西藏靈芝的質量檢測及其鑒別研究 中藥學專業(yè)

前言西藏靈芝為多孔菌科真菌西藏靈芝Ganodermatibetanum的干燥子實體，一年四季均可采收入藥，是一種品種較為珍惜的藥用真菌。入藥時應先挑走夾在西藏靈芝中的雜草枯葉之類的其他雜質，再用剪刀剪去附著樹皮、泥沙或培養(yǎng)基的下端菌柄。保存時應先陰干或在40～50℃左右的溫度烘干，在密封，避光，干燥的條件下存放，避免冷藏導致藥材受潮。靈芝一藥，史載于《神農本草經》，稱靈芝有"益心氣"、"安精魂"、"補肝益氣"、"好顏色"、"久食可輕身不老，延年益壽"的功效。目前靈芝的品種較多，在世界上有記錄的約有110余種，《中國藥典》2015年版一部收載的靈芝為擔子菌類多孔菌科真菌赤Ganodermalucidum(Leyss.exFr.)Karst.或紫芝GanodermasinenseZhao,XuetZhang.的干燥子實體。根據《中國靈芝圖鑒》的記載，西藏靈芝多分布西藏、海南等省區(qū)。西藏靈芝以其干燥子實體入藥，有具有抗腫瘤、免疫調節(jié)、降血糖、抗氧化、抗過敏、降血脂、抗衰老作用、保肝護肝之功效[1]。西藏靈芝所含的化學成分比較復雜，目前研究較多的化學成分有：多糖類、三萜類、核苷類、甾醇類、生物堿類、氨基酸多肽類、無機元素、脂肪酸等。靈芝多糖是靈芝最主要的有效成分，具有提高機體的免疫力和耐缺氧能力，抑制腫瘤，消除自由基等藥理活性。靈芝中的三萜類成分是靈芝中一類特有的成分，種類很多，它們是靈芝的苦味成分，其含氧官能團對苦味的產生起重要作用，具有解毒，保肝，抗腫瘤，抗炎等功效。此外，靈芝中含有一定量的核苷類，甾醇，氨基酸和無機元素，分別具有抗病毒，抗腫瘤，提高血液供氧能力，保健等功能[2-4]。張輝等[5]使用高效陰離子交換色譜（HPAEC），甲基化和GLC-MS分析以及1D和2D系統(tǒng)重新闡明靈芝生物活性多糖（PSG-1）的主鏈和支鏈特征的精細結構NMR光譜學。張麗霞等[6]研究發(fā)現靈芝多糖能顯著增強腹腔巨噬細胞的吞噬能力，增強小鼠免疫細胞活性。林秀仙等[7]實驗證明靈芝多糖的最佳提取條件為提取溫度100℃浸提時間2h浸提次數3次，料液比為1:30。孫曉梅等[8]開發(fā)了在超聲波輔助條件下提取，通過高效液相色譜（HPLC）與化學計量學手段相結合快速鑒別和區(qū)分不同靈芝的多糖的指紋分析方法實驗證明不同栽培方式、不同年份以及不同地區(qū)的靈芝三萜的含量和峰形均沒有明顯的影響，即用三萜類有效成分鑒別靈芝方法準確可靠，重復性好[9-10]。劉寧等[11]對提取方法進行考察，比較了超聲提取、氯仿回流，甲醇回流，結果表明甲醇回流效果最佳。黃書銘等[12]利用紫外分光光度法在提取三萜類化合物工藝的中間階段，即堿提的NaHCO3層進行檢測，根據標準曲線可計算出樣品中三萜類化合物的含量，從而快速檢測和定量分析靈芝中的三萜類成分。2儀器與材料2.1儀器電子天平(TP-214/LF225DR)、電熱干燥箱（東方-E型）、三用紫外分析儀（ZF-C型）、低速臺式離心機（TDL-80-2B）、電阻爐（SX2-2/S-10）、顯微鏡（FINDER）、紫外分光光度計(L6S)、超聲波處理器(KQ2000E)2.2材料試劑：分析純（甲醇，甲酸，乙醇，高氯酸，甲酸乙酯，乙酸乙酯，硫酸，蒽酮，香草醛，冰醋酸，石油醚）、蒸餾水。對照藥材：西藏靈芝對照藥材(中國食品藥品檢定研究院，批號：120968-201408）葡萄糖對照品（中國食品藥品檢定研究院，批號:110833-201205）齊墩果酸對照品（中國食品藥品檢定研究院，批號：110709-201206）西藏靈芝藥材（由中山市香港啟泰中藥飲片有限公司提供，產地均為西藏，批號：20180203、20180204、20180205）3實驗方法與結果3.1來源鑒別通過查找文獻，西藏靈芝子實體一年生。