度快得多，通常分析一個樣品在15-30分鐘，有些樣品甚至在5分鐘內(nèi)即可完成，一般小于1小時。

HPLC特點

3.高效由于使用了細(xì)顆粒、高效率的固定相和均勻填充技術(shù)，高效液相色譜法分離效率極高。4.高靈敏度紫外、熒光、電化學(xué)、質(zhì)譜等高靈敏度檢測器的使用使HPLC檢測靈敏度非常高。HPLC特點

5.應(yīng)用范圍廣HPLC可用于高沸點、分子量大、熱穩(wěn)定性差的有機化合物及各種離子的分離分析，如氨基酸、蛋白質(zhì)、生物堿、核酸、維生素、抗生素等。6.高度自動化HPLC不僅能自動處理數(shù)據(jù)，繪圖和打印分析結(jié)果，還可以自動控制色譜條件，成為全自動化的儀器。

HPLC特點7.柱子可反復(fù)使用：用一根柱子可分離不同化合物。8.樣品量少、容易回收樣品經(jīng)過色譜柱后不被破壞，可以收集單一組分或做制備。9.流動相的選擇范圍廣可用多種溶劑作流動相，通過改變流動相組成來改善分離效果。10.餾分容易收集，更有利于制備。Part03HPLC的類型HPLC的類型1.液-固吸附色譜基于各組分在固體吸附劑表面上具有不同吸附能力而進(jìn)行分離。2.液-液分配色譜組分在兩相間經(jīng)過反復(fù)多次分配，各組分間產(chǎn)生差速遷移，從而實現(xiàn)分離。3.化學(xué)鍵合相色譜通過共價鍵將有機固定液結(jié)合到硅膠載體表面得到各種性能的固定相。4.離子交換色譜離子交換樹脂上可電離的離子與流動相中帶相同電荷的組分離子進(jìn)行可逆交換，由于親和力的不同而彼此分離。5.離子色譜用離子交換樹脂作為固定相，電解質(zhì)溶液為流動相，用電導(dǎo)檢測器檢測。6.凝膠色譜用多孔性凝膠作為固定相，基于試樣中各組分分子的大小和形狀不同來實現(xiàn)分離。根據(jù)固定相和分離機理的不同，HPLC可有以下幾種類型:Part04HPLC的基本原理HPLC的基本原理

HPLC和氣相色譜一樣，液相色譜分離系統(tǒng)也由兩相組成，即固定相和流動相。液相色譜的固定相可以是吸附劑、化學(xué)鍵合固定相（或在惰性載體表面涂上一層液膜）、離子交換樹脂或多孔性凝膠；流動相是各種溶劑。

HPLC的基本原理

高效液相色譜中分離混合物由流動相液體推動進(jìn)入色譜柱，根據(jù)各組分在固定相及流動相中的吸附能力、分配系數(shù)、離子交換作用或分子尺寸大小的差異進(jìn)行分離。Part05HPLC在食品行業(yè)中的應(yīng)用HPLC在食品行業(yè)中的應(yīng)用

隨著高效液相色譜法的不斷改進(jìn)與發(fā)展，目前在食品分析檢測領(lǐng)域有非常廣泛的應(yīng)用，主要用于保健食品的功效成分、營養(yǎng)強化劑、維生素、蛋白質(zhì)等成分的檢測。豬肉中克倫特羅殘留量檢測常用方法

克倫特羅，即鹽酸克倫特羅（CL），能夠促進(jìn)動物肌肉生長，尤其是促進(jìn)骨骼肌蛋白質(zhì)的合成，抑制動物脂肪生成，加速脂肪的轉(zhuǎn)化和分解，提高牲畜的瘦肉率，俗稱“瘦肉精”。

豬肉中克倫特羅殘留量檢測常用方法

鹽酸克倫特羅既不是獸藥，也不是添加劑，是腎上腺素類神經(jīng)興奮劑，性質(zhì)穩(wěn)定，要加熱至172℃才會分解，所以普通烹調(diào)方法根本無法破壞它的結(jié)構(gòu)，是嚴(yán)重危害畜牧業(yè)發(fā)展和畜產(chǎn)品安全的有毒物質(zhì)。豬肉中克倫特羅殘留量檢測常用方法

