麻杏石甘湯配伍對(duì)其解熱作用的影響

麻杏石甘湯配伍對(duì)其解熱作用的影響

均勻混合設(shè)計(jì)方法1是一種結(jié)合混合設(shè)計(jì)和均勻設(shè)計(jì)的實(shí)驗(yàn)設(shè)計(jì)方法。它可以用來選擇不同的化學(xué)品，也可以用來優(yōu)化和研究中藥溶液的結(jié)構(gòu)。2-3。該法通過試驗(yàn)和統(tǒng)計(jì)建模,可以方便地找到一個(gè)最佳配比。麻杏石甘湯源自漢代醫(yī)圣張仲景的《傷寒論》,該方配伍精當(dāng),簡單易行,被后世醫(yī)家廣泛應(yīng)用［4］。然該方依舊存有頗多爭論,主要集中在:1針對(duì)療熱,方中何藥為君;2石膏與麻黃用量配比的問題。基于上述問題,本研究采用混料均勻設(shè)計(jì)法改變麻杏石甘湯的各組方藥味的配比,得到組方各藥味發(fā)生系列放大或縮小變化的新方,探尋其解熱作用量效變化規(guī)律。1藥品、試劑與儀器1.1藥材方中藥材由江西中醫(yī)藥大學(xué)中藥固體制劑制造技術(shù)國家工程研究中心鑒定并提供。麻黃藥材為麻黃科植物木賊麻黃EphedraequisetinaBge.的干燥草質(zhì)莖;苦杏仁藥材為薔薇科植物山杏PrunusarmeniacaLvar.ansaMaxim.的干燥成熟種子;生石膏為硫酸鹽類礦物硬石膏族石膏GypsumFibrosum;甘草為豆科植物甘草GlycyrrhizauralensisFisch.的干燥根及根莖。麻黃、苦杏仁、炙甘草、生石膏4味藥材均為2010年版《中國藥典》收載品種。1.2動(dòng)物健康SD大鼠200只,雄性,SPF級(jí),體重(200±20)g,由湖南斯萊克景達(dá)實(shí)驗(yàn)動(dòng)物有限公司提供,許可證號(hào)SCXK(湘)2009-0004。室溫(20±2)℃,相對(duì)濕度40%~60%,晝夜光照節(jié)律12h:12h,自由飲水,飼固體飼料,適應(yīng)性喂養(yǎng)1周后開始試驗(yàn)。1.3試劑氯化鈉注射液(江西科倫藥業(yè)有限公司);肝素鈉(批號(hào)301A024,北京索萊寶科技有限公司);大腸桿菌內(nèi)毒素(LPS,lippolysaccharidefromEscherichiacoli055:B5,批號(hào)L8880,Sigma);戊巴比妥納(批號(hào)P7361,Sigma);大鼠前列腺素E2(PGE2)定量酶聯(lián)免疫試劑盒(L121102047,武漢尤爾生)。1.5處方來源本次實(shí)驗(yàn)使用的對(duì)照原方為北京廣安門醫(yī)院多年臨床療熱所用的中劑量用量,即麻黃(6g)、杏仁(6g)、炙甘草(6g)、石膏(24g)。1.6麻杏石甘湯混料均勻設(shè)計(jì)方案利用DPS軟件,按文獻(xiàn)［1］選用混料均勻設(shè)計(jì)表Un(ns－1)來安排實(shí)驗(yàn),其中n為實(shí)驗(yàn)次數(shù)和水平數(shù),s為待考察的因素?cái)?shù)。即對(duì)復(fù)方中4個(gè)因素各取12個(gè)不同的水平并設(shè)計(jì)成12種配方進(jìn)行考察。另設(shè)臨床常用方組,麻黃、苦杏仁、炙甘草、生石膏按6∶6∶6∶24組成。與N1-N12組成基于混料均勻設(shè)計(jì)的麻杏石甘湯配伍用藥方案,見表1。1.7麻杏石甘湯藥液的制備煎煮方法:按照混料均勻設(shè)計(jì)表中各處方量稱取各藥材,稱取麻黃藥材、石膏藥材,加入方藥總量的8倍水,浸泡30min,加熱至沸騰,開始計(jì)時(shí),然后改用小火煎煮30min,再加入甘草、苦杏仁煎煮40min,趁熱過濾,濃縮,定容至1g生藥/mL,即得麻杏石甘湯湯劑。2模型大鼠臟器血流學(xué)elisa法2.1動(dòng)物篩選分組造模前連續(xù)4d,每日1h內(nèi)測量大鼠直腸溫兩次。測量時(shí)盡量固定插入深度,每次測溫后查看插入大鼠肛門距離(5~6cm左右)。