菌蓋半圓形或腎形，2.5～11.3cm×5.8～19.3cm，厚約0.5～3.2cm，表面由原基時的白色轉變至成熟后的橙黃色或絳紅色，有漆樣光華，表面有環(huán)狀輪紋，未成熟時子實體邊緣部分較鈍呈嫩白色；背面白色，孢子彈射后呈較淺的褐色；菌肉分層不明顯；菌柄側生、偏生或中生，長約5～8cm，粗約1～3cm，狀似圓柱形，一般菌柄內的菌肉為白色，外部的菌肉呈絳紅色與菌蓋同色。成熟后的子實體木質化，韌性增加，而西藏靈芝在剛采摘時的水分含量大約在51%～67%之間。西藏靈芝所屬的群落大部分以灌木層和草本層為主。群落中種類最多的科是菊科、薔薇科及禾本科。西藏野生靈芝主要分布林芝地區(qū)的工布江達縣、林芝縣、米林縣、波密縣和察隅縣等地，分布的海拔范圍在2050～3100米之間，主要腐生樹種是川滇高山櫟、通麥櫟和桃樹。以陽坡居多，由于靈芝生長需要潮濕環(huán)境，靈芝生存環(huán)境中的濕度多在70%～95%之間，對溫度的要求不是很高，一般在10～25℃之間，靈芝生長環(huán)境的樹木郁閉度一般在70%～90%之間，即“二三分陽七八分陰”[13]。圖1西藏靈芝原植物 圖2西藏靈芝原植物3.2原藥材鑒別本品為藥用真菌西藏靈芝的干燥子實體，子實體中等或稍大。菌蓋半圓形，腎形或近圓形，木栓質，寬5～15cm，厚0.8～1.0cm，紅褐色并有油漆光澤，菌蓋上具環(huán)棱紋和輻射狀皺紋，邊緣薄，往往內卷。菌肉白色至淡褐色。管孔面初期白色，后期變淺褐色、褐色，平均3～5個/mm。柄側生，與菌蓋近垂直，少數偏生呈扇狀，長8～15cm，粗1～3cm，紫褐色，有光澤。擔孢子褐色，卵形，中央含一個大油滴。表1西藏靈芝的三批樣品序號品名批號產地123西藏靈芝西藏靈芝西藏靈芝201802032018020420180205西藏西藏西藏圖3西藏靈芝樣品圖3.3顯微鑒別圖3西藏靈芝樣品圖3.3.1方法取藥用真菌西藏靈芝粉末少許，置于潔凈的載玻片上，滴加1—2滴香草醛冰醋酸溶液，輕輕蓋上蓋玻片，用鑷子小心排出載玻片與蓋玻片之間的氣泡，然后將預處理好的裝片置于顯微鏡下進行觀察。3.3.2結果菌絲近無色到帶褐色，有分枝，多彎曲，直徑1.5～6微米，壁厚，無隔膜。菌絲系統(tǒng)三體型:生殖菌絲透明，薄壁，分枝，直徑3～4微米；骨架菌絲淡黃褐色，厚壁到實心，樹狀分枝，骨架干直徑4～5微米，分枝末端形成鞭毛狀無色纏繞菌絲，纏繞菌絲厚壁，分枝，直徑1～2微米。孢子卵形，或頂端平截，雙層壁，外壁無色，平滑，內壁有小刺，淡褐色或近褐色，有時中間有一油滴，8.5～11.2(12.1)×5.2～6.9微米。如附錄圖4，5，6。3.4薄層色譜鑒別3.4.1樣品制備取本品粉末2g，加乙醇30ml，加熱回流30分鐘，濾過，濾液蒸干，殘渣加甲醇2ml使溶解，作為供試品溶液。另取靈芝對照藥材2g，同法制成對照藥材溶液。3.4.2薄層色譜條件照薄層色譜法（通則0502）試驗，吸取對照品溶液4μl，三次吸取樣品溶液4μl，分別點于同一硅膠G薄層板上，以石油醚（60～90℃）-甲酸乙酯-甲酸（15：5：1）的上層溶液為展開劑，展開，取出，晾干，置紫外光燈（365nm）下檢視。供試品色譜中，在與對照藥材色譜相應的位置上，顯相同顏色的熒光斑點。（結果見圖7）43214321注：1為對照藥材，2～4為供試品圖7西藏靈芝薄層色譜圖3.4.3結果如圖7，三個不同批號的西藏靈芝在對照品相應的位置上均可見到相同顏色的斑點，說明這三個不同批號的西藏靈芝藥材均含有與對照藥材相同的成分。3.5水分的測定3.5.1方法照水分測定法《中國藥典》2015年版四部通則0832第二法依法測定，不得超過17.0％。