鹽酸克倫特羅使用后在豬體組織中形成殘留，尤其是在豬的肝臟等內(nèi)臟器官殘留較高，食用后直接危害人體健康。主要危害有：出現(xiàn)肌肉震顫、心慌、戰(zhàn)栗、頭疼、惡心、嘔吐等癥狀，特別是對高血壓、心臟病、甲亢和前列腺肥大等疾病患者危害更大，嚴(yán)重的可導(dǎo)致死亡。

豬肉中克倫特羅殘留量檢測常用方法

豬肉中鹽酸克倫特羅的檢測方法主要有高效液相色譜法（HPLC）、氣相色譜-質(zhì)譜聯(lián)用法（GC-MS）、生物傳感器技術(shù)Part01高效液相色譜法（HPLC）高效液相色譜法（HPLC）采用HPLC對鹽酸克倫特羅分析時不需要進(jìn)行衍生。其原理是C18或C8固定相能夠與腎上腺素能激動劑分子相互作用，采用反相柱和質(zhì)譜檢測器、紫外檢測器、電化學(xué)檢測器等對瘦肉精進(jìn)行檢測。高效液相色譜法（HPLC）HPLC具有高靈敏性、操作簡便、分析自動化、節(jié)省時間、重現(xiàn)性好、假陽性率低、檢測精度高等優(yōu)點。其缺點是對設(shè)備要求高、價格昂貴、檢測過程繁瑣、樣品處理時間長。Part02氣相色譜-質(zhì)譜聯(lián)用法（GC-MS）氣相色譜-質(zhì)譜聯(lián)用法（GC-MS）氣質(zhì)聯(lián)用通常用來檢測血液和組織中殘留的鹽酸克倫特羅。由于GC適用于有較低沸點和較高熱穩(wěn)定性的樣品，而鹽酸克倫特羅極性大沸點高，因此測定前要對其進(jìn)行衍生化。

氣相色譜-質(zhì)譜聯(lián)用法（GC-MS）其原理是在pH值為5.2的緩沖液中，樣品用芳基硫酸酯酶或者鹽酸葡萄糖醛苷酶進(jìn)行消化，用MCX小柱凈化萃取液，分離的殘留樣品通過雙三甲基硅烷基三氟乙酰胺（BSTFA）衍生后，采用GC-MS測定。氣相色譜-質(zhì)譜聯(lián)用法（GC-MS）GC-MS的優(yōu)點是重復(fù)性好、準(zhǔn)確性、檢測靈敏度高，但所需要的儀器設(shè)備非常昂貴。同時樣品前處理的技術(shù)要求很高、檢測過程繁瑣、難于操作，要求檢測人員專業(yè)性強且具有豐富的實際操作經(jīng)驗。Part03生物傳感器技術(shù)（BS）生物傳感器技術(shù)（BS）生物傳感器技術(shù)（BS）是將生物技術(shù)與微電子技術(shù)有機結(jié)合，采用生物體內(nèi)抗原、抗體專一性結(jié)合從而改變電化學(xué)的特性設(shè)計成免疫生物傳感器。

生物傳感器技術(shù)（BS）將鹽酸克倫特羅單克隆抗體微型化膜固定在換能器的表面，加入已知濃度的酶標(biāo)激素于待測樣品中，CL與標(biāo)記抗原競爭性地附著在電極上的抗體，電極經(jīng)過洗滌后與底物溶液接觸，標(biāo)記酶與底物發(fā)生化學(xué)反應(yīng)，轉(zhuǎn)變出來的電信號經(jīng)過輸出、處理分析直接顯示殘留CL的含量。

生物傳感器技術(shù)（BS）生物傳感器是采用生物活性物質(zhì)作為敏感元件，與其他同類物質(zhì)交叉反應(yīng)低，特異性強，缺點是靈敏度低，反應(yīng)時間長。Part04酶聯(lián)免疫吸附法（ELISA）酶聯(lián)免疫吸附法（ELISA）反應(yīng)在已包被有鹽酸克倫特羅抗體的塑料微孔中進(jìn)行，將鹽酸克倫特羅標(biāo)準(zhǔn)品或樣品、酶標(biāo)物加入微孔，溫浴時，游離的和酶標(biāo)記的鹽酸克倫特羅競爭結(jié)合鹽酸克倫特羅抗體的結(jié)合位點。

酶聯(lián)免疫吸附法（ELISA）所有未反應(yīng)的酶標(biāo)物在洗滌步驟中被清除，結(jié)