將體溫波動(dòng)(ΔT,>0.5℃)及單次體溫高于38℃的大鼠剔除。篩選出的溫度合格大鼠根據(jù)溫度隨機(jī)分為15組。標(biāo)記并稱重,每組13只:空白組,內(nèi)毒素組,麻杏石甘湯給藥組。2.2造模方法造模前大鼠禁食12h,不禁水。實(shí)驗(yàn)前1h測2次直腸溫度,取平均值作為基礎(chǔ)溫度,將ΔT>0.5℃及單次體溫高于38℃的大鼠剔除。模型組及給藥組動(dòng)物分別以20μg·kg－1尾靜脈注射10mg·L－1LPS溶液,空白對(duì)照組iv相應(yīng)體積生理鹽水,給藥組分別ig劑量N1-13的麻杏石甘湯(按10mL·kg－1的給藥劑量均為4.2g·kg－1)后立即尾靜脈內(nèi)毒素造模(20μg·kg－1),空白組、模型組灌胃生理鹽水(10mL·kg－1體重)。注射內(nèi)毒素后,每0.5h測定肛溫,連續(xù)觀察9h。2.3觀測指標(biāo)和檢測方法2.3.1體溫上升高度測定造模后發(fā)熱高峰期(造模后6.0h)測量大鼠體溫,計(jì)算體溫上升的差值ΔT(體溫升高值與基礎(chǔ)體溫之差)。計(jì)算發(fā)熱抑制率和體溫反應(yīng)指數(shù)(thermalresponseindex,TRI6.0),TRI是一個(gè)客觀的定量指標(biāo),其計(jì)算方法以體溫值為縱坐標(biāo),時(shí)間值為橫坐標(biāo),橫坐標(biāo)為體溫基線,體溫反應(yīng)曲線與基線間的面積值即為TRI。2.3.2血漿PGE2含量測定造模后6h(發(fā)熱達(dá)峰點(diǎn))測量體溫后每組6只立即腹腔注射3%戊巴比妥鈉(15mg·kg－1體重)麻醉,心臟取血置于含肝素鈉EP管中,立即3000r·min－1離心10min后取上層血漿分裝,置于-20℃冰箱中待測。采用酶聯(lián)免疫吸附法,測定血漿PGE2含量。具體操作步驟按Elisa試劑盒說明書進(jìn)行。2.4統(tǒng)計(jì)學(xué)方法各組數(shù)據(jù)用ue0af±s表示,多組數(shù)據(jù)采用單因素方差分析檢驗(yàn),應(yīng)用SPSS17.0軟件進(jìn)行統(tǒng)計(jì)學(xué)處理。以P<0.05為差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。采用DPS數(shù)據(jù)處理系統(tǒng)對(duì)以上的試驗(yàn)結(jié)果進(jìn)行二次多項(xiàng)式逐步回歸分析,并對(duì)該模型和回歸系數(shù)進(jìn)行顯著性檢驗(yàn)。3熱模型大鼠體溫反應(yīng)指數(shù)的變化3.1對(duì)內(nèi)毒素致熱大鼠溫度影響結(jié)果顯示正常組在給藥后,溫差在0.5℃波動(dòng)屬正?，F(xiàn)象;模型組體溫波動(dòng)明顯大于空白組;其余各給藥組都呈現(xiàn)不同程度的解熱作用,差異有顯著性意義(P<0.05,P<0.01)。3.2對(duì)內(nèi)毒素致熱大鼠發(fā)熱抑制率影響結(jié)果顯示:與模型組比較,各配伍組均能不同程度的抑制LPS誘導(dǎo)的發(fā)熱大鼠的熱勢,差異有顯著性意義(P<0.05,P<0.01);與臨床常用方組比較,配比N3,N6,N7,N12組的發(fā)熱抑制率低于臨床常用方,即臨床常用方解熱效果優(yōu)于上述配比組,差異有顯著性意義(P<0.05),見表3。3.3對(duì)內(nèi)毒素致熱大鼠PGE2水平的影響模型組大鼠血漿PGE2水平高于空白組;給藥組PGE2水平均低于模型組;配比組與臨床方相比,各個(gè)配比組差異不一,其中配比5,9,12與原方組的差異有顯著性意義,原方組的PGE2水平低于配比5,9,12組,見表3。3.4對(duì)內(nèi)毒素致熱大鼠TRI6.0的影響3.4.1數(shù)據(jù)結(jié)果模型組大鼠體溫反應(yīng)指數(shù)明顯高于空白組;與模型組相比,給藥組均低于模型組,除了配比2,6,7,12,其余各組體溫降低(P<0.05,P<0.01);與臨床常用方相比,配比2,3,6,7,12的解熱作用劣于臨床方組(P<0.05),見表3。