扁形稱量瓶恒重：取扁形稱量瓶置于烘箱內，打開瓶蓋在烘箱內105℃干燥5小時，將瓶蓋好，移置干燥器中，冷卻30分鐘，精密稱定重量，再在上述溫度干燥1小時，冷卻，稱重，重復干燥、稱重至連續(xù)兩次稱重的差異不超過0.3mg為恒重(W0)。取本品(2～5g)剪碎，平鋪于干燥至恒重的扁形稱瓶中，厚度不超過5mn，精密稱定為（W1），打開瓶蓋在105℃干燥5小時，將瓶蓋蓋好，移置干燥器中，冷卻30分鐘，精密稱定重量(W2)，再在上述溫度干燥1小時，冷卻，精密稱定重量(W2)。重復干燥、稱重至連續(xù)兩次稱重的差異不超過5mg。根據減失的重量，計算供試品中的含水量（％）。計算公式:式中：W1—樣品重量（g）W0—稱量瓶空瓶重量（g）W2—（稱量瓶＋樣品）干燥后重量（g）3.5.2結果表2西藏靈芝的水分含量測定（％）編號西藏靈芝批號空瓶重1（g）空瓶重2（g）樣品量（g）干燥后瓶+樣品1（g）干燥后瓶+樣品2（g）水分（%）水分平均（%）RSD（%）12018020350.964650.96445.065255.355255.354913.3213.40.4758.843258.84315.026263.194263.193813.4422018020450.856650.85655.041655.203455.203113.7913.780.1558.793158.79295.073563.168363.168213.7632018020552.308252.30805.017456.716956.716612.1312.140.1254.137654.13735.092158.610958.610712.15由表2可知，批號為20180203的西藏靈芝藥材平均水分含量為13.4％，批號為20180204的西藏靈芝藥材平均水分含量為13.8％，批號為20180205的西藏靈芝藥材平均水分含量為12.1％。三批不同批號的西藏靈芝藥材的平均水分含量為13.1％，均不超過17％，合格率100％。從藥材的水分含量來看，三個不同批號的西藏靈芝藥材均符合《中國藥典》2015年版四部通則0832第二法的要求。3.6總灰分的測定3.6.1方法照灰分測定法《中國藥典》2015年版四部通則2302法測定，總灰分不得超過3.2％。空坩堝恒重取坩堝置于高溫爐內，將蓋子斜蓋在坩堝上，經500～600℃熾灼約30～60分鐘，取出坩堝，稍冷片刻，移置干燥器內并蓋上蓋子，放冷至室溫，精密稱定坩堝重量，再在上述條件下熾為約30分鐘；取出，置干燥器內，放冷，稱重，重復熾灼直至連續(xù)兩次熾灼后的重量差異在0.3mg以下的重量即為恒重(W0)取本品約5.0g(已粉碎，可通過二號篩，并混合均勻)，置已熾灼至恒重的堝內，精密稱定為W1，置電爐上緩緩熾熱，避免燃燒，至完全炭化。將坩堝移置高溫爐內，蓋子斜蓋于坩堝上，在500～600C只灼使供試完全灰化。冷卻，稱重，重復熾灼直至連續(xù)兩次熾灼后的重量差異在0.3g以下的重量即為恒重，記為W2。(如供試品不易灰化，可將坩堝放冷，加熱水或10%硝酸銨溶液2ml使殘渣濕潤，然后置水浴上蒸干，殘渣照前法熾灼，至坩堝內容物完全灰化。)。根據殘渣重量，計算供試品中總灰分的含量（％）。計算公式式中：W1—樣品量（g）W0—空坩堝恒重（g）W2—（灰化后坩堝＋樣品）恒重（g）3.6.2結果表3西藏靈芝的總灰分含量測定（％）編號西藏靈芝批號坩鍋原始恒重1(g)坩鍋原始恒重2(g)取樣量(g)坩堝+供試品恒重1（g）坩鍋+供試品恒重2(g)總灰分（%）總灰分平均（%）RSD（%）12018020355.536255.53595.139855.650755.65052.232.261.5754.770554.77045.044154.885454.88522.2822018020454.584454.58425.073854.689854.68952.082.101.3556.317556.31735.152756.426656.42632.1232018020550.473850.47375.217650.596550.59632.352.360.6053.826353.82615.118453.947653.94732.37由表3可知，批號為20180203的西藏靈芝藥材總灰分含量為2.26％，批號為20180204的蘇西藏靈芝藥材總灰分含量為2.1％，批號為20180205的西藏靈芝藥材總灰分含量為2.36％。三批不同批號的西藏靈芝藥材的平均總灰分含量為2.24％，均不超過3.2％，合格率100％。從藥材的總灰分含量來看，三個不同批號的西藏靈芝藥材均符合《中國藥典》2015年版四部通則2302的要求。3.7水溶性浸出物的測定3.7.1方法照水溶性浸出物測定法《中國藥典》2015年版四部通則2201項下的熱浸法依法測定，不得少于3.0％。蒸發(fā)皿恒重：取蒸發(fā)皿置于烘箱內100～105℃干燥5小時，移置干燥器中，冷卻30分鐘，精密稱定重量，再在上述溫度干燥1小時，冷卻，稱重，重復干燥、稱重至連續(xù)兩次稱重的差異不起過0.3mg為恒重，記為W0。精密稱定供試品W1，置于250的提形瓶中，精密加入純化水100m1，塞緊，稱定重量，靜置1小時后，連接回流冷凝管，加熱至沸騰，并保持做沸1小時，放冷后，取下錐形瓶，密塞，稱定重量，用純化水補足減失的重量，搖勻，用干燥濾器濾過。精密量取液25m1，置于已干燥至恒重的蒸發(fā)皿中，在水浴上蒸干后，于105℃干燥3小時，置于干燥器中冷卻30分鐘，迅速精密稱定重量W2。計算公式：式中：W0—恒重的蒸發(fā)皿（g）W2—殘渣+蒸發(fā)皿干燥后總量（g）W1—樣品重（g）3.7.2結果表4西藏靈芝的水溶性浸出物含量測定（％）編號批號空蒸發(fā)皿重1（g）空蒸發(fā)皿重2（g）稱樣量（g）樣品+蒸發(fā)皿重（g）浸出物（%）平均值（%）RSD(%)12018020352.307152.30724.001252.36595.875.821.251.476351.47614.025951.53425.7722018020450.869650.86954.000950.92495.545.591.152.351752.35164.076152.4095.6332018020551.513851.51373.972951.57245.915.841.850.837250.83714.067250.89575.76由表4可知，批號為20180203的西藏靈芝藥材水溶性浸出物平均含量為5.82％，批號為20180204的西藏靈芝藥材水溶性浸出物平均含量為5.59％，批號為20180205的西藏靈芝藥材水溶性浸出物平均含量為5.84％。三批不同批號的西藏靈芝藥材的平均水溶性浸出物均不少于3.0％，合格率100％。從藥材的水溶性浸出物含量來看，三個不同批號的西藏靈芝藥材均符合《中國藥典》2015年版四部通則2201項下的熱浸法的要求。3.8靈芝多糖的測定和方法學考察3.8.1制備對照品標準曲線多糖對照品溶液的制備：取無水葡萄糖對照品適量，精密稱定，加水制成每lml含0.12mg的溶液，即得。標準曲線的制備精密量取對照品溶液.0.6、0.8、1.0、1.2ml，分別置10ml具塞試管中，各加水至2.0ml，迅速精密加人硫酸蒽酮溶液(精密稱取蒽酮0.1g，加硫酸100ml使溶解，搖勻)6ml，立即搖勻，放置15分鐘后，立即置冰浴中冷卻15分鐘，取出，以相應的試劑為空白，照紫外-可見分光光度法(通則0401)，在625nm波長處測定吸光度，以吸光度為縱坐標，濃度為橫坐標，繪制標準曲線。