3.4.2二次多項(xiàng)式逐步回歸分析對(duì)體溫反應(yīng)指數(shù)所得到的實(shí)驗(yàn)數(shù)據(jù)進(jìn)行回歸分析,并對(duì)其進(jìn)行顯著性檢驗(yàn)。Y=7.36664+3.26737X1-6.16475X4X4-7.35872X2X3,相關(guān)系數(shù)R=0.96111,Ra=0.94780,決定系數(shù)(R2)=0.92374,Durbin-Watson統(tǒng)計(jì)量d=1.871,P=0.00002,說明該方程能很好地?cái)M合各種配比對(duì)LPS致熱模型大鼠的體溫反應(yīng)指數(shù)的影響,所以模型準(zhǔn)確有效。按表4中各個(gè)變量顯著性檢驗(yàn)P值的大小,可以體溫反應(yīng)指數(shù)影響的強(qiáng)弱程度為:X24>X1>X2X3?？梢钥闯鲞@些因數(shù)對(duì)LPS致熱模型大鼠的體溫反應(yīng)指數(shù)的影響都很顯著,同時(shí),X2和X3之間存在明顯的交互作用(P<0.05)。通過對(duì)圖1的分析,可了解苦杏仁與炙甘草的交互作用對(duì)發(fā)熱模型大鼠體溫反應(yīng)指數(shù)的影響:當(dāng)X1X4用量固定時(shí),隨著X2用量的增加和X3用量的增加,體溫反應(yīng)指數(shù)呈現(xiàn)下降的趨勢,X2X3的綜合作用是降低體溫反應(yīng)指數(shù),即增強(qiáng)解熱用。最佳配比組合Y=0.01409X1+0.17860X2+0.17859X3+0.62873X4,最佳配比劑量為麻黃0.6g,杏仁7.5g,甘草7.5g,石膏26.4g。4最佳配比的確定與分析中藥方劑的配伍,概括起來有“君、臣、佐、使”及“七情合和”理論,但中藥方劑不僅僅只是藥味的配伍,“中醫(yī)不傳之密在于量”,藥量的配伍是中醫(yī)方劑發(fā)揮療效的重中之重,劑量的大小直接影響著藥物的療效。中藥方劑配伍研究是方藥量效關(guān)系闡釋的一大難點(diǎn)。目前的研究熱點(diǎn)集中在通過拆方研究,以藥效學(xué)為指標(biāo),探討傳統(tǒng)方劑的組方原理［5］。麻杏石甘湯由麻黃、苦杏仁、炙甘草和生石膏配伍而成。從化學(xué)成分的藥理效應(yīng)而言,麻杏石甘湯各主要活性成分具表現(xiàn)出一定程度的抗炎活性和解熱作用［6-10］。但在麻杏石甘湯的解熱作用中,是石膏的效應(yīng)強(qiáng)還是麻黃的作用大,抑或是其他組分的效應(yīng)占主導(dǎo),即何者為解熱之君一直是爭論的焦點(diǎn)。同時(shí)麻黃與石膏在原方中的配比劑量問題也亟待探討。本研究采用二次多項(xiàng)式逐步回歸分析對(duì)與解熱效應(yīng)相關(guān)的體溫反應(yīng)指數(shù)進(jìn)行回歸分析。結(jié)果表明,影響體溫反應(yīng)指數(shù)的因素為石膏>麻黃>苦杏仁與甘草的交互作用?？嘈尤?X2)和炙甘草(X3)之間的交互作用有顯著性意義(P<0.05)。體溫反應(yīng)指數(shù)能在一定程度概括體溫曲線的發(fā)熱潛伏期、熱勢和恢復(fù)期的體溫變化,與單一時(shí)刻的發(fā)熱抑制率相比,更能概括藥物在體溫變化全過程中的作用,特別是對(duì)起效慢、效用持續(xù)時(shí)間久的中藥成分的解熱效應(yīng)的表征更為全面。基于上述分析本文認(rèn)為對(duì)于療熱作用,方中石膏起主要作用,最佳配比劑量為麻黃0.6g,杏仁7.5g,甘草7.5g,石膏26.4g。與臨床常用方麻黃6g,杏仁6g,甘草6g,石膏24g,在石膏用量差別不大,在其余3味藥用量差別較大,這可能與臨床隨證施量有關(guān),其余3味藥的作用及機(jī)制有待于針對(duì)適宜動(dòng)物模型的進(jìn)一步研究。1.4儀器TGA3581/萬