表5多糖對照品含量測定（％）對照品溶液123456濃度（ug/ml）24487296120144吸光度（A）0.0860.2110.2600.3520.4640.542多糖濃度（ug/ml）吸光度A多糖濃度（ug/ml）吸光度A圖10西藏靈芝多糖標準曲線3.8.2靈芝多糖的提取供試品溶液的制備：取本品粉末約2g，精密稱定，置圓底燒瓶中，加水60ml，靜置1小時，加熱回流4小時，趁熱濾過，用少量熱水洗滌濾器和濾渣，將濾渣及濾紙置燒瓶中，加水60ml，加熱回流3小時，趁熱濾過，合并濾液，置水浴上蒸干，殘渣用水5ml溶解，邊攪拌邊緩慢滴加乙醇75ml，搖勻，在4℃放置12小時，離心，棄去上清液，沉淀物用熱水溶解并轉移至50ml量瓶中，放冷，加水至刻度，搖勻，取溶液適量，離心，精密量取上清液3ml，置25ml量瓶中，加水至刻度，搖勻，即得。3.8.3精密度試驗精密吸取2ml經3.8.2項下得到的靈芝多糖提取物5份，用硫酸-蒽酮法處理后，在625mm波長下測吸光度，計算得RSD值為1.016%，證明儀器的精密度良好。結果見表6。表6精密度試驗結果編號12345平均值RSD（%）吸光度0.2530.2490.2540.2510.2480.2511.0163.8.4穩(wěn)定性試驗精密吸取2ml經3.8.2項下得到的靈芝多糖提取物，用硫酸-蒽酮法處理后，在625mm波長下測吸光度，每隔5min測定一次，計算得RSD值為0.455%，證明儀器和溶液的穩(wěn)定性良好。結果見表7。表7穩(wěn)定性試驗結果編號0min5min10min15min20min平均值RSD（%）吸光度0.2490.2500.2500.2510.2520.2500.4553.8.5多糖含量測定測定法：精密量取供試品溶液2ml，置10ml具塞試管中，照標準曲線制備項下的方法，自“迅速精密加入硫酸蔥酮溶液6m1”起，同法操作，測定吸光度，從標準曲線上讀出供試品溶液中無水葡萄糖的含量，計算，即得。本品按干燥品計算，含靈芝多糖以無水葡萄糖(CH12O)計，不得少于0.90%。計算公式：W=c*n/mC：代表供試品溶液中無水葡萄糖的量n：代表供試品溶液稀釋倍數m：代表供試品的重量3.8.6結果表8西藏靈芝的多糖含量測定（％）編號西藏靈芝批號吸光度（A）濃度（ug/ml）取樣量(g)多糖含量（%）多糖含量平均（%）1201802030.25266.71881.40120.95230.930.24965.92311.45830.90412201802040.25467.24931.48250.90720.900.25868.31031.53170.89203201802050.26169.10611.50270.91980.920.25768.04511.48010.9195由表8可知，批號為20180203的西藏靈芝藥材多糖平均含量為0.93％，批號為20180204的西藏靈芝藥材多糖平均含量為0.90％，批號為20180205的西藏靈芝藥材多糖平均含量為0.92％。三批不同批號的西藏靈芝藥材的多糖含量均不少于0.90％，合格率100％。從藥材的多糖含量來看，三個不同批號的西藏靈芝藥材均符合《中國藥典》2015年版四部通則2201的要求。3.9靈芝三萜類的測定和方法學考察3.9.1制備對照品標準曲線對照品溶液的制備：取齊墩果酸對照品適量，精密稱定，加甲醇制成每1ml含0.2mg的溶液，即得。標準曲線的制備精精密量取對照品溶液0.1、0.2、0.3、0.4、0.5ml，分別置15ml具塞試管中，揮干，放冷，精密加入新配制的香草醛冰醋酸溶液(精密稱取香草醛0.5g，加冰醋酸使溶解成10ml，即得)0.2ml、高氯酸0.8ml，搖勻，在70"℃水浴中加熱15分鐘，立即置冰浴中冷卻5分鐘，取出，精密加人乙酸乙酯4ml，搖勻，以相應試劑為空白，照紫外-可見分光光度法(通則0401)，在546nm波長處測定吸光度，以吸光度為縱坐標、濃度為橫坐標繪制標準曲線。表9三萜及甾醇對照品含量測定（％）對照品溶液123456濃度（ug/ml）20406080100144吸光度（A）0.1540.3720.5650.7300.9650.542三萜濃度（ug/ml）吸光度A三萜濃度（ug/ml）吸光度A圖11西藏靈芝三萜及甾醇標準曲線3.9.2靈芝三萜類的提取供試品溶液的制備：取本品粉末約2g，精密稱定，置具塞錐形瓶中，加乙醇50ml，超聲處理(功率率140W，頻率42kHz)45分鐘，濾過，濾液置100ml量瓶中，用適量乙醇，分次洗滌濾器和濾渣，洗液并入同一量瓶中，加乙醇至刻度，搖勻，即得。3.9.3精密度試驗精密吸取0.2ml經3.9.2項下得到的靈芝三萜提取物5份，用香草醛-冰醋酸法處理顯色，在546mm波長下測吸光度，計算得RSD值為1.051%，證明儀器的精密度良好。結果見表10。表10精密度試驗結果編號12345平均值RSD（%）吸光度0.1720.1690.1700.1720.1680.1701.0513.9.4穩(wěn)定性試驗精密吸取0.2ml經3.9.2項下得到的靈芝三萜提取物，用香草醛-冰醋酸法處理顯色，在546mm波長下測吸光度，每隔5min測定一次，計算得RSD值為0.668%，證明儀器和溶液的穩(wěn)定性良好。結果見表11。表11穩(wěn)定性試驗結果編號0min5min10min15min20min平均值RSD（%）吸光度0.1690.1700.1710.1710.1720.1710.6683.8.5三萜含量測定測定法：精密量取供試品溶液0.2ml，置15ml具塞試管中，照標準曲線制備項下的方法，自“揮干”起，同法操作，測定吸光度，從標準曲線上讀出供試品溶液中齊墩果酸的含量，計算，即得。本品按干燥品計算，含三萜及甾醇以齊墩果酸(CH4sO3)計，不得少于0.50%。計算公式：W=c*n/mC：代表供試品溶液中齊墩果酸的量n：代表供試品溶液稀釋倍數m：代表供試品的重量3.9.6結果表12西藏靈芝的三萜及甾醇含量測定（％）編號西藏靈芝批號吸光度（A）濃度（ug/ml）取樣量(g)三萜含量（%）三萜含量平均（%）1201802030.17120.98992.01820.520.530.15319.17171.80120.532201802040.16420.28281.96150.520.520.17221.09092.02740.523201802050.17621.49501.98560.540.540.17821.69702.03710.53由表12可知，批號為20180203的西藏靈芝藥材三萜及甾醇平均含量為0.53％，批號為20180204的西藏靈芝藥材三萜及甾醇平均含量為0.52％，批號為20180205的西藏靈芝藥材三萜及甾醇平均含量為0.54％。三批不同批號的西藏靈芝藥材的三萜及甾醇含量均不少于0.50％，合格率100％。從藥材的三萜及甾醇含量來看，三個不同批號的西藏靈芝藥材均符合《中國藥典》2015年版四部通則2201的要求。4結論參考《中國藥典》2015年版四部檢查通則的方法，對中藥材西藏靈芝的質量控制方法進行研究，包括顯微鑒別、薄層板鑒別、水分檢查、總灰分檢查、水溶性浸出物檢查，靈芝多糖檢測，靈芝三萜類和甾醇的檢測并根據檢測結果初步擬定其質量標準的范圍，為西藏靈芝的質量標準研究提供依據。其中水分含量不得超過15.7％，總灰分含量不得超過2.7％，水溶性浸出物不得少于4.6％，多糖含量不少于0.7%，三萜及甾醇類含量不少于0.4%。5討論中藥材西藏靈芝在薄層色譜鑒別上，由于其成分復雜，且國內外對西藏靈芝成分的研究尚處于起步階段，因此在本實驗中以其對照藥材進行薄層色譜鑒別比較合適。對于水分，總灰分測定結果得出一個最大值，并以最大值的120%作為上限；水浸出物、多糖含量和三萜類及甾醇含量的測定則以最低測定值的80%為限得出值，以此作為下限，為初步制定西藏靈芝的質量標準研究提供依據。

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綜述西藏靈芝藥材質量研究現狀1前言西藏靈芝為多孔菌科真菌西藏靈芝Ganodermatibetanum的干燥子實體，全年采收，除去雜質，剪除附有朽木、泥沙或培養(yǎng)基質的下端菌柄，陰干或在40～50℃烘干保存，是十分珍惜的藥用真菌。根據《中國靈芝圖鑒》的記載，西藏靈芝主要分布西藏、海南等省區(qū)。西藏靈芝以其干燥子實體入藥，有具有抗腫瘤、免疫調節(jié)、降血糖、抗氧化、抗過敏、降血脂、抗衰老作用、保肝護肝之功效[1]。但是目前，國內外關于西藏靈芝化學成分、藥理活性及質量方面的研究報道較少，2.1藥源的研究高山櫟、通麥櫟和桃樹。具有益氣血，安心2.2產地根據《中國靈芝圖鑒》的記載，西藏靈芝主要分布西藏、海南等省區(qū)。西藏靈芝所屬的群落大部分以灌木層和草本層為主。群落中種類最多的科是菊科、薔薇科及禾本科。西藏野生靈芝主要分布林芝地區(qū)的工布江達縣、林芝縣、米林縣、波密縣和察隅縣等地，分布的海拔范圍在2050～3100米之間，主要腐生樹種是川滇高山櫟、通麥櫟和桃樹。以陽坡居多，由于靈芝生長需要潮濕環(huán)境，靈芝生存環(huán)境中的濕度多在70%～95%之間，對溫度的要求不是很高，一般在10～25℃之間。靈芝生長環(huán)境的樹木郁閉度一般在70%～90%之間，即“二三分陽七八分陰”[2]。2.3臨床應用西藏靈芝以其干燥子實體入藥，具有益氣血，安心神，健脾胃的功效。西藏靈芝性平、味甘、無毒，歸肺、心、脾經。主治虛勞，心悸，失眠，頭暈，神疲乏力，久咳氣喘，冠心病，矽肺，腫瘤。臨床應用上，西藏靈芝在增強人體免疫力，調節(jié)血糖，控制血壓，輔助腫瘤放化療，保肝護肝，促進睡眠等方面頗具療效。本品為藥用真菌西藏靈芝的干燥子實體，子實體中等或稍大。菌蓋半圓形，腎形或近圓形，木栓質，寬5～15cm，厚0.8～1.0cm，紅褐色并有油漆光澤，菌蓋上具環(huán)棱紋和輻射狀皺紋，邊緣薄，往往內卷。菌肉白色至淡褐色。管孔面初期白色，后期變淺褐色、褐色，平均3～5個/mm。柄側生，與菌蓋近垂直，少數偏生呈扇狀，長8～15cm，粗1～3cm，紫褐色，有光澤。擔孢子褐色，卵形，中央含一個大油滴。菌絲近無色到帶褐色，有分枝，多彎曲，直徑1.5～6微米，壁厚，無隔膜。菌絲系統(tǒng)三體型:生殖菌絲透明，薄壁，分枝，直徑3～4微米；骨架菌絲淡黃褐色，厚壁到實心，樹狀分枝，骨架干直徑4～5微米，分枝末端形成鞭毛狀無色纏繞菌絲，纏繞菌絲厚壁，分枝，直徑1～2微米。孢子卵形，或頂端平截，雙層壁，外壁無色，平滑，內壁有小刺，淡褐色或近褐色，有時中間有一油滴，8.5～11.2(12.1)×5.2～6.9微米。取藥用真菌西藏靈芝粉末少許，置于潔凈的載玻片上，滴加1—2滴香草醛冰醋酸溶液，輕輕蓋上蓋玻片，用鑷子小心排出載玻片與蓋玻片之間的氣泡，然后將預處理好的裝片置于顯微鏡下進行觀察。取本品粉末2g，加乙醇30ml，加熱回流30分鐘，濾過，濾液蒸干，殘渣加甲醇2ml使溶解，作為供試品溶液。另取靈芝對照藥材2g，同法制成對照藥材溶液。照薄層色譜法（通則